Patente nacional por "Nuevo complejo biomimético antioxidante para la protección integral frente a la radiación solar, método de obtención y estabilización"

Reivindicaciones:
+ ES-2956660_A11. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, caracterizado, por comprender las siguientes fases: a. Cultivo de cianobacterias hasta alcanzar OD750 = 0, 7-0.8 nm, en biorreactor de tanque agitado (600-800 cm3/min de aire est�ril, 5.- 75 rpm de agitaci�n, pH 7, 5-8, 25-30�C de temperatura, 16:8-14:10 h de luz: oscuridad con luz natural o 17-25 W/m2 con fluorescente de luz blanca) . b. Exposici�n a radiaci�n UV-A (4-7 W/m2) y UV-B (1-2 W/m2) durante 6-10 d�as (8-12 horas al d�a) para estimular la s�ntesis de fotoprotectores. c. Centrifugado a m�s de 5000 g, al menos 15 min, y desecaci�n de la biomasa en estufa a 50�C. d. Extracci�n por maceraci�n en frio con solvente org�nico durante 16-24 h. e. Centrifugaci�n a m�s de 8000 g, 15-20 min para eliminaci�n de s�lidos y evaporaci�n de disolvente para obtener producto en polvo. 2. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, caracterizado, por la obtenci�n simult�nea de sustancias antioxidantes (glutati�n y melatonina) por proceso fermentativo de S. cerevisiae y que comprende las siguientes fases: a. Cultivo de levadura durante 48-72 h en melaza diluida (15-20 g/L) y suplementada con glucosa D-glucosa (8-10 g/L) . Trp (0, 5-1 g/L T = 0) , Cys (0, 2-0, 4 g/L, T = 2h) y Glu (1, 5-2, 5 g/L, T = 7h) , en biorreactor de tanque agitado (600-800 cm3/min de aire est�ril, 200-300 rpm de agitaci�n, pH 5-6, 25-30�C de temperatura) . b. Filtraci�n del producto resultante por membranas planas porosas. c. Liposomado del extracto rico en antioxidantes. 3. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 1 y 2 caracterizado, por comprender una preparaci�n de un nuevo complejo antioxidante fotoprotector mediante la mezcla del extracto de cianobacterias (enriquecido en escitoneminas) con el extracto de levaduras (enriquecido en glutati�n y melatonina) , obtenidos en cualquier proporci�n, para la protecci�n integral frente a la radiaci�n solar. 4. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 3 caracterizado, por comprender adem�s clorofila a, carotenoides y/o ficobiliprote�nas procedentes del extracto de cianobacterias. 5. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 2 caracterizado, por comprender la aplicaci�n de campo magn�tico de 70-100 pT adicional para maximizar la producci�n de glutati�n y melatonina. 6. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 3 y 4 caracterizado, por comprender la estabilizaci�n del complejo antioxidante fotoprotector (reivindicaciones 3 y 4) mediante la solubilizaci�n en mezclas de aceites vegetales para su mejor protecci�n frente a procesos de degradaci�n. 7. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 6 caracterizado, por comprender una composici�n cosm�tica estabilizada. 8. NUEVO COMPLEJO BIOMIM�TICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 6 caracterizado, por comprender el uso del complejo antioxidante fotoprotector estabilizado en la preparaci�n de productos cosm�ticos para la protecci�n de piel humana o cualquier superficie frente a la radiaci�n solar. 9 . NUEVO COMPLEJO BIOMIMETICO ANTIOXIDANTE PARA LA PROTECCI�N INTEGRAL FRENTE A LA RADIACI�N SOLAR, M�TODO DE OBTENCI�N Y ESTABILIZACI�N, seg�n reivindicaci�n 8 caracterizado, por comprender la preparaci�n de un producto con actividad antiproliferativa, antitumoral y/o antiinflamatoria.

