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LOCI DE CARACTERES CUALITATIVOS (QTL) IMPORTANTES QUE CONFIEREN AL MAIZ RESISTENCIA CONTRA FIJIVIRUS.

Patente nacional por "LOCI DE CARACTERES CUALITATIVOS (QTL) IMPORTANTES QUE CONFIEREN AL MAIZ RESISTENCIA CONTRA FIJIVIRUS."

Este registro ha sido solicitado por

PIONNER HI-BRED INTERNATIONAL, INC

a través del representante

JAVIER UNGRÍA LÓPEZ

Contacto
 
 
 




  • Estado: A punto de caducar
  • País:
  • España 
  • Fecha solicitud:
  • 31/10/2008 
  • Número solicitud:
  • P201231308 

  • Número publicación:
  • ES2498440 

  • Fecha de concesión:
  • 04/05/2015 

  • Inventores:
  • Persona física 

  • Datos del titular:
  • PIONNER HI-BRED INTERNATIONAL, INC
  • Datos del representante:
  • Javier Ungría López
     
  • Clasificación Internacional de Patentes:
  • C12Q 1/68 
  • Clasificación Internacional de Patentes de la publicación:
  • C12Q 1/68 
  • Fecha de vencimiento:
  •  
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registro
Reivindicaciones:
+ ES-2498440_B11. Un método para identificar una planta o germoplasma de maíz que presenta resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada al virus del mal de Río Cuarto (MRCV) o al virus del enanismo rugoso del maíz (MRDV) , CARACTERIZADO POR QUE el método comprende detectar en la planta o germoplasma de maíz un haplotipo en un intervalo cromosómico rodeado por, e induyendo, (i) MZA16658-19-A, donde MZA16656-19-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genelico y la secuencia consenso para MZA16656-19A es SEQ ID NO:18; y (ii) MZA9105-8-A, donde MZA9105-8-A está localizado en el cromosoma 2 a 65, 4 cM de un mapa genetico y la secuencia consenso para MZA9105-8-A es SEQ ID NO:12, donde dicho haplolipo comprende: (a) una "G" en MZA16656-19-A, donde MZA16656-19-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA16656-19-A es SEO ID NO:18; y la "G" está situada en posición 218 de SEO ID NO:18; (b) una "C" en MZA15490-137-A, donde MZA15490-137-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-137-A es SEO ID NO:20; y la "C' está situada en posición 84 de SEO ID NO:20; y (e) una "G" en MZA15490-138-A, donde MZA15490-13B-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-13B-A es SEO ID NO:20; y la "G" está situada en posición 96 de SEO ID NO:20. 2. El método de la reivindicación 1, CARACTERIZADO POR OUE la planta o germoplasma de maiz tiene un haplotipo que comprende: (a) una "G" en MZA16656-19-A, donde MZA16656-19-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA16656-19-A es SEO ID NO:18; y la "G" está situada en posición 218 de SEO ID NO:18; (b) una "G" en MZA15490-801-A, donde MZA15490-801-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-801-A es SEO ID NO:20; y la "G" está situada en posición 96 de SEO ID NO:20; (e) una "C" en MZA15490-137-A, donde MZA15490-137-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-137-A es SEO ID NO:20; y la "C" está situada en posición 84 de SEO ID NO:20; (d) una "A" en MZA2038-71-A, donde MZA2038-71-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA203B-71-A es SEO ID NO:15; y la "A" está situada en posición 258 de SEO ID NO:15; (e) una"r' en MZA2038-76-A, donde MZA2038-76-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA203B-76-A es SEO ID NO:15; y la ", está situada en posición 277 de SEO ID NO:15; (f) una "A" en MZA11826-801-A, donde MZA11826-801-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA11826-801-A es SEO ID NO:22; y la "A" está situada en posición 89 de SEO ID NO:22: (9) una OC" en MZA11826-803-A, donde MZA 11826-803-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA11826-803-A es SEO ID NO:23; y la "C" está situada en poSición 701 de SEO ID NO:23; y (h) una "A" en MZA9105-B-A, donde MZA9105-B-A está localizado en el cromosoma 2 a 65, 4 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA9105-B-A es SEO ID NO:12; y la "A" está situada en posición 123 de SEO ID NO:12.
+ ES-2498440_A21. Un método para identificar una planta o germoplasma de maíz que presenta resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada al virus del mal de Río Cuarto (MRCV) o al virus del enanismo rugoso del maíz (MRDV) , CARACTERIZADO POR QUE el método comprende detectar en la planta o germoplasma de maíz un haplotipo en un intervalo cromosómico rodeado por, e induyendo, (i) MZA16656-19-A, donde MZA16656-19-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico y la secuencia consenso para MZA16656-19A es SEO ID NO:18; y (ii) MZA9105-8-A, donde MZA9105-8-A está localizado en el cromosoma 2 a 65, 4 cM de un mapa genetico y la secuencia consenso para MZA9105-8-A es SEO ID NO:12, donde dicho haplotipo comprende: (a) una "G" en MZA16656-19-A, donde MZA16656-19-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA16656-19-A es SEO ID NO:18; y la "G" está situada en posición 218 de SEO ID NO:18; (b) una "C" en MZA15490-137-A, donde MZA15490-137-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-137-A es SEO ID NO:20; y la "C' está situada en posición 84 de SEO ID NO:20; y (e) una "G" en MZA 15490-138-A, donde MZA 15490-138-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-138-A es SEO ID NO:20; y la "G" está situada en posición 96 de SEO ID NO:20. 2. El método de la reivindicación 1, CARACTERIZADO POR OUE la planta o germoplasma de maíz tiene un haplotipo que comprende: (a) una "G" en MZA16656-19-A, donde MZA16656-19-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA16656-19-A es SEO ID NO:18; y la "G" está situada en posición 218 de SEO ID NO:18; (b) una "G" en MZA15490-801-A, donde MZA15490-801-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genelico; la secuencia consenso para MZA15490-801-A es SEO ID NO:20; y la "G" está situada en posición 96 de SEO ID NO:20; (e) una "C" en MZA15490-137-A, donde MZA15490-137-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA15490-137-A es SEO ID NO:20; y la "C" está sítuada en posición 84 de SEO ID NO:20; (d) una "A" en MZA2038-71-A, donde MZA2038-71-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA2038-71-A es SEO ID NO:15; y la "A" está situada en posición 258 de SEO ID NO:15; (e) una"r' en MZA2038-76-A, donde MZA2038-76-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA2038-76-A es SEO ID NO:15; y la ", está situada en posición 277 de SEO ID NO:15; (f) una "A" en MZA11826-801-A, donde MZA11826-801-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA11826-801-A es SEO ID NO:22; y la "A" está situada en posición 89 de SEO ID NO:22; (9) una OC" en MZA 11826-803-A, donde MZA11826-803-A está localizado en el cromosoma 2 a 66, 0 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA11826-803-A es SEQ ID NO:23; y la "C" está situada en poSición 701 de SEO ID NO:23; y (h) una "A" en MZA9105-8-A, donde MZA9105-8-A está localizado en el cromosoma 2 a 65, 4 cM de un mapa genetico; la secuencia consenso para MZA9105-8-A es SEa ID NO:12; y la "A" está situada en posición 123 de SEO ID NO:12.