Los productos y servicios protegidos por este registro son:
A61K 8/49 - A61Q 17/04 - C07D 209/70 - C07D 209/16 - C07K 5/037

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+ ES-2956660_A1 Nuevo complejo biomim�tico antioxidante para la protecci�n integral frente a la radiaci�n solar, m�todo de obtenci�n y estabilizaci�n Sector de la t�cnica La invenci�n propuesta se encuadra dentro de los sectores biotecnol�gico, cosm�tico y farmac�utico. Antecedentes de la invenci�n La radiaci�n UV que de forma constante recibe la Tierra en forma de luz ultravioleta (UV) del Sol, resulta ser una fuente de energ�a vital para los organismos fotoaut�trofos, pero la dependencia que estos organismos tienen de la luz solar los hace estar expuestos a radiaci�n UV que puede causar un dar directo o indirecto en su material gen�tico (ADN, ARN) y prote�nas, vi�ndose afectadas funciones biol�gicas debido a la producci�n de especies reactivas de oxigeno (ROS) (Fuentes-Tristan et al, 2019) . Esto es debido a que dicha radiaci�n es la m�s peligrosa del espectro solar al poder atravesar la epidermis y alcanzar la dermis superior. Aunque el ser humano est� biol�gicamente preparado para defenderse del da�o causado por la radiaci�n UV (gracias, por ejemplo, al oscurecimiento de la piel por la producci�n de melanina o de antioxidantes como el glutati�n) , en las �ltimas d�cadas, y debido al estrechamiento de la capa de ozono por la contaminaci�n atmosf�rica, la exposici�n a estos rayos UV da�inos se ha visto aumentada (Milito et al, 2021) . La radiaci�n UV puede inducir da�os en el ADN, ARN y las prote�nas dependiendo de su longitud de onda. La UV-A causa da�os indirectos a trav�s de intermediarios ROS, mientras que la UV-B causa da�os tanto directos como indirectos y a veces produce d�meros de pirimidina ciclobutano (CPD) . La exposici�n a UV-B es potencialmente da�ina para todos los organismos vivos, especialmente los que son fotosint�ticos. La UV - C es la m�s da�ina de todas, con acci�n bactericida y bacteriost�tica y fuerte mutagenicidad, aunque es absorbida en su mayor�a por la capa de ozono (Skotarczak et al, 2015) . En los primeros tiempos de la vida en la Tierra, cuando el flujo de radiaci�n UV-B era m�s acusado que en la actualidad, las formas de vida existentes tuvieron que evolucionar con diferentes mecanismos de defensa frente a dicha radiaci�n. Las fases de la activaci�n de los mecanismos de defensa presentes en microorganismos son (Figura 1) : i. Escape de la radiaci�n UV. La primera l�nea de defensa consiste en que los microorganismos migran de zonas con altos niveles de radiaci�n UV a zonas donde hay menos, producen barreras f�sicas como tapetes o costras, cambian su morfolog�a para incrementar el "auto-sombreado" (self-shading) o sintetizan polisac�ridos extracelulares. ii. Activaci�n del sistema antioxidante. Cuando el primer mecanismo no es suficiente, la radiaci�n UV alcanza el interior celular produciendo ROS que resultan en estr�s oxidativo, Las cianobacterias activan el sistema antioxidante mediante mol�culas antioxidantes de dos tipos: a. Enzim�ticas: super�xido dismutasa, catalasa y glutati�n peroxidasa, ascorbato peroxidasa, mono deshidroascorbato reductasa y glutati�n peroxidasa) . b. No enzim�ticas: carotenoides, tocoferoles, hidroquinonas, flavonoides, �cido asc�rbico y glutati�n (GSH) reducido. iii. Producci�n de compuestos que absorben la radiaci�n UV. Las cianobacterias y otros organismos acu�ticos bajo exposici�n prolongada a radiaci�n UV sintetizan compuestos como amino�cidos de tipo micosporina (MMAs) , escitonemina, 3- hidroxiquinurenina, melanina y pigmentos fluorescentes que protegen de las radiaciones UV-A y UV-B. iv. Mecanismos de reparaci�n del da�o celular, como �ltimo recurso si los tres mecanismos anteriores fallan. Las prote�nas da�adas deben ser re-sintetizadas, mientras que el ADN es reparado mediante mecanismos como la fotorreactivaci�n, escisi�n de nucle�tidos, bypass de d�meros o reparaci�n recombinatoria. La Organizaci�n Mundial de la Salud ha establecido una serie de recomendaciones en cuanto a la protecci�n solar, que incluyen: (1) limitar las horas de exposici�n de 10 a.m. a 4 p.m.; (2) comprobar el �ndice UV antes de planear actividades de exterior; (3) permanecer bajo estructuras que proyecten sombra, como �rboles o sombrillas, durante las horas m�s intensas de exposici�n, teniendo en cuenta que esto no provee de protecci�n completa; (4) llevar ropa y accesorios protectores, como gafas y sombreros; (5) utilizar cremas solares; (6) evitar las l�mparas de rayos UV. Por tanto, el uso de fotoprotectores est� entre estas seis estrategias clave para evitar el da�o inducido por radiaci�n UV. La gran mayor�a de los protectores solares comercializados contienen filtros de origen mineral y/o sint�tico. Los filtros f�sicos (minerales) incluyen nanopart�culas de �xido de titanio (TiO2) y �xido de zinc (ZnO) , lo suficientemente grandes para no penetrar en la piel, pero formar una barrera de protecci�n UV en la superficie de �sta. Para lograr este grado de protecci�n se requiere una capa gruesa de estos filtros, lo que deja una capa blanca sobre la piel, adem�s de poder ser comedog�nico (provocar imperfecciones por la obstrucci�n de los poros de la piel) . Por otro lado, se encuentran los filtros qu�micos dise�ados para absorber la radiaci�n UV y disiparla en forma de calor, como son benzofenona-3 (oxibenzona) , octocrileno y metoxicinamato de octilo (octinoxato) , muy eficientes en la protecci�n de la piel frente a los da�os UV. Sin embargo, tienen un fuerte impacto en el medioambiente ya que han demostrado tener una alta persistencia y dispersi�n en el medio marino y en distintas fuentes de agua. Entre otros problemas de los filtros f�sicos y qu�micos encontramos la dermatitis, reacciones al�rgicas, penetraci�n y absorci�n en la dermis (algunas sustancias de bajo peso molecular como el �cido p-aminobenzoico, PABA) , inhibici�n del eritema (asociada a un mayor tiempo de exposici�n a la radiaci�n UV) , potencial inhibici�n de la s�ntesis de la vitamina D3 (con el consecuente riesgo de enfermedad cardiovascular y melanoma) y la discutida penetrabilidad en la piel de nanopart�culas de peque�o tama�o, pudiendo ocasionar mutaciones en el ADN bajo la influencia de luz UV (Skotarczak et al, 2015) . La oxibenzona y el octinoxano, adem�s, pueden absorberse y pasar a la circulaci�n sist�mica en cantidades lo suficientemente elevadas come para requerir m�s estudios sobre su posible bioseguridad, y varios estudios los han relacionado con alteraciones en el desarrollo fetal y reportado su actividad como disruptores endocrinos en ensayos in vitro, aunque est� por determinar si tienen efectos negativos en humanos a largo plazo (Suh et al, 2020) . No obstante, los consumidores cada vez son m�s conscientes de la procedencia de los productos que utilizan, si son de origen sint�tico o natural y si son eco-friendly y sostenibles. A pesar de saber que las cremas solares son una importante herramienta en la lucha contra el c�ncer de piel, sus formulaciones necesitan mejorarse para que contengan ingredientes m�s seguros y hacerlos m�s resistentes al agua, especialmente en vista de las preocupaciones planteadas sobre la posible ecotoxicidad de algunos protectores solares para el medioambiente marino, as� como a la salud humana. Por ejemplo, a partir del 1 de enero de 2021, algunos protectores solares que contienen filtros sint�ticos UV como la xibenzona y octinoxato han sido prohibidos en Haw�i por su presunto da�o a los arrecifes de coral y la vida marina. Estos filtros UV, junto con otros, tambi�n han sido objeto de escrutinio por su posible toxicidad en relaci�n con la reproducci�n y el desarrollo de varios organismos. Por lo tanto, descubrir y aprobar nuevos compuestos de protecci�n solar con menos inconvenientes y de origen natural podr�a aliviar estas preocupaciones cada vez m�s crecientes y aumentar el uso de protectores solares. Recurrir a la naturaleza para reemplazar los productos qu�micos sint�ticos es una tendencia creciente tanto en el sector cosm�tico como en el farmac�utico, donde hay un aumento en la demanda de alternativas v�lidas de origen natural. En este contexto, recientemente se ha prestado atenci�n a los productos qu�micos fotoprotectores