Los productos y servicios protegidos por este registro son:
C12Q 1/68

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+ ES-2498440_B1 REFERENCIA A SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de los Estados Unidos N~ 61/001455, presentada e11º de Noviembre de 2007, Que se incorpora a modo de referencia en su totalidad. CAMPO DE LA INVENCiÓN La presente descripción se relaciona con composiciones y melodos útiles para crear o mejorar la resistencia de las plantas a Fijivirus, particularmente el virus del mal de Río Cuarto y/o el virus del enanismo rugoso del maíz. Adicionalmente, la invención se relaciona con plantas que han sido transformadas genéticamente oon las composiciones de la invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN La enfermedad provocada por el virus del mal de Río Cuarto (MRCV) es una enfermedad del maíz de vital importancia en la Argentína, y da cuenta de pérdidas de rendimiento de más de 70% en los años en los que ocurren brotes severos (Rodriguez PE et a/. (1998) Plant Dis. 82:149-52) . La enfermedad es un miembro del serogrupo 2 de los Fijivirus, donde también se hallan otros virus, tales como el virus del enanismo rugoso del maiz, el virus del enanismo con pica negra del arroz, y el virus del achaparrado del pasto Pangola (Uyeda , & Milne RG (1995) Semin. Virol. 6:85-88) . El vector principal para el MRCV es Delphacodes kuscheli, pero se ha comprobado que otras especies de Delphacodes, tales como D. haywardi y D. tigrinus, y lambién Toya propinqua, son portadores del virus. El virus no parece ser transmitido a la progenie a través de las semillas. Distéfano et al., Arch. Viral. 147:1699-1709 (2002) , analizaron la secuencia del MRCV y propusieron que se trata de una nueva especie de Fijivirus relacionada con el MRDV (virus del enanismo rugoso del maíz) . El MRDV se halla en varios paises europeos (por ejemplo, la República Checa, Francia, Italia, Noruega, España, Suecia) y en China, mientras que el MRCV también ha sido detectado en Uruguay (Ornaghi J. A., Beviacqua J. E., Aguirrezabala D. A. , March G. J. y Lenardón S. L 1999. Detection of Mal de Río Cuarto virus in Uruguay. Fitopatologia Brasileira 24: 471 ) . La infección del MRCV provoca el desarrollo anormal del maíz y reduce significativamente el rendimiento de los cultivos. El fenotipo susceptible incluye achaparrado, acortamiento de tos internados, varias mazorcas con granos dispersos, espiguillas dispersas sin anteras, presencia de enaciones pequeñas en el dorso de las hojas, raíces reducidas, y hojas cortadas y reducidas. Los sintomas de las plantas dependen del estado fenokígico de la planta, el genotipo de la planta y el ambiente (Lenardón et al., "Virus del Mal de Rio Cuarto en maíz", en Proyecto de Investigaciones en Fitovirología (Lenardón, editor) , 2:10 (1999) . Los síntomas más severos ocurren cuando la infección tiene lugar en el coleoptile -la etapa de la primera hoja. En el brote severo de MRCV de 1996-1997, se vieron afectadas más de 300000 hectáreas de maiz en la Argentina, y las pérdidas resultantes alcanzaron aproximadamenle $120 millones. Las poblaciones incrementadas de Delphacodes kuscheli en 2006 aparentemente resultaron en la recurrencia de la enfermedad viral en las plantas de malz de la Argentina, lo que afectó significativamente la cosecha de 2007. Los genotipos susceptibles fueron afectados fuertemente por el MRCV en la región endémica (provincia de Córdoba) y afectaron moderadamente otras regiones de siembra de maíz. El desarrollo de marcadores genéticos moleculares ha facilitado el mapeo y la selección de caracteres de importancia agricola en maíz. Los marcadores ligados estrechamente con genes de resistencia a enfermedades son valiosos para identificar rapidamente lineas de maíz resistentes sobre la base de su genotipo, mediante el uso de selección asistida por marcadores (MAS) . La introducción de genes de resistencia a enfermedades en un cultivo deseado también se ve facilitada por el uso de marcadores de AON apropiados. Marcadores moleculares V selección asistida por marcadores Un mapa genético es una representaCión gráfica de un genoma (o una porción de un genoma, tal como un único cromosoma) , donde se miden las distancias entre puntos caracteristicos en el cromosoma a través de las frecuencias de recombinación entre los puntos característicos. Un punto característico genético puede ser cualquiera de una variedad de marcadores polimórficos conocidos, por ejemplo, sin limitaciones, marcadores moleculares tales como marcadores SSR, marcadores RFLP, marcadores FLP o marcadores SNP. Además, los marcadores SSP pueden derivar de ácidos nucleicos genómicos o expresados (por ejemplo, EST) . La naturaleza de estos puntos característicos y los métodos usados para detectarlos varian, pero todos estos marcadores pueden distinguirse tfsicamente unos de otros (asi como de la pluralidad de alelas de cualquier marcador particular) sobre la base de la longitud y/o la secuencia de los polinucleótidos. ES 2 498 440 A2 Aunque las secuencias de AON específicas que codifican proteínas generalmente estan bien cOnservadas en una especie, olras regiones de AON (típicamente no codificante) tienden a acumular polimorfismos, por lo que pueden variar entre los individuos de la misma especie. Estas regiones proporcionan la base de numerosos marcadores genéticos moleculares. En general, cualquier carácter polimórfico heredado de forma diferencial (incluyendo el polimorfismo de ácidos nucleicos) que segrega entre la progenie es un marcador potencial. la variabilidad genómica puede ser de cualquier origen, por ejemplo, inserciones, supresiones, duplicaciones, elementos repetitivos, mutaciones puntuales, eventos de recombinación, o la presencia y la secuencia de elementos de transposición. En la técnica se conoce una gran cantidad de marcadores moleculares de maiz, y éstos están publicados o disponibles en varias fuentes, tales como el recurso de Internet MaizeGOB. De forma similar, también existen numerosos métodos bien establecidos para detectar marcadores moleculares. la motivación primaria para desarrollar tecnologías de marcadores moleculares desde el punto de vista de los encargados del cultivo de plantas ha sido la posibilidad de incrementar la eficiencia de los cruzamientos mediante la selección asistida por marcadores (MAS) . Un alelo de un marcador molecular que presenta desequilibrio de ligamiento con un carácter fenotípico deseado (por ejemplo, un locus de un carácter cuantitativo o OTl, tal como la resistencia a una enfermedad particular) provee una herramienta útil para seleccionar un carácter deseado en una pOblación de plantas. los componentes clave de la implementación de este abordaje son: (1) la creación de un mapa genético denso de marcadores moleculares, (ii) la detección de OTl sobre la base de asociaciones estadisticas entre el marcador y la variabilidad fenotipica, Qii) la definición de un conjunto de alelas marcadores deseables basada en los resultados del análisis de OTL, y (iv) el uso y/o la extrapolación de esta información para el conjunto actual de germoplasma de cultivo para permitir la toma de decisiones de selección basada en marcadores. La disponibilidad de mapas de ligamiento integrados del genoma del maíz que contienen densidades crecientes de marcadores de maiz públicos ha facilitado el mapeo genético del maiz y la MAS. Véase, por ejemplo, el recurso MaizeGOB en Internet. Frecuentemente se usan dos lipos de marcadores en los protocolos de selección asistida por marcadores: se trala de los marcadores de repeticiones de secuencias simples (SSR, también conocidos como microsatélites) y los marcadores de polimorfismos de nucleótidos individuales (SNP) . Et término SSR generalmente designa cualquier tipo de heterogeneidad molecular que resulte en variabilidad en longitud, y más típicamente es un segmento de AON corto (de hasta varios cientos de pares de bases) que consiste en múltiples repeticiones en tándem de una secuencia de otros dos pares de bases. Estas secuencias repetidas resuttan en regiones de AON altamente polimórficas de longitud variable debido a la baja fidelidad de replicación, por ejemplo, causadas por deslizamientos de la polimerasa. las SSR parecen estar dispersas al azar a través del genoma, y generalmente están rodeadas por regiones conservadas. Los marcadores SSR también pueden derivar de secuencias de ARN (bajo la forma de un AONc, un AONc parcial o una ESn, asi como de material genómico_ Las caracteristiCils de la heterogeneidad de las SSR las hacen muy apropiadas para usar como marcadores genelicos moleculares; es decir, la variabilidad genómica de las SSR es hereditaria, multialélica, codominanle y detectable en situaciones reproducibles. la proliferación de técnicas de detección basadas en amplificación (por ejemplo, basadas en PCR) cada vez más sofisticadas provee una variedad de métodos sensibles para reducir la heterogeneidad de las secuencias de nucleÓlidos. Se diseñan cebadores (u otros tipos de sondas) para que hibriden con las regiones conservadas que rodean el dominio SSR, lo que resuha en la amplificación de la región SSR variable. Los amplicones de distinto tamaño generados a partir de una región SSR tienen tamaños característicos y reprodUCibles. los amplicones SSR de distinto tamaño observados en dos cromosomas homólogos en un individuo, o en distintos individuos en la población de plantas, generalmente se conocen como "alelas marcadores". Siempre que existan al menos dos alelos SSR que generen productos de PCR con al menos dos lamaños diferentes, podrán emplearse los SSR como marcadores. En la técnica también se conocen los marcadores de maiz que eslim basados en polimorfismos de nucJeólidos individuales (SNP) . Se han desarrollado diversos procedimientos para deteclar SNP, incluyendO la hibridación de alelos especificos (ASH; vease, por ejemplo, Shattuck-Eidens et al. , (1991) "Rapld detection of malze ONA sequence varialion' , Genet. Anal. Tech. Appl. 