producidos por microorganismos fotosint�ticos, con mecanismos de defensa seleccionados de forma natural gracias a millones de a�os de evoluci�n por exposici�n prolongada a estas radiaciones. De hecho, la enorme biodiversidad de estos organismos, tanto marinos como de agua dulce, representa una fuente de compuestos con actividad protectora frente a radiaci�n UV que se producen de forma natural, los cuales se pueden utilizar para aplicaciones cosmec�uticas como alternativas ecol�gicas y m�s seguras a los filtros UV sint�ticos (Milito et al, 2021) . Las cianobacterias (tambi�n algas verdeazuladas, algas cian�fitas o cianof�ceas) son el grupo m�s primitivo de procariotas fotosint�ticos Gram negativos que han evolucionado con ox�geno. Aparecieron en la Tierra durante la era Prec�mbrica (hace entre 2800 y 3500 millones de a�os) , cuando todav�a no se habla formado la capa de ozono, Por tanto, de su actividad fotosint�tica se cre� un ambiente oxig�nico que permiti� la evoluci�n de la vida existente. Son de naturaleza ubicua, encontr�ndose tanto en aguas termales como en las regiones polares, y son un gran productor de biomasa tanto en ecosistemas acu�ticos como terrestres. Estas bacterias contribuyen a la fijaci�n del nitr�geno y el flujo del carbono (son nitrificantes y fotoaut�trofas, aunque tambi�n las hay que viven heterotr�ficamente, como descomponedoras o con un metabolismo mixto) , y en sus ambientes naturales producen pigmentos para utilizar de forma eficiente la luz solar disponible, como clorofila a y ficobiliprote�nas, encontr�ndose coloraciones que van desde el verde hasta el pardo-rojizo e incluso morado. Tambi�n se caracterizan por su estructura simple y sus m�nimos requerimientos nutricionales. Pueden aparecer de forma unicelular cocoide, o a veces agregadas en una vaina mucilaginosa formando filamentos simples o tricomas (filamentosas) . En los �ltimos a�os, las cianobacterias han atra�do la atenci�n por su capacidad de producir varios metabolitos secundarios bioactivos de inter�s industrial, con valor para medicina y agricultura. Las escitoneminas son pigmentos alcaloides pardo-amarillentos con una conocida actividad de absorci�n de luz ultravioleta con un papel esencial en la fotoprotecci�n de las propias cianobacterias. Al contrario que otros fotoprotectores como los MMAs, las escitoneminas son sintetizadas exclusivamente por cianobacterias, La escitonemina es un compuesto dim�rico y liposoluble, localizado en la vaina polisacar�dica de algunas cianobacterias (m�s de 300 especies) , que act�an como protectores solares pasivos contra la radiaci�n UV. Contiene subunidades ind�licas y fen�licas ensambladas en lo que se conoce como "esqueleto de escitonemano. Existe en forma oxidada (544 Da) o reducida (546 Da) , dependiendo de las condiciones redox y �cido-base durante el proceso de extracci�n, y recientemente se han descrito cuatro formas derivadas en diferentes organismos: dimetoxiescitonemina, tetrametoxiescitonemina, escitonina, escitonemina-3a-imina (Figura 2) . La escitonemina purificada tiene un m�ximo de absorci�n UV a 384 ± 2 nm, aunque tambi�n tiene una absorbancia significativa a 252, 278 y 300 nm. Por tanto, es capaz de bsorber fuertemente en la regi�n UV-A (315-400 nm) , extendiendo su absorbancia a la zona violeta y azul, as� como en las regiones UV- B (280-320 nm) e incluso UV-C (190-280 nm) (Rastogi et 1, 2013) . Por tanto, ejerce su mecanismo de protecci�n absorbiendo la radiaci�n UV del espectro solar y disipando la energ�a mediante des-excitaci�n t�rmica inocua. Estudios previos han reportado que la escitonemina puede prevenir hasta el 90% de la radiaci�n UV incidente de entrar a la c�lula. En cuanto a su empleabilidad industrial, la escitonemina tiene un gran potencial tanto cosm�tico (por sus ya mencionadas capacidades de disipaci�n de la radiaci�n UV) como farmacol�gico, con interesantes propiedades antiinflamatorias, antioxidantes y antiproliferativas, no resultando t�xica para las c�lulas en concentraciones de hasta 10 qM. La estabilidad de un compuesto es crucial para su uso final en la industria cosm�tica o farmac�utica, en el desarrollo