8:240·245) . También se usan ampliamente olros tipos de marcadores moleculares, induyendo, sin limitaciones, las marcas de secuencia expresadas (EST) y los marcadores SSR derivados de secuencias EST, los polimorfismos de longitud de ffagmentos de restricción (RFLP) , los pOlimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFLP) , el AON pOlimórfico amplificado al azar (RAPO) y los marcadores de isozimas. Un experto en la materia conoce un amplio rango de prolocolos para delectar esta variabilidad, y estos protocolos frecuentemente SOn especificos para el tipo de pOlimorfismo que están diseñados para detectar. Por ejemplo, amplificación por PCR, polimOrfismos de conformación de cadenas individuales (SSCP) y replicación autosostenida de secuencias (3SR; véase Chan y Fox, "NASBA and other transcription-based amplification me1hods tor research and diagnostic microbiology", Reviews in Medical Microbiology 10:185-196 (1999". También pueden generarse diversos tipos de marcadores FlP. Más comúnmente, los cebadores de ES 2 498 440 A2 amplificación se usan para generar polimorfismos de longitud de fragmentos. Estos marcadores FLP son similares en varios aspectos a los marcadores SSR, excepto que la región amplifICada por los cebadores tlpicamenle no es una región altamente repetitiva. Aun asi, la región amplificada, o el amplicón, tendrá una variabilidad suficiente entre los germoplasmas, comúnmente debido a inserciones o supresiones, de modo que será posible distinguir los fragmentos generados por los cebadores de amplificación entre individuos polimórficos, 'J se sabe que estos ¡ndels aparecen con frecuencia en maíz (Bhattramakki el al. (2002) Plan! Mol Biol 48, 539547; Rafalski (2002) Plan! Sei 162:329-333) . El término "inde'" hace referencia a una inserción o una deleción, donde puede establecerse que una linea presenta una inserción respecto de una segunda linea, o donde puede establecerse que esta segunda línea presenta una deleción respecto de la primera. Los marcadores MZA descritos en la presente documentación son ejemplos de marcadores FLP amplificados que han sido seleccionados debido a que se hallan cerca del QTL del cromosoma mayor 2. El ligamiento entre un marcador molecular y otro marcador molecular se mide como una frecuencia de recombinación. En general, cuanto más cerca están dos Ioei (por ejemplo, dos marcadores SSR) en el mismo mapa genético, más cerca están uno de otro en el mapa fisico. Una distancia genética relativa (determinada mediante un cruzamiento sobre frecuencias, medidas en centimorgans; cM) es generalmente proporcional a la distancia física (medida en pares de bases, por ejemplo, pares de kilobases (kb) o mega pares de bases (Mbp" que separa dos loo ligados en un cromosoma. La ausencia de proporcionalidad precisa entre los cM y la distancia física puede ser el resultado de la variación en las frecuencias de recombinación de distintas regiones cromosómicas, por ejempto, algunas regiones cromosómicas son ·sitios calientes· de recombinación, mientras que otras regiones no presentan recombinadón alguna, o sotamente presentan eventos de recombinación escasos. En general, cuanto más cerca está un marcador de otro, ya sea en términos de recombinación o de distancia física, más fuerte están ligados. En algunos aspectos, cuanto más cerca está un marcador molecular a un gen que codifica un polipéptido que imparte un fenotipo particular (resistencia a enfennedades) , medido en términos de recombinación o de distancia tísica, más útil es el marcador para marcar el carácter fenolipico deseado. También puede observarse la variabilidad del mapeo genético entre distintas poblaciones de la misma especie de cultivo, incluyendo el maíz. A pesar de esta variabilidad en el mapeo genético que puede ocurrir entre poblaciones, la información de los mapas genéticos y los marcadores derivados de una población aun es util en general para aplicarla a varias poblaciones, con el objeto identificar plantas con caracteres deseados, realizar una selección negativa de plantas con caracteres indeseables y guiar la MAS. Mapeo de 9TL El objellvo del encargado del cultivo de plantas es seleccionar plantas y enriquecer la población de plantas en individuos con los caracteres deseados, por ejemplo, resistencia a patógenos, lo que conduce finalmente a una mayor productividad agrícola. Durante un cierto tiempo se ha reconocido que pueden mapearse loo cromosÓfllicos especificos (o intervalos) en el genoma de un organismo que están correlacionados con fenotipos cuantilativos particulares. Estos loo se denominan loci de caracteres cuantitativos Q QTL. El encargado del cultivo de plantas puede usar ventajosamente marcadores moleculares para identificar los individuos deseados al identificar aquellos alelos marcadores que presentan una probabilidad de significación estadlstica de casegregación con un fenotipo deseado (por ejemplo, resistencia a patógenos) , lo que se manifiesta como un desequilibr10 de ligamiento. Al identificar un marcador molecular o grupos de marcadores moleculares que ca-segregan con un carácter cuantitativo. el encargado del cultivo de plantas está identificando un QTL. Al identificar y seleccionar un alelo marcador (o alelos deseados para multiples marcadores) ligado con el fenotipo deseado, el encargado del cultivo de plantas puede seleccionar rápidamenle un fenotipo deseado al seleccionar el alelo del marcador molecular apropiado (un proceso denominado selección asistida por marcadores o MAS) . Cuando más marcadores moleculares se colocan en el mapa genético, más potencialmente útil se torna este mapa para realizar MAS. Se han desarrollado varios paradigmas experimentales para identificar y analizar QTL (véase, por ejemplo, Jansen (1996) Trends Plant Sci 1:89) . La mayor parte de los informes publicados sobre el mapeo de QTL en especies de cultivo se han basado en el uso de cruzamientos bi·parentales (lyndl y Watsh (1997) Genetics and Analysis of Quantitative Traits, Sinauer AssOOates, Sunderland) . Típicamente, estos paradigmas comprenden cruzar uno o más pares de progenitores, los cuales pueden ser, por ejemplo, un único par derivado de dos cepas endocriadas, o multiples progenitores relacionados o no relacionados de distintas cepas o lineas endocriadas, que pueden presentar distintas características en lo referente al carácter fenotipico de interés. Tipicamente, este protocolo experimental comprende derivar entre 100 y 300 miembros de la progenie segregante a partir de un único cruzamiento de dos líneas endocriadas divergentes (por ejemplo, seleccionadas para maximizar las diferencias en el fenotipo y los marcadores moleculares entre las lineas) . Se determina el genotipo de los progenitores y la progenie segregante para varios loo marcadores, y se evalúan uno º más caracteres cuantitativos (por ejemplo, resistencia a enfermedades) . Luego se identifican QTL como asociaciones de significación estadística entre los valores genotípicos y la variabilidad genotipica entre la progenie segregante. La fuerza de este protocolo experimental proviene de la utilización de los cruzamientos entre lineas endocriadas, ya que los progenitores F1 resultantes tienen todos la misma fase de ligamiento. Por consiguiente, despuéS de ES 2 498 440 A2 aulocruzar las plantas F1. toda la progenie segregante (F2) es útil para fines infonnativos y se maximiza el desequilibrio de ligamiento, se conoce la fase de ligamiento, hay solamente dos alelas de OTl, y. excepto por la progenie del retrocruzamienlo, la frecuencia de cada alelo QTl es de 0, 5. Un experto en la materia conoce numerosos métodos estadísticos para determinar si los marcadores están ligados genéticamente con un QTl (o con olro marcador) , incluyendo, por ejemplo, modelos lineales convencionales. tales como mOVA o mapeo de regresión (Haley y Knotl (1992) Heredily 69:315) , métodos de probabilidad máxima, lales como los algoritmos de expeclación-maximización, (por ejemplo, Lander y Bolstein (1989) "Mapping Mendelian faclors underlying quantitalive traits using RFLP linkage maps', Genetics 121:185199; Jansen (1992) ~A general mixture model for mapping quantitative traitloci by using molecular markers", lheor. Appl. Genet., 85:252-260; Jansen (1993) "Maximum likelihood in a generalized linear finite mixture model by using the EM algorithm", Biometrics 49:227-231; Jansen (1994) "Mapping of quantitative trait loci by using genetic markers: an overview de biometrical models", en J.w. van Ooijen y J. Jansen (editores) , Biometrics in Plant breeding: appfications o ( molecular mar1<ers, pp. 116-124, CPRO-DLO Méterlands: Jansen (1996) "A general Monte Cario method tor mapping multiple quantitative traitloci", Genetics 142:305-311 : y Jansen y Stam (1994) "High Resolution of quantitative trait into multiple loo via interval mapping", Genetics 136:1447-1455) . Los ejemplos de métodos estadisticos incluyen el análisis de marcadores individuales puntuales, el mapeo de intervalos (Lander y Botstein (1989) Genetics 121 :185) , el mapeo de intervalos co mpuestos, el análisis de regresión penalizada, el análisis de pedigri complejo, el análisis MCMC, el análisis MQM (Jansen (1994) Genetics 138:871) , el análisis HAPLO-IM+, el análisis HAPLO-MQM el análisis HAPLO-MQM+, el MCMC bayesiano, la regresión de bordes, el análisis de identidad por descendencia, la regresión de Haseman-Elston, cualquiera de los cuales son apropiados en el contexto de la presente invención. Adernas, se describen detalles adicionales sobre métodos estadisticos alternativos que pueden aplicarse a poblaciones de cultivo complejas, que pueden usarse para identificar y localizar QTL, en la Patente de los Estados Unidos Nº 6399855 Y WOQ 149104. Cualquiera de estos abordajes demandan una gran cantidad de trabajo computacional y comúnmente se ponen en práctica con la ayuda de un sistema informático y software especializado. Existen conjuntos estadisticos apropiados disponibles en una variedad de fuentes públicas y comerciales, y son conocidos por un experto en la materia. Sala et al. , en la Solicitud de Patente Argentina Nº ARP20030100125, describen una combinación de tres alelas QTL relacionados con la resistencia de las plantas de maiz al MRCV. Los loo están ligados a alelas de resistencia favorables de los marcadores bnlgl017, bnlg2277, bnlg125, bnlg381 y bnlg180, donde se observa resistencia cuando todos los alelos que confieren dicha resistencia están presentes. Actualmente existe la necesidad de cepas de maíz mejoradas que sean resistentes a fijivirus, particularmente MRCV y MRDV, Y sus agentes causales, por ejemplo, la infección de Delphacodes kuscheli. Actualmente existe la necesidad de métodos que permitan idenlificar plantas o poblaciones de maíz (germoplasma) que presenten resistencia a fijivirus. Por consiguiente, actUalmente existe la necesidad de disponer de la capacidad de identificar marcadores genéticos moleculares que estén ligados a loei de resistencia a fijivirus, con el fin de facilitar la MAS, y también para facilitar el descubrimiento de genes y la clonación de alelos de genes que impartan resistencia a fijivírus. Estos marcadores pueden usarse para seleccionar plantas individuales y poblaciones de plantas que presenten alelos marcadores favorables en poblaciones de maiz, y luego pueden emplearse para seleccionar el fenotipo resistente, o como alternativa, para realizar una selección negativa de aquellas plantas o poblaciones de plantas que presenten un fenotipo de susceptibilidad a fijivirus. En la presente invención se proveen estas y otras ventajas. RESUMEN DE LA INVENCiÓN Se proveen composiciones y métodos para identificar plantas o gennoplasma de maíz con resistencia conferida recientemente o mejorada a fijivirus. También se proveen métodos para preparar plantas o germoplasma de malz que son resistentes a fijivirus, por ejemplo, mediante la introducción de los aletos marcadores de resistencia deseados y/o con métodos de producción transgénica, y también plantas y germoplasma preparados con estos métodos. Los sistemas y los conjuntos de elementos para seleccionar plantas y germoplasma resistentes también son una caracterfstica de la invención. En algunos aspectos, en la invención se proveen métodos para identificar una primera planta o gennoplasma de maiz (por ejemplo, una linea o una variedad) que tiene una resistencia conferida recientemente o mejorada, o susceptibilidad al MRCV. En los métodos, se detecta al menos un alelo de uno o más loo marcadores (por ejemplo, una pluralidad de loci marcadores) que está ligado con la resistencia conferida recientemente, la resislencia mejorada o la susceptibilidad en la primera planta o germoplasma de maíz. Los loci marcadores pueden seleccionarse entre los loo indicados en las Tablas 1 y 2, incluyendo MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105, así como cualquier otro marcador que esté ligado a estos QTL marcadores (por ejemplo, a aprolCimádamente 10 cM de estos loci) . En la Tabla 1 se describen marcadores de mafz que presentan desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV, lo que se detennina mediante análisis de mapeo de ligamiento, identidad por descendencia y métodos de mapeo QTL. En la Tabla 2 ES 2 498 440 A2 se describen marcadores de maíz que presentan desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV, lo que se determina mediante métodos de mapeo de intervalos de aTL (incluyendo análisis de regresión de marcadores individuales) . En las tablas se indica también el marcador y su posición aproximada en el mapa genético respecto de otros marcadores conocidos, expresada en cM, donde la posición cero es el primer marcador (mas distal) en el cromosoma. También se indican las poblaciones de maíz usadas en el análisis y la probabilidad estadística de segregación al azar del marcador y el fenotipo de resistencia/susceptibilidad, expresada como una probabilidad ajustada en función de la variabilidad y los falsos positivos en varias pruebas. También se indican los valores de probabilidad obtenidos en regresiones de marcadores individuales. En la invención también se proveen intervalos de QTl cromosómicos que están correlacionados con el MRCV. Estos intervalos están localizados en el grupo de ligamento 2. Cualquier marcador localizado en estos intervalos también puede usarse como marcador para la resistencia al MRCV y también es una característica de la invención. Estos intervalos incluyen los siguientes: (i) MZA8381 Y MZA18180; (ii) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA15490 Y MZA2038; (iv) bnlg1458b y umc1261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261a; y (viii) bnlg1327 y umc1262a. Es posible seleccionar una pluralidad de loc; marcadores en la misma planta. No existen limitaciones respecto de cuáles marcadores OTl se seleccionan en combinación. l os marcadores QTl usados en las combinaciones pueden ser cualquiera de los marcadores indicados en las Tablas 1 y 2, cualquier otro marcador que esté ligado a los marcadores en las Tablas 1 y 2 (por ejemplo, los marcadores ligados determinados en el recurso MaizeGDB) , o cualquier marcador en los intervatos de OTl descritos en la presente documentación. Tabla 1 " Probabilidad ajustada Asociación estructurada Asociación no estructurada Marcador Posic ión relativa en el mapa (c M) . PH D v1, 4 Método de identificación Reserva genética analizada/Población de mapeo Análisis de asociación Myriad líneas endocriadas argentinas Analisis de asoc iación 1 Myriad Lineas endocriadas SS Análisis de asociación 11 Myriad Lineas endocriadas SS Análisis de asociación lineas endocriadas del conjunto 1 (SS) Análisis d. asoc iación SNP en MRC V1 . Lineas endoc riadas argentinas MZA7588 63, 17 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germ oplasma Broad Ploneer 0, 12 0, 34 1 0, 742 0, 000676917 MZA8381 63, 47 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Bread Pioneer 0, 002 0, 0037 0, 0044 0, 000198191 menos de 0, 001 MZA3105 63, 55 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Broad Pioneer 0, 0412 0, 064 I , MZA482 63, 64 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Broad Pioneer 0, 551 0.0958 0, 197 0, 002172499 MZA16531 63, 83 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Broad Pioneer 0, 174 0, 0282 0, 055088894 MZA14553 64 , 1 Am\lisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Bread Pioneer MZA4305 64 , 1 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Broad Pioneer 0, _ 0, 0394 0, 066 0, 331615457 tT1 rJ) ...'" '" ... ... O :> '" O> MZA625 64, 1 Análisis de asociación. identidad p, , , descendencia, mapeo de QTl Germoplasma Planeer Brcad 0, 0476 0, 685 0, 74 0, 000136376 MZA625-30-A 64 , 1 Identidad por descendencia, mapeo de QTl Germoplasma Pianeer Broad menos de 0, 001 MZA625-29·A 64, 1 Identidad por descendencia, mapeo de QTL Germoplasma Pianeer Brcad menos de 0, 001 MZA15451 65, 3 Analisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Pianeer Brcad 0, 0105 0, 0438 0, 0612 0, 51165696 MZA91 05 65, 4 Análisis de asociación, identidad po' descendencia Germoplasma Pianeer Broad 0, 0226 0, 436 0, 453 0, 003621576 MZA9105-B-A 65, 4 Identidad por descendencia, maoeo de OTL Germoplasma Pianeer Bread menos de 0, 001 MZA9105-6-A 65, 4 Identidad por descendencia. maoeo de QTL Germoplasma Piooeer Broad 0, _ MZA11826 66, 0 Analisis de asociación . identidad por descendencia, maoeo de QTl Germoplasma Pianeer Broad 0, 0201 0, 16 0, 486 1, 79182E·06 MZA11826803-A 66, 0 Identidad por descendencia, maceo de QTl Germoplasma Pioneer Broad 0, 014 MZA11826801·A 66, 0 Identidad por descendencia, maoeo de OTl Germoplasma Pioneer Broad 0, 034 MZA11826-27· A 66, 0 Identidad por descendencia, maceo de OTl Analisis de asociación, Germoplasma Pioneer Germoplasma Pioneer Broad Broad 0, 0079 0, 186 0, 523 0, 4067326 0, 04 MZA15490 66, 0 tT1 [J) ...'" '" ... ... O ;J> '" '" tT1 [J) ...'" '" ... ... O ;J> '" o tT1 [J) ...'" '" ... ... O ;J> '" ~ ~ identidad po< descendencia MZA12454 72, 4 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoptasma Pioneer Broad 0, 000064 0, 126 0, 088 5, 75703E-05 MZA8926 72, 9 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Pioneer Broad 0, 0089 0, 641842316 MZASOS7 73, 0 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoptasma Pioneer Bmad 4, 5231E-05 0, 0246 0, 0098 0, 050959299 menos de 0, 001 BNLG1327 66, 9 Enlace entre Pioneer y mapas Dublioos Extrapolación en de , . población maoa función en e' 8NLG1458B Enlace entre Pioneer y mapas publicos Extrapolación en de , . población mapa fundón en e' umcl261a 70, 0 Enlace entre Pioneer y mapas públicos Extrapolación en de , . población mapa función en e' umc1262a 70, 2 Enlace entre Pioneer y mapas pUblicos Extrapolación en de , . población mapa función en e' tT1 [J) ...'" '" ... ... O :> '" Tabla 2 '" tT1 [J) ...'" '" ... ... O ;J> '" ES 2 498 440 A2 Los marcadores que están ligados a los QTL marcadores de las Tablas 1 y 2 pueden estar ligados estrechamente, por ejemplo, a aproximádamente 10 cM de los aTl marcadores de las Tablas 1 y 2. En algunas realizaciones, ellocus deseado presenta una distancia de recombinación genética de 9 cenliMorgans, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0, 75, 0, 56 0, 25, o menos, respecto del QTL marcador. En algunas realizaciones, los QTL marcadores preferidos se seleccionan entre MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA203B, MZA11826, Y MZA91 05. Se prefieren en mayor medida los QTL marcadores seleccionados entre MZA15490 y MZA2038. En algunas realizaciones, el germoplasma es de una linea o una variedad de maiz. En algunos aspectos, la resistencia conferida recientemente, resistencia mejorada o la susceptibilidad de una planta de maíz al MRCV puede cuantificarse usando cualquier medio apropiado, por ejemplo, una escala entre 1 y 9 (calificación del MRCV) , donde 1 representa un genotipo muy susceplible, 9 representa un genotipo completamente resistente y 4 representa un genotipo con el nivel de resistencia