de medicina cl�nica o productos solares, y la escitonemina es un metabolito secundario altamente estable bajo diferentes condiciones de estr�s abi�tico, como radiaci�n UV, calor o estr�s oxidativo (Rastogi et al, 2015) . Por otro lado, la activaci�n del sistema antioxidante end�geno de las propias c�lulas tambi�n es un factor por el cual protegerse de la radiaci�n UV. De esta misma manera, el aporte ex�geno de sustancias con actividad antioxidante (que posee la ya descrita escitonemina) puede mejorar los mecanismos de defensa naturalmente encontrados en las c�lulas de la piel. Dos compuestos antioxidantes de gran importancia para mantener las condiciones redox intracelulares son el glutati�n y la melatonina. El glutati�n juega un rol importante en la respuesta al estr�s oxidativo y nutricional. Es el compuesto ti�lico no proteico m�s abundante y ubicuo encontrado m�s ampliamente en organismos procariotas y eucariotas. Estructuralmente es un trip�ptido compuesto de L-glutamato (Glu) , L-cisteina (Cys) y L-glicina (Gly) , y su grupo activo es representado por el tiol (grupo -SH) del residuo de Cys (Figura 3) . El glutati�n existe en su forma tiol-reducida (GSH) y disulfuro-oxidada (GSSG) . El contenido en GSH es m�s del 98% del glutati�n total de la c�lula, y es sintetizado intracelularmente en dos pasos dependientes de energ�a por la uni�n de sus tres amino�cidos precursores, llevada a cabo por dos enzimas. El GSH est� involucrado en m�ltiples funciones biol�gicas en varios tejidos, principalmente propiedades redox y nucleof�licas: reacciones biorreductivas, procesos de transporte, actividad enzim�tica y metabolismo del nitr�geno y azufre, protecci�n contra estr�s oxidativo, detoxificaci�n de xenobi�ticos y metabolitos t�xicos end�genos, as� como modulaci�n de la proliferaci�n celular, apoptosis, funci�n inmunitaria y fibrog�nesis. Estas caracter�sticas lo convierten en una mol�cula con utilidad terap�utica, y es utilizado ampliamente para el tratamiento de diversas enfermedades como infecciones por VIH, inflamaciones pancre�ticas, cirrosis hep�tica y envejecimiento (Tahmasebi et al, 2016) . Es gracias a su capacidad antioxidante que tiene un rol importante en la protecci�n frente a la radiaci�n UV, debido tanto a su propia acci�n reparadora del da�o oxidativo como a la capacidad para donar �tomos de hidr�geno a otros antioxidantes presentes en la c�lula (como el ascorbato) y activar v�as de protecci�n secundarias. El uso de antioxidantes end�genos tiene un inter�s especial en fotoprotecci�n, ya que se evita la aplicaci�n de sustancias extra�as en la piel, y los estudios previos realizados con mezclas de antioxidantes han mostrado resultados m�s prometedores que los que emplean una �nica sustancia (lo que puede tener incluso efectos delet�reos para la c�lula) . De ah� el inter�s de emplear el glutati�n por su capacidad de estimular otros sistemas antioxidantes end�genos, y adem�s de aplicarlo en combinaci�n con otras mol�culas antioxidantes. La melatonina (N-acetil-5-metoxiltriptamina) es una indolamina encontrada en plantas, microorganismos y humanos. En estos �ltimos es producida en la gl�ndula pineal o ep�fisis a artir del tript�fano (Trp) . Presenta un anillo de tipo ind�lico y dos grupos funcionales principales, un grupo metoxi en posici�n 5 y un grupo amida en posici�n 3 (Figura 4) . Estos grupos determinan su solubilidad tanto en medio acuoso como en org�nico, su car�cter anfip�tico le permite traspasar las membranas celulares y ser transportada por fluidos biol�gicos, adem�s de ser responsables de sus propiedades antioxidantes. Modula muchos procesos fisiol�gicos incluyendo el ciclo del sue�o/vigilia y la fisiolog�a reproductiva, adem�s de actuar como antioxidante. La melatonina protege del estr�s oxidativo de forma directa (actuando como donador de electrones e interaccionando con ROS) e indirecta (activando enzimas antioxidantes y regulando su expresi�n g�nica) . Esta capacidad le confiere propiedades fotoprotectoras al reparar el da�o que genera el ambiente oxidativo causado por la radiaci�n UV, que han sido comprobadas en estudios previos (Skobowiat et al, 