minimo para generar un hibrido comercial. Una segunda manera para evaluar la resistencia al MRCV comprende evaluar el porcentaje de plantas muy susceptibles en un genotipo especifico. Por ejemplo, puede realizarse un experimento de campo donde los genotipos se disponen en un diseño de bloques completamente al azar y cada unidad experimental está representada por una hilera de 4 metros y aproximadamente 20 plantas. La resistencia mejorada al MRCV se evalúa observando cada unidad experimental y asignando una calificación de campo (escala de 1 a 9) . Al mismo tiempo, se evalúa el porcentaje de plantas muy susceptibles en cada unidad experimental. En la figura 3A pueden observarse ejemplos de maíz con síntomas del MRCV, y en la figura 38 pueden observarse ejemplos de malz con susceptibilidad al MRCV. Puede usarse OJalquiera de una variedad de técnicas para identificar un alelo marcador No se pretende limitar el método de detección de alelas de modo alguna. los métodos para detectar alelos típicamente incluyen métodos de identificación moleculares, tales como la amplificadón y la detección del amplicón del marcador. Por ejemplo, puede detectarse una forma alélica de una repetición de secuencia polimórfica simple (SSR) , o de un polimorfismo de nucleótídos individuales (SNP) , por ejemplo, empleando una tecnología basada en amplificación. En estos y otros melodos de detección basados en amplificación, se amplifica ellocus marcador, o una porción dellocus marcador (por ejemplo, por peR, l CR o transcripción. usando un ácido nucleico aislado a partir de una planta de maíz de interés como molde) , y se detecta el amplicón de marcador amplificado resultante. En un ejemplo de este abordaje, se mezcla un cebador de amplificación o un par de cebadores de amplificación con un ácido nudeico genómico aislado de la primera planta o el primer germoptasma de maíz, donde el cebador o el par de cebadores es complementario o parcialmente complementario con al menas una porción del locus marcador, y es capaz de iniciar la polimerización por una ADN polimerasa usando el ácidos nucleicos genómico de maíz como molde. El cebador o el par de cebadores (por ejemplo, un par de cebadores proporcionados en la Tabla 3) se extiende en una reacción de pOlimerización de AON que comprende una AON polimerasa y un ácido nucleico genómico como molde, para generar al menos un amplicón. Tabla 3 Nombre de' marcador BNLG1327 BNLG14589 umc1261a umc1262a Secuencia de' cebador izquierdo SEa ID Nº 45 SEa ID N'47 SEa ID NC'4g SEO ID N" 51 Secuencia derecho SEa ID Na 46 SEa ID N" 48 SEO ID N" 50 SEO ID Nº 52 de' cebador Repetición CT (25) - (TG) 8 (GTC) 4 También conocido como (AKA) bmc1327. A4615G09, p-bnlg1327, A4615G 10, 00191327, LGJ456705 bnIg1458, p.bnlg1458, A4651C06, bmc1458, A4651C05 A1987278 AJ987278 ~ "" tT1 [J) N ... '" ... ... o ;J> N ES 2 498 440 A2 En la Tabla 3 se detallan marcadores genómicos y SSR, induyendo aquellos marcadores que presentaron desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV (directamente o por extrapolación a partir del mapa genético) . En la Tabla 3 se proveen las secuencias de los cebadores de PCR izquierdos y derechos usados en el analisis de determinadón del genotipo dellocus marcador SSR. También se detalla la secuencia de cola enrollada (pigtail) usada en el extremo 5' del cebador derecho, y la cantidad de nucleótidos en el elemento de repetición en tandem en el SSR. En cualquier caso, pueden transmitirse los datos que representan los alelos detectados (por ejemplo, por via electrónica. por rayos infrarrojos, medios inalambricos o transmisión óptica) a un ordenador o un medio que 10 puede ser leido por un ordenador para analizarlos o almacenarlos. En algunas realizaciones, el ARN vegetal es el molde de la reacción de amplificación. En algunas realizaciones, el ARN genómico vegetal es el molde de la reacción de amplificación. En algunas realizaciones, el QTl marcador es un marcador de tipo SNP, el alelo detectado es un alelo SNP (véase, por ejemplo, la Tabla 4 (donde se representan marcadores SNP en la posición del QTL y los haplotipos PH7WT (= 630 = PH14J) Y PH9TJ especificos", y el método de detección es una hibridación con especificidad por el alelo (ASH) . Tabla 4 '" OTL MRCV1 STARS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS Pos. ctg. 745 745 897 897 897 930 930 930 930 930 1018 1016 GIg 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 PHO 64, 1 64, 1 66, 0 66 , 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 65, 4 65, 4 Cromosoma 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 ~ •, E..•~ ~ D E o z ;¡; ~ N ~ , . <f o M '" N '" ;::;, . 'f :z ~ :g ~ , . ;¡; ¡g:g ~ , . 'f ~ M ; m ;:t; ~ , . :f M-, m ;:t; ~ " <f-o m ;:t; ~ " 'f '7 ~ M o N ;::; " 'f '"'7 ~ M o N ;::; " 'f q ~ o 8 U ;! ~ N ~-~ " 'f o ~ '" N ~-;::; " ~ o ~ '" N ~-~ , . i o ~ " :f <> o-m ;::; " PH7WT e T e G e G G A T P e A e G A PH9TJ e T T A A e e T e x T G T G A tT1 Vl N ... 'D t o :> N ES 2 498 440 A2 En algunas realizaciones, el alelo que se detecta es un alelo favorable que está correlacionado positivamente con la resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada. Como alternativa, el alelo que se detecta puede ser un alelo que está correlacionado con la susceptibilidad a una enfermedad o una resistencia reducida a una enfermedad, y dicho alelo se somete a una selección negativa. Por ejemplo, los alelas pueden someterse a una selección positiva (alelas favorables, por ejemplo. PH7WT y PH9T J (véase la Tabla 5) o negativa (alelos desfavorables, por ejemplo, PH30T, PH890 y PH6KW (véase la Tabla 5) . Tabla 5 ex> tT1 Vl N ... 'D t o :> N ES 2 498 440 A2 En el caso en que se selecciona más de un marcador, se selecciona un alelo para cada uno de los marcadores: por consiguiente, se seleccionan dos o más alelas. En algunas realizaciones, puede ser posible que un locus marcador tenga más de un alelo ventajoso, y en este caso podrá seleccionarse cualquier alelo. Ha de apreciarse que la capacidad de identificar loa QTL marcadores que están correlacionados con la resistencia conferida recientemente, la resistencia mejorada o la susceptibilidad a MRCV provee un método para seleccionar también plantas que tienen loei marcadores favorables. Es decir, puede seleccionarse cualquier planta identificada como poseedora de un locus marcador deseado (por ejemplo, un alelo marcador que está correlacionado positivamente con la resistencia) , al tiempo que pueden seleccionarse negativamente las plantas que carecen del locus, o que tienen un locus que está correlacionado negativamente con la resistencia. Por consiguiente, en un método, después de la identificación de un locus marcador, los métodos incluyen la selección (por ejemplo, el aislamiento) de la primera planta o el primer germoplasma de maiz, o la selección de una progenie de la primera planta o el primer germoplasma. En algunas realizaciones, puede cruzarse la primera planta o el primer germoplasma de maiz seleccionado con una segunda planta o un segundo germoplasma de maíz (por ejemplo, un maiz elite o exótico, dependiendo de las características deseadas en la progenie) . De manera Símilar, en otras realizaciones, si un alelo está correlacionado con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada al MRCV, el método puede incluir introducir el alelo en una segunda planta o germoplasma de malz para producir una planta o germoplasma de maíz con una introducción. En algunas realizaciones, la segunda planta o germoplasma de maíz tipicamente presentará una resistencia reducida al MRCV, en comparación con la primera planta o germoplasma de ma!z, mientras que la planta o el germoplasma de maíz con la introducción presentarán una resistencia incrementada al MRCV, en comparación con la segunda planta o germoplasma de maíz. Una planta o un germoplasma de maiz con la introducción realizada de acuerdo con estos métodos también constituyen una característica de la invención. (En algunas realizaciones, el alelo favorable introducido es PH7WT/PH9TJ, véase la Tabla 5) . En otros aspectos, se usan varias poblaciones de mapeo para determinar los marcadores ligados de la invención. En una realización , la población de mapeo usada es la población derivada del cruzamiento PH7WTxPH30T o PH9T JxPH890. En otras realizaciones, pueden usarse otras poblaciones. En otros aspectos, se usan diversos tipos de software para determinar los loci marcadores ligados. Por ejemplo, en la invención puede usarse TASSEL, MapManager-QTX y GeneFlow. En algunas realizaciones, tal como cuando se usa software en el análisis de ligamiento, la información sobre los alelos detectados (es decir, los datos) se transmite por medios electrónicos o se almacena por medios electrónicos, por ejemplo, en un medio que puede ser leido por un ordenador. En otros aspectos, se usan varias poblaciones de mapeo para determinar los marcadores ligados que pueden usarse para construir la planta transgénica. En una realización, la población de mapeo usada es la población derivada de los cruzamientos PH7WTxPH3DT o PH9TJxPH890. En otras realizaciones, pueden usarse otras poblaciones. En otros aspectos, se usan diversos tipos de software para determinar los loo marcadores ligados Por ejemplo, en la invención puede usarse TASSEL, MapManager-QTX y GeneFlow. Los sistemas para identificar una planta de maiz de la que se predice que presentara resistencia <:onferida recientemente o resistencia mejorada al MRCV también son una caracteristica de la invención. Tlpicamente, los sistemas incluyen un conjunto de cebadores y/o sondas marcadoras <:onfiguradas para detectar al menos un alelo favorable de uno o más loo marcadores ligados con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada al MRCV, donde ellocus o los loci marcadores se seleccionan entre MZA7588, MZA8381 , MZA3105, MZA482, MZA16531 , MZA14553, MZA4305, MZA625, MZA15451 , MZA9105, MZA11826, MZA15490, MZA16656, MZA2038, MZA2803, MZA18224, MZA2349, MZA564, MZA11066, MZA18180, MZA8442, MZAI5563, MZA18036, MZA15264, MZA10384, MZA12874, MZA12454, MZA8926 Y MZA5057, as! como que esté ligado (o en algunas realizaciones, ligado estrechamente, por ejemplo, que no presente una frecuencia de recombinación de más de 10%) con estos QTL marcadores; y además, cualquier locus marcador que esté localizado en los intervalos de QTL cromosómicos, incluyendo los siguientes: (i) MZA8381 Y MZA18180; (ii) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA 15490 Y MZA2038; (iv) bnlg1458b y umcl261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261a; y (viii) bnlg1327 y umcl262a. En algunas realizaciones, los QTL marcadores preferidos a usar se seleccionan entre MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826Y MZA91 05. Cuando se desea un sistema que efectúe la detección o la correlación de marcadores, el sistema también podrá incluir un detector configurado para detectar una o más señales de salida del conjunto de sondas o cebadores marcadores, o un amplicón de éstos, de modo de identificar la presencia o la ausencia del alelo; y/o instrucciones ES 2 498 440 A2 de sistema que correlacionan la presencia la o ausencia del alelo favorable con la resistencia predicha. la configuración precisa del detector dependerá del tipo de marca usada para delectar el alelo marcador. las realizaciones típicas induyen detectores lumlnicos, detectores de radiactividad y semejantes. la detección de emisiones luminosas o de otras marcas de sondas indica la presencia o la ausencia de un alelo marcador. De forma similar, la forma precisa de las instrucciones puede variar dependiendo de los componentes del sistema, por ejemplo, pueden estar presentes como software del sistema en una o más unidades integradas del sistema, o pueden estar presentes en uno o más ordenadores o medios que pueden ser leidos por ordenadores conectados operativamente con el delector. En una realización típica, las instrucciones del sistema induyen al menos una tabla de referencia que incluye una correlación entre la presencia o la ausencia del alelo favorable y la resistencia conferida recientemente, la resistencia mejorada o la susceptibilidad predicha. En algunas realizaciones, el sistema puede estar compuesto por elementos separados, o puede estar integrado en una única unidad para facilitar la detecciÓn de los alelas marcadores y realizar las correlaciones entre los marcadores y los caracteres de resistencia. En algunas realizaciones, el sistema también puede incluir una muestra, por ejemplo, ADN genómico, ADN genómico amplificado, ADNc, AONc amplificado, ARN, o ARN amplificado de maíz o de un tejido vegetal seleccionado de maiz. Los conjuntos de elementos también son una caracteristica de la invenciÓn. Por ejemplo, un conjunto de elementos puede incluir cebadores o sondas apropiados para detectar loci marcadores ligados COn la resistencia e instrucciones para usar los cebadores o las sondas para detectar los loci marcadores y correlacionar los loci con la resistencia al MRCV prediCha. Además, los conjuntos de elementos pueden incluir materiales de envasado para alOjar las sondas, los cebadores o las instl1Jcciones, controles, tales como reacciones de amplificación de control, que incluyen sondas, cebadores o ácidos nudeicos molde para realizar las amplifICaciones, marcadores de tamaño molecular, o semejantes. Definiciones Antes de describir la presente invención en detalle, ha de comprenderse que esta invención no se limita a realizaciones particulares, sino que, por supuesto, puede variar. También ha de comprenderse que la terminologra usada en la presente documentación tiene el objeto de describir realizaciones particulares solamente, y no ha de interpretarse como limitativa de la invención. Como se las usa en esta memoria descripliva yen las reivindicaciones adjuntas, los términos en singular y las formas en singular #un", #uno" y "el", por ejemplo, incluyen las referencias en plural, a menos que el contenido indique claramente lo contrario. Por consiguiente, por ejemplo, una referencia a #planta', "la planta" o ·una planta' también incluye una pluralidad de plantas; también, dependiendo del contexto, el uso del término ·planta" lambién puede incluir la progenie de la planta, similar o idéntica desde el punto de vista genélico; el uso del término ~un Bcido nucleico" opcionalmente incluye, en términos practicos, mudlas copias de la molécula de ácido nucleico; de forma similar, el lérmino "sonda" Opcionalmente (y lipicamenle) abarca mudlas moléculas de sonda similares o idénticas. A menos que se indique lo contrario, los ácidos nudeicos se escriben de izquierda a derecha en la orientación S' a 3'. Los rangos numéricos mencionados en la memoria descriptiva incluyen los números que definen el rango, e incluyen cada número entero o cualquier fracción no entera dentro del rango definido. A menos que se los defina de otro modo, todos los términos técnicos y cientlficos usados en la presente documentación tienen el mismo significado que le daun experto en la materia al que concierne la invención. Aunque puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a aquellos descritos en la presente documentación en la préclica para evaluar la presente invención, los materiales y los métodos preferidos son aquellos descritos en la presente documentación. Al describir y reivindicar la presente invención, se usará la terminología que se indicará a conb'nuación, de acuerdo con las definiciones correspondientes Una ·planta" puede ser una planta complela, cualquier parte de ésta, o un cultivo de células o lejidos derivados de una planta. Por consiguiente, el término ·planta" puede designar cualquiera de los siguientes elementos: plantas completas, componentes u órganos de plantas (por ejemplo, hojas, tallos, raíces, etcétera) , tejidos vegetales, semillas, células vegetales y/o progenie de éstas. Una célula vegetal es una célula de una planta, tomada de una planta o derivada a Iravés del cultivo de una célula tomada de una planta. Por consiguiente, el término 'planta de maíz" induye plantas de maíz completas, células vegetales de maiz, proloplastos de plantas de maiz, células vegetales de maiz o cullivos de tejidos de maiz a partir de los cuales pueden regenerarse plantas de maíz, callos de plantas de maíz, cúmulos de plantas de maiz y células vegetales de maíz que eslán intactas en las plantas de maíz o en partes de las plantas de maiz, tales como semillas de maiz, vainas de maíz, flores de marz, cotiledones de maiz, hojas de maíz, tallos de marz, retoños de maiz, raíces de maíz, épices de raices de maíz y semejantes. El "germoplasma~ designa el material genético de un individuo (por ejemplo, una planta) , de un grupo de individuos (por ejemplo, una linea vegetal, una variedad o una familia) o de un don derivado de una línea, una variedad, una especie o un cultivo. El germoplasma puede ser parte de un organismo o una célula, o pUede estar separado del organismo o la célula. En general, el germoplasma provee material genético con una composición molecular especifica que provee una base fisica para algunas o todas las cualidades hereditarias de un ES 2 498 440 A2 organismo o un cultivo celular. Como se usa en la presente documentación, el germoplasma induye células, semillas o tejidos a partir de los cuales pueden desarrollarse nuevas plantas, o partes de plantas, tales como hojas, tallos, polen o células, que pueden cultivarse para obtener una planta completa. El término "alelo· designa una de dos o más secuencias de nucleótidos diferentes halladas en un locus específico. Por ejemplo, puede haber un primer alelo en un cromosoma, al tiempo que hay un segundo alelo en un segundo cromosoma homólogo, por ejemplo, como es el caso para los distintos cromosomas de un individuo heteocigoto, o entre distintos individuos homocigotos o helerocigolos en una población. Una -alelo favorable" es el alelo en un 10aJs partiaJlar que confiere o contribuye a un fenotipo deseable desde el punto de vista agricola, por ejemplo, resistencia al MRCV, o como alternativa, es un alelo que peonite la identificación de plantas susceptibles que pueden ser eliminadas de un programa de cultivo o siembra. Un alelo favorable de un marcador es un alelo marcador que segrega con el fenotipo favorable, o como alternativa, segrega con el fenotipo de las plantas susceptibles, por lo que proporciona el beneficio de permitir la identificación de plantas susceptibles a la enfennedad. Una fonna alélica favorable de un segmento cromosómico es un segmento cromosómico que incluye una secuencia de nucleótidos Que contribuye al desempel'lo agricola superior en uno o más loci genéticos localizados fisicamente en el segmento cromosómico. La "frecuencia de un alelo" designa la frecuencia (la p-oporción o el porcentaje) con Que está presente el alelo en un locus en un individuo, en una linea o una población de lineas. Por ejemplo, para un alelo "A", los individuos diploides de genotipo "AA", "Aa", o "aa" tienen frecuencias de alelas de 1, 0, 0, 5 ó 0, 0, respectivamente. Es posible estimar la frecuencia del alelo en una linea promediando las frecuencias de los alelas de una muestra de individuos de dima linea. De forma similar, es posible calcular la frecuencia del alelo dentro de una población de lineas promediando las frecuencias de los alelas de las lineas Que componen la población. Para una población con una cantidad finita de individuos o lineas, puede expresarse la frecuencia de un alelo como un conteo de individuos o lineas (o rualQuier otra agrupación especifica) que contienen el alelo. Un alelo presenta una correlación "positiva" con un carácter cuando esta ligado a él, y cuando la presencia del alelo es un indicador de que el caracter o la fonna del carácter deseado se hallarán en una planta Que comprenda el alelo. Un alelo presenta una correlación negativa con un carácter cuando esta ligado a él, y cuando la presencia del alelo es un indicador de que el carácter o la forma del carácter deseado no se hallarán