2018) . Saccharomyces cerevisiae ("hongo del az�car de la cerveza", en griego latinizado) es una de las levaduras (hongos unicelulares) m�s utilizadas en la industria, adem�s de ser un organismo eucariota modelo para estudios biol�gicos por sus sencillas condiciones de cultivo y su r�pido crecimiento (su tiempo de duplicaci�n es de 90 minutos) . Este organismo lleva a cabo la fermentaci�n alcoh�lica, el tipo m�s com�n de fermentaci�n (obtenci�n de energ�a mediante oxidaci�n incompleta de mol�culas gluc�dicas) . Actualmente se est�n empleando m�todos enzim�ticos y fermentativos para producir GSH a escala industrial, siendo el �ltimo m�todo el m�s eficiente. Esto se debe a que ciertas cepas de levaduras, en particular de S. cerevisiae y Candida utilis, tienen la capacidad de acumular grandes cantidades de GSH en las c�lulas (Ahmasebi et al, 2016) . Estudios previos han mostrado que S. cerevisiae puede sintetizar grandes cantidades de melatonina y otros metoxi-indoles durante su crecimiento est�ndar, as� como en procesos de fermentaci�n alcoh�lica (Rodr�guez-Naranjo et al, 2012) . La ventaja de la fermentaci�n como m�todo de obtenci�n de metabolitos secundarios es que pueden concentrarse en gran medida las sustancias de inter�s optimizando el proceso y empleando materiales de bajo coste como sustratos. Descripci�n detallada de la invenci�n La presente invenci�n presenta una composici�n que incluye extractos de escitoneminas, glutati�n y melatonina para una protecci�n solar completa por dos mecanismos: disipaci�n de la radiaci�n UV en forma de calor mediante el uso de mol�culas fotoprotectoras naturales (escitonemina) y reparaci�n del da�o celular mediado por ROS gracias a la acci�n de los compuestos antioxidantes. Las escitoneminas empleadas en la composici�n son obtenidas de cianobacterias previamente aisladas de lagunas de alta monta�a (a partir de 2800 metros de altitud, 37�01'N, 3�16'W - 37�04'N, 3�19'W) , en zonas con una gran incidencia de radiaci�n UV, y cultivadas en el laboratorio de forma biomim�tica. Los microorganismos que crecen en estos ecosistemas est�n evolutivamente adaptados a la radiaci�n y son una fuente natural de compuestos fotoprotectores. El cultivo de cianobacterias empleado consiste en un consorcio de organismos de picocianobacterias pertenecientes al orden Synechococcales (92% de cianobacterias) de los g�neros Synechococcus (77%) , Cyanobium (7%) y Prochlorococcus (2%) , con trazas de Leptolyngbyaceae y otros organismos muy minoritarios. Las cianobacterias son cultivadas en biorreactor tipo tanque agitado que mantiene las condiciones ideales para su crecimiento, y posteriormente sometidas a estr�s por incidencia de radiaci�n UV-A y UV-B para estimular las condiciones naturales de producci�n de escitoneminas, de manera similar a como ocurre en el medio natural (proceso biomim�tico) . Posteriormente se extrae el contenido celular usando solventes org�nicos y se lleva a sequedad, obteni�ndose un producto en polvo rico en escitoneminas acompa�adas de clorofila a, carotenoides y ficobiliprote�nas. Otros compuestos antioxidantes de la composici�n de la presente invenci�n, tanto melatonina como el glutati�n, son producidos de forma fermentativa por la levadura Saccharomyces cerevisiae, cultivada en biorreactor de tanque agitado usando como sustrato melaza de remolacha (un subproducto de la industria azucarera de bajo coste) . El cultivo debe ser suplementado, adem�s, con los amino�cidos precursores limitantes en el proceso de s�ntesis (Glu, Cys y Trp) para maximizar el rendimiento. Posteriormente se obtiene un extracto rico en glutati�n y melatonina tras un proceso de purificaci�n, concentraci�n y aislamiento de dichos activos mediante una secuencia de filtraci�n en membranas. Este ingrediente concentrado es posteriormente encapsulado en liposomas para poderlo incorporar a la matriz cosm�tica final durante el proceso de fabricaci�n. Por primera vez se presenta una composici�n con capacidad fotoprotectora compuesta por dos familias de mol�culas que act�an a varios niveles (disipaci�n de la radiaci�n UV y actividad antioxidante de prevenci�n/reparaci�n del da�o celular) para una protecci�n integral frente a la radiaci�n solar. Los filtros solares son obtenidos de forma biomim�tica de un consorcio de cianobacterias seleccionado evolutivamente debido a su ambiente hostil (lagunas de alta monta�a con gran incidencia UV) para la resistencia a dicha radiaci�n, mientras que los antioxidantes proceden tanto del proceso anterior como de levaduras capaces de producirlos y acumularlos de manera natural. Descripci�n de los dibujos Para complementar la descripci�n que se est� realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprensi�n de las caracter�sticas de la invenci�n propuesta de acuerdo con un ejemplo preferente de realizaci�n pr�ctica que se expone como parte integrante de la descripci�n unas figuras que representan e identifican elementos de la invenci�n, que, con car�cter ilustrativo y no limitativo se representan las siguientes: Figura 1. Efectos de la radiaci�n UV en diversos organismos fotoaut�trofos como cianobacterias, y consiguiente adopci�n de mecanismos de defensa para contrarrestar los efectos da�inos de la radiaci�n UV. Figura 2. Familia de las escitoneminas. (a) Escitonemina reducida, (b) escitonemina oxidada, (c) tetrametoxiescitonemina, (d) dimetoxiescitonemina, (e) escitonina, (f) escitonemina-3a-imina. Imagen extra�da de Grant & Louda, 2013. Figura 3. Estructura del glutati�n. Glutati�n reducido (GSH, superior) y oxidado (GSSG, inferior) . Figura 4. Estructura de la melatonina. Modo de realizaci�n de la invenci�n El modo de realizaci�n a escala de laboratorio de la presente composici�n cosm�tica puede resumirse en los siguientes pasos: Producci�n de escitoneminas 1) A partir de un precultivo de cianobacterias ya crecido (OD750 = 0, 7 - 0, 8 nm) , inocular al 10-20% un biorreactor de tipo tanque agitado de 2 L esterilizado en autoclave (Biostat A) con 1, 5 L de medio de cultivo BG-11. 2) Crecer el cultivo hasta obtenci�n de una OD750 = 0, 7 - 0, 8 nm con burbujeo constante de aire est�ril (600-800 cm3/min) , agitaci�n de palas a 50-75 rpm, monitorizaci�n continua de pH (valores entre 7, 5-8) , 25-30 �C de temperatura y un ciclo de luz oscuridad de 16:8 o bien 14-10 horas con luz natural o l�mparas fluorescentes de luz blanca (irradiaci�n de 17-25 W/m2) . 3) Pasado el tiempo de crecimiento, iluminar el cultivo entre 8-12 horas al d�a con l�mparas fluorescentes de luz UV-A (4-7 W/m2) y UV-B (1 - 2 W/m2) durante un periodo de 6-10 d�as. 4) Centrifugar el cultivo por encima de 5000 g durante al menos 15 minutos para eliminar el medio de cultivo y secar la biomasa a 50 �C. 5) Realizar la extracci�n de escitoneminas y pigmentos por maceraci�n en fr�o con acetona durante 16-24 horas (ovemight) . 6) Centrifugar el extracto a velocidad superior a 8000 g. 15-20 min, para eliminar s�lidos residuales. Opcionalmente puede filtrarse por una membrana de 0, 22 m. 7) Evaporar el solvente org�nico en un ba�o termostatizado y recoger el producto s�lido resultante. Conservar en frio en un envase protegido de la luz. Producci�n simult�nea de glutati�n y melatonina 1) En un biorreactor de tipo tanque agitado 2 L esterilizado en autoclave (Biostat A) , inocular un 7% de S. cerevisiae en medio melaza diluida (15-20 g/L de az�cares) , suplementada con D- glucosa (8-10 g/L) y amino�cidos precursores, a�adidos a diferentes tiempos: Trp (0, 5-1 g/L) al tiempo de inoculaci�n (T = 0) Cys (0, 2 - 0, 4 g/L) a las 2 horas de inoculaci�n (T = 2h) y Glu (1, 5- 2, 5 g/L) a las 7 horas de inoculaci�n (T = 7h) . 2) Mantener el cultivo con burbujeo constante de aire est�ril (600-800 cm3/min) , agitaci�n de palas a 200-300 rpm, ajuste autom�tico de pH a 5-6 y 25-30�C de temperatura, durante 48-72 horas. 3) Para obtener una mayor cantidad de GSH se recomienda la aplicaci�n de un campo magn�tico de 70-100 pT mediante un solenoide colocado alrededor del biorreactor con entre 8-12 vueltas, 0, 7 - 1, 2 V y 3-4 A. 4) Seguidamente, concentrar los activos (glutati�n y melatonina) mediante membranas: a. La secuencia de filtraci�n comienza con una filtraci�n en doble etapa por membranas de 50000 Da para separar la biomasa celular. b. A continuaci�n, conducirlo a una secuencia lineal de filtraci�n por membranas de 1 kDa y 150-300 Da para maximizar la recuperaci�n de glutati�n y melatonina. c. Se obtiene un l�quido transparente de color marr�n oscuro que se conserva en frio. Liposomado del extracto concentrado de glutati�n y melatonina F�rmula del producto liposomado: 1) Atemperar a 40 �C los componentes de la fase B y agitar hasta mezcla homog�nea. 2) Incorporar el complejo bot�nico fuente de ceramidas al concentrado obtenido por membranas (fase A) a la vez que se agita en batidora (10000-12000 rpm) . 3) Agitar en rotor-estator (Ultra-Turrax, 10000-12000 rpm) la fase A y. sobre el v�rtice, verter lentamente la fase B, manteniendo la agitaci�n durante 5 min. 4) A�adir fase C. 5) Remover con agitaci�n de palas durante 15-20 min. Estabilizaci�n de complejo fotoprotector La estabilizaci�n del complejo antioxidante fotoprotector se realiza mediante solubilizaci�n en diferentes aceites de origen vegetal con capacidad fotoprotectora end�gena. Entre ellos, aceita de semilla de zanahoria (SPF 6, 92 a 18, 80) , aceite de almendras (SPF 4, 6) aceite de coco (SPF 1, 75 a 7, 36) , aceite de jojoba (SPF 4) , etc. Ejemplos: Mezcla 1: Extracto procedente de cultivo de cianobacterias (escitoneminas) 0, 01-10% Prunus Amygdalus Dulcis Oil 1-50% Simmondsia chinensis seed oil csp 100 Mezcla 2: Extracto procedente de cultivo de cianobacterias (escitoneminas) 0, 01-10% Daucus Carota Seed Oil 1-50% Prunus Amygdalus Dulcis Oil 1-50% Simmondsia chinensis seed oil csp 100 Mezcla 3: Extracto procedente de cultivo de cianobacterias (escitoneminas) 0, 1-10% Cocos Nucifera Oil 1-30% Daucus Carota Seed Oil 1-30% Prunus Amygdalus Dulc�s Oil 1-30% Simmondsia ch�nens�s seed oil csp 100 Mezcla 4: Extracto procedente de cultivo de cianobacterias (escitoneminas) 0, 01-10% Extracto procedente de fermentaci�n de levaduras (glutati�n y melatonina) 0, 01-20% Prunus Amygdalus Dulcis Oil 1-50% Simmondsia chinensis seed oil 1-50% Sistema emulgente W/O agua en aceite 0-5% Agua csp 100 Mezcla 5: Extracto procedente de cultivo de cianobacterias (escitoneminas) 0, 01-10% Extracto procedente de fermentaci�n de levaduras (glutati�n y melatonina) 0, 01-20% Daucus Carota Seed Oil 1-40% Prunus Amygdalus Dulcis Oil 1-40% Simmondsia chinensis seed oil 1-40% Sistema emulgente W/O agua en aceite 0-5% Agua csp 100 Mezcla 6: Extracto procedente de cultivo de cianobacterias (escitoneminas) 0, 01-10% Extracto procedente de fermentaci�n de levaduras (glutati�n y melatonina) 0, 01-20% Cocos Nucifera Oil 1-30% Daucus Carota Seed Oil 1-30% Prunus Amygdalus Dulc�s Oil 1-30% Simmondsia ch�nens�s seed oil 1-30% Sistema emulgente W/O agua en aceite 0-5% Agua csp 100 Las composiciones anteriores se emplear�n en la preparaci�n de otros productos cosm�ticos para la protecci�n de piel humana o cualquier superficie frente a la radiaci�n solar. No se considera necesario hacer m�s extensa la presente memoria descriptiva para que cualquier experto en la materia comprenda el alcance de la invenci�n y las ventajas que de su uso se derivan. Los t�rminos en que se ha escrito la presente memoria deber�n ser tomados siempre con car�cter ilustrativo y no limitativo.

Publicaciones:
ES2956660 (26/12/2023) - A1 Solicitud de patente con informe sobre el estado de la técnica
Eventos:
En fecha 20/05/2022 se realizó Registro Instancia de Solicitud
En fecha 24/05/2022 se realizó Admisión a Trámite
En fecha 24/05/2022 se realizó 1001P_Comunicación Admisión a Trámite
En fecha 21/06/2022 se realizó Superado examen de oficio
En fecha 31/03/2023 se realizó Realizado IET
En fecha 03/04/2023 se realizó 1109P_Comunicación Traslado del IET
En fecha 26/12/2023 se realizó Publicación Solicitud
En fecha 26/12/2023 se realizó Publicación Folleto Solicitud con IET (A1)
En fecha 10/04/2024 se realizó Validación petición y/o pago de examen sustantivo no conforme
En fecha 10/04/2024 se realizó Retirada
En fecha 10/04/2024 se realizó 1108P_Notificación retirada solicitud por no petición y/o pago de examen sustantivo
En fecha 16/04/2024 se realizó Publicación retirada solicitud por no petición y/o pago de examen sustantivo
Pagos:
20/05/2022 - Pago Tasas IET