en una planta Que comprenda el alelo Un individuo es "homocigoto' si el individuo tiene solamente un tipo de alelo en un locus dado (por ejemplo, un individuo diploide tiene una copia del mismo alelo en un locus de cada uno de los dos cromosomas homólogos) . Un individuo es "heterocigoto' si hay más de un tipo de alelo presente en un locus dado (por ejemplo, un individuo diploide con una copia de cada uno de los dos alelas diferentes) . El término "homogeneidad" indica que los miembros de un grupo tienen el mismo genotipo en uno o mas loci especificos. En contraste, se usa el téonino "heterogeneidad" para indicar que los individuos en el grupo tienen genotipos diferentes en uno o mas loci especificos. Un "Iocus' es una región cromosómica en la que se halla un ácido nucleico polimórfico, un determinante de carácter, un gen o un marcador. Por consiguiente, por ejemplo, un "Iocus genético· es una localización cromosómica especifica en el genoma de una especie puede hallarse un gen específico. EL ténnino "Iocus de carácter cuantitativo" o "OTL" hace referencia a un locus genético polim6rfico con al menos un alelo Que está correlacionado con la expresión diferencial de un carácter fenotipico en al menos un antecedente genético, por ejemplo, en al menos una población de cuhivo o progenie. Un QTL puede actuar a través de un único mecanismo genético o a través de un mecanismo poligénico. Los términos "marcador", "marcador molecular", "ácido rudeico marcador" y "Iocus marcador" designan una secuencia de nucleótidos, o el producto cocliflcado por ella (por ejemplo, una proteina) , usada como punto de referencia para identificar un locus ligado. Un marcador puede derivar de una secuencia de nucleótidos genómica o de secuencias de nudeótidos expresadas (por ejemplo, de un ARN separado o un ADNc) . o de un polipéptido codificado. El término también hace referencia a secuencias de ácidos nucleicos complementarias o adyacentes a las secuencias marcadoras, tales como los ácidos nucleicos usados como sondas o pares de cebadores capaces de amplificar la secuencia marcadora. Una "sonda marcadora" es una secuencia o una molécula de ácido nudeico Que puede usarse para identificar la presencia de un locus marcador, por ejemplo, un ácido nucleico sonda Que es complementario con la secuencia de un locus marcador. Como alternativa, en algunos aspectos, una sonda marcadora designa una sonda de cualquier lipo que es capaz de distinguir (es decir, a nivel del genotipo) el alelo particular presente en un locus marcador. Los ácidos nudeicos son ·complementarios~ cuando hibridan especlficamente en solución, por ejemplo, de aQJerdo con las reglas de apareamiento de bases de Watson-Crick. Un "Iocus marcador" es un locus que puede usarse para rastrear la p-esenda de un segundo locus ligado, por ejemplo, un locus ligado que codifica o contribuye a la expresión de un carácter fenotipico. Por ejemplo, puede usarse un locus marcador para monitorear la segregadón de alelas en un locus, tal como un OTl, ligados genética o fisicamente al 100000s marcador. Por consiguiente, un "alelo marcador", como alternativa un "alelo de un locus marcador", es uno de una pluralidad de secuendas de nucleótidos polimórficas halladas en un locus marcador en una población Que presenta polimorfismo en el locus ES 2 498 440 A2 marcador. En algunos aspectos, en la presente invención se proveen loci marcadores que están correlacionados con la resistencia al MRCV en maíz. Se espera que cada uno de los marcadores identificados esté en proximidad física y genética cercana (lo que resulta en una asociación fisica ylo genética) con un elemento genético, por ejemplo, un QTl, que contribuye a la resistencia. Los "marcadores genéticos~ son ácidos nucleicas que presentan polimomsmo en una población, donde los alelas de dichos marcadores pueden detectarse y distinguirse empleando uno o más métodos analíticos, por ejemplo, RFlP, AFlP, isozimas, SNP, SSR. y semejantes. El término también hace referencia a secuencias de ácidos nucleicos complementarias con las secuencias genómicas, tales como los ácidos nllCleicos usados como sondas. los marcadores que corresponden a polimorfismos genéticos entre los miembros de una población pueden detectarse utilizando métodos bien establecidos en la técnica. Éstos incluyen, por ejemplo, los métodos de amplificación especifica de secuencias basados en peR, la detección de polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFlP) , la detección de marcadores de isozimas, la detección de polimorfismos de polinucleótidos por hibridación específica de alelos (ASH) , la detección de secuencias amplificadas variables en el genoma de la planta, la detección de la replicación autosostenida de secuencias, la detección de repeticiones de secuencias simples (SSR) , la detección de pOlimorfismos de nude6lidos individuales (SNP) , o la detección de polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFlP) . También se conocen métodos bien establecidos para detectar marcas de secuencias expresadas (EST) y marcadores SSR derivados de secuencias EST y AON polimórfico amplificado al azar (RAPO) . Un ~mapa genético· es una descripción de las relaciones de ligamiento genético entre loci en uno o más cromosomas (o grupos de ligamiento) en una especie dada, generalmente ilustrada en una forma diagramática o tabular. El "mapeo genético~ es el proceso que comprende definir las relaciones de ligamiento entre los loci mediante el uso de marcadores genéticos, poblaciones que segregan los marcadores y principios de frecuencia de recombinación convencionales. Una "localización en un mapa genético· es una Iocatización en un mapa genético respecto de los marcadores genéticos circundantes, en el mismo grupo de ligamiento en el que puede hallarse un marcador específico para una especie dada. En contraste, un "mapa físico· del genoma hace referencia a las distancias absolutas (por ejemplo, medidas en pares de bases o fragmentos genéticos aislados y superpuestos contiguos, por ejemplo, contigs) . Un mapa físico del genoma no tiene en cuenta el comportamiento genético (por ejemplo, las frecuencias de recombinación) entre distintos puntos en el mapa físico. Una "frecuencia de recombinación genética" es la frecuencia de un evento de cruzamiento (recombinación) entre dos loo genéticos. Puede observarse la frecuencia de recombinación siguiendo la segregación de marcadores ylo caracteres después de la meiosis. Una frecuencia de recombinación genética puede expresarse en centimorgans (cM) , donde un cM es la distancia entre dos marcadores genéticos que presentan una frecuencia de recombinación de 1% (es decir, ocurre un evento de cruzamiento entre estos dos marcadores una vez cada 100 divisiones celulares) . Como se usa en la presente documentación, el término "ligamiento" describe el grado con el que un locus marcador está "ligado' con otro locus marcador o con algün otro locus (por ejemplo, un locus de resistencia) . Como se usa en la presente documentación, el "equilibrio de ligamiento' describe una situación en la que dos marcadores segregan en forma independiente, es decir, se separan al azar entre la progenie. los marcadores que presentan equitibrio de ligamiento se consideran no ligamiento (estén o no en el mismo cromosoma) . Como se usa en la presente documentación, el "desequilibrio de ligamiento" describe una situación en la que dos marcadores segregan de una forma no azarosa, es decir, tienen una frecuencia de recombinación menor que 50% (y por definición, están separados por menos de 50 cM en el mismo grupo de asociación) . los marcadores que presentan desequilibrio de ligamiento se consideran ligados. Este ligamiento ocurre cuando el locus marcador y un locus asociado se hallan juntos en la progenie de las plantas con mayor frecuencia que aquella con que se los halla separados. Como se usa en la presente documentación, el ligamiento puede ser entre dos marcadores, o como alternativa, entre un marcador y un fenotipo. Un locus marcador puede estar asociado (ligado) a un carácter, por ejemplo, un locus marcador puede estar asociado con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada a un patógeno de plantas cuando el locus marcador se halla en desequilibriO de ligamiento can el carácter de resistencia. El grado de ligamienlo enlre un marcador molecular y un carácter fenotlpico se mide, por ejemplo, como una probabilidad estadística de ca-segregación de dicho marcador molecular con el fenotipo. Como se usa en la presente documentación, la relación de ligamiento entre un marcador molecular y un fenotipo se proporciona como una "probabilidad" o una "probabilidad ajustada~. El valor de probabilidad es la probabilidad estadística de que la combinación particular de un fenotipo y la presencia o la ausencia de un alelo marcador particular se dé por azar. Por consiguiente, cuanto menor es el valor de probabilidad, mayor es la probabilidad de que un fenotipo y un marcador particular ca-segreguen. En algunos aspectos, el valor de probabilidad se considera "significativo' o "no significativo~. En algunas realizaciones, un valor de probabilidad 0, 05 (p = 0, 05, o un 5% de probabilidad) de apareamiento al azar se considera una indicación significativa de co-segregación. Sin ES 2 498 440 A2 embargo, la presente ¡nvendón no se limita a esta referencia en partiaJlar, y una probabilidad aceptable puede ser OJalquier probabilidad menor Que 50% (p =0, 5) . Por ejemplo. una probabilidad significativa puede ser menor que 0, 25, menor que 0, 20, menor que 0, 15 o menor que 0, 1. El término "ligados físicamente" se usa algunas veces para indicar que dos loci, por ejemplo, dos loo marcadores, están físicamente presentes en el mismo cromosoma. Ventajosamente, los dos loei están ligados en proximidad cercana, de modo que la recombinación entre los pares de cromosomas homólogos no afecta los dos loo durante la meiosis con gran frecuencia. por ejemplo. de modo que los loci asociados co-segregan al menos aproximadamente 90% de las veces, por ejemplo, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99, 5%, 99, 75% o más de las veces. En esta solicitud, la frase "ligado estrechamente" denota que la recombinación entre dos toei asociados ocurre con una frecuencia igualo menor que aproximadamente 100, {, (es decir, están separados en un mapa genético por no más de 10 cM) . En otros términos, los loo ligados estrechamente co-segregan al menos 90% de las veces. Los loo marcadores son especialmente útiles en la presente invención cuando demuestran una probabilidad de co-segregación (ligamiento) significativa con un carácter deseado (por ejemplo, resistencia a patógenos) . Por ejemplo, en algunos aspectos, estos marcadores pueden denominarse marcadores QTL ligados. En otros aspectos, los marcadores moleculares especialmente útiles son aquellos marcadores ligados o ligados estrechamente_ En algunos aspectos, el ligamiento puede expresarse como rualquier límite o rango deseado. Por ejemplo, en algunas realizaciones, dos loo ligados son dos loei que están separados por menos de 50 cM de unidades de mapa. En otras realizaciones, los loci ligados son dos loci que están separados por menos de 40 cM. En otras realizaciones, dos IOCi ligados son dos loei que estan separados por menos de 30 cM. En otras realizaciones, dos loci ligados son dos loci que están separados por menos de 25 cM. En otras realizaciones, dos loo ligados son dos loei que están separados por menos de 20 cM. En otras realizaciones, dos loo ligados son dos loei que están separados por menos de 15 cM. En algunos aspectos, es ventajoso definir un rango de ligamiento fijo, por ejemplo, entre 10 y 20 cM, o entre 10 y 30 cM, o entre 10 y 40 cM. Cuanto más estrechamente está ligado un marcador con un segundo lacus, se convierte en un mejor indicador para dicho segundo lorus. Por consiguiente, en una realización, los loei ligados estrechamente, tales como un locus marcador y un segundo locus presentan una frecuencia de recombinación entre loci de 10% o menor, preferiblemente aproximadamente 9% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 8% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 7% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 6% o menor, aun más preferiblemente aproximadamente 5% o menor, aún mas preferiblemente aproximadamente 4% o menor, aun más preferiblemente aproximadamente 3% o menor, y aún más preferiblemente aproximadamente 2% o menor. En realizaciones muy preferidas, los loci relevantes presentan una frecuencia de recombinación de aproximadamente 1% o menor, por ejemplo, aproximadamente 0, 75% o menor, más preferiblemente aproximadamente 0, 5% o menor, o aún más preferiblemente aproximadamen te 0, 25% o menor. Se dice que dos loo localizados en el mismo cromosoma, a una distancia que permite la recombinación entre ambos a una frecuencia menor que 10% (por ejemplo, aproximadamente g%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0, 75%, 0, 5%, 0, 25% o menor) , también están "próximos" uno del otro. En algunos casos, dos marcadores diferentes pueden tener tas mismas coordenadas en un mapa genético. En este caso, los dos marcadores están en una proximidad tan cercana uno con otro que la recombinación entre ambos ocurre con una frecuencia tan baja que no puede detectarse. Cuando se hace referencia a la relación entre dos elementos genéticos, tal como un elemento genético que contribuye a la resistencia y un marcador proximal, el ligamiento de "acoplamiento' de fase indica el estado en que el alelo "favorable" en ellocus de resistencia está ligado fisicamente a la misma cadena cromosómica que el alelo "favorable" del locus marcador asociado respectivo. En el acoplamiento de fases, ambos alelas favorables se heredan juntos en la progenie que hereda la cadena cromosÓmica. En el ligamiento de fases de "repulsión", el alelo "favorable" en ellocus de interés (por ejemplo, un QTL de resistencia) está asociado físicamente a un alelo "desfavorable" en el locus marcador proximal, y los dos alelas "favorables" no se heredan juntos (es decir, los dos loci están "fuera de fase" uno de otro) . Como se los usa en la presente documentación, los términos "intervalo Cfomosómico' o "segmento cromos6mico' designan una extensión lineal contigua de ADN genómico que reside in planta en un único cromosoma. Los elementos genéticos o los genes localizados en un mismo intervalo cromosómico están asociados fisicamente. El tamai'lo de un intervalo cromosómico no está particularmente limitado. En algunos aspectos, por ejemplo, en el contexto de la presente invención, generalmente los elementos genéticos localizados en un mismo intervalo Cfomosómico también están ligados genéticamente, tipicamente con una distancia de recombinación genética, por ejemplo, menor o igual que 20 cM, o como alternativa, menor o igual que 10 cM. Es decir, dos elementos genéticos en un mismo intervalo Cfomosómico se recombinan con una frecuencia menor o igual que 20% o 10%. ES 2 498 440 A2 En un aspecto, aJalquier marcador de la invención está ligado (genética o físicamente) con cualquier otro marcador que esta a una distancia de 50 cM o menor. En otro aspecto, cualquier marcador de la invención está ligado estrechamente (genética o físicamente) con cualquier otro marcador que esta en proximidad cercana, por ejemplo, a una distancia de 10 cM o menor. Dos marcadores ligados estrechamente en el mismo cromosoma pueden estar localizados a una distancia de 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0, 75, 0, 5 Ó 0, 25 cM, o menor. La frase "enfermedad causada por el virus del mal de Río Cuarto" o "enfermedad causada por el MRCV" hace referencia a una enfermedad causada en una planta por una infección de MRGV. La "resistencia conferida recienlemente~ o la "resistencia mejorada" al MRCV en una planta de maíz es una indicación de que la planta de maíz se ve menos afectada en su rendimiento, su capacidad de supervivencia u otras caracteristicas agrícolas relevantes cuando se introducen los agentes causales de la enfennedad. la resistenda es un término relativo e indica que la planta infectada produce un menor rendimiento de malz que otra planta más susceptible tratada de manera similar. Vale decir, las condiciones causan una disminución atenuada en la supervivencia ylo el rendimiento de la planta en una planta de malz resistente, en comparación con una planta de malz susceptible. Un experto en la materia ha de apreciar que la resistencia de una planta de maíz al MRCV varía ampliamente, puede representar un espectro de fenotipos más resistentes o menos resistentes, y puede variar dependiendo de la severidad de la infección. Sin embargo, mediante la observación simple, un experto en la materia ha de poder determinar la resistencia o la susceptibilidad relativa de distintas plantas, lineas de plantas o familias de plantas al MRCV, y además, también han de poder reconocer las graduaciones fenotlpicas de la "resistencia" (se presenta un ejemplo de un sistema de calificación en el Ejemplo 7 más adelante) . Como se usa en la técnica, la "resistencia" algunas veces se denomina "resistencia general", "resistencia que disminuye la tasa" o "resistencia parcial". El término "cruzado" o "cruzamiento", en el contexto de esta invención, designa la fusión de gametos por polinización para producir progenie (por ejemplo, células, semillas o plantas) . El término comprende cruzamientos sexuales (la polinización de una planta por otra) y autocruzamientos (auto-polinización. por ejemplo, cuando el polen y el óvulo pertenecen a la misma planta) . El término "introducción" designa la transmisión de un alelo deseado de un locus genético de un antecedente genético a otro. Por ejemplo, la introducción de un alelo deseado en un locus especifico puede transmitirse a al menos una progenie mediante el cruzamiento sexual entre dos progenitores de la misma especie, donde al menos uno de los progenitores tiene el alelo deseado en su genoma. Como alternativa, por ejemplo, puede darse la transmisión de un alelo mediante la recombinación entre dos genomas donantes, por ejemplo, en un protoplasto fusionado, donde al menos uno de los protoplastos donantes tiene el alelo deseado en su genoma. El alelo deseado puede ser, por ejemplo, un alelo seleccionado de un marcador, un Oll, un transgen, o semejantes. En cualquier caso, la descendencia que comprende el atelo deseado puede retrocruzarse repetidamente con una línea que tiene un fondo genético deseado, y puede seleccionarse el alelo deseado para obtener la fijación del alelo en un fondo genético seleccionado. Una "linea" o una "cepa" es un grupo de individuos con progenitores idénticos que generalmente se endocrian en 45 algún grado, y que generalmente son homocigotos y homogéneos en la mayor parte de sus loo (isogénicos o casi isogénicos) . Una "sublinea" designa un subconjunto endocriado de descendientes que son genéticamente distintos de otros subconjuntos endocriados de forma similar que descienden del mismo progenitor. Una "linea ancestral" es una linea progenitora usada como fuente de genes, por ejemplo, para el desarrollo de lineas elite. Una ' población ancestral" es un grupo de ancestros que han con tribuido a la mayor parte de la variación genética usada para desarrollar lineas elite. los "descendientes" son la progenie de los ancestros, y pueden estar separados de sus ancestros por muchas generaciones de cruzamiento. Por ejemplo, las lineas elite son tos descendientes de sus ancestros. Una "estructura de pedigri" define la relaCión entre un descendiente y cada ancestro que da lugar a dicho descendiente. Una estructura de pedigri puede abarcar una o más 55 generaciones, y describe las relaciones entre el descendiente y sus padres, sus abuelos, sus bisabuelos, etcétera. Una "linea elite" o una "cepa elite" es una linea superior desde el punto de visla agricola, que es el resultado de muchos ciclos de cruzamiento y selección de desempei\o agricola superior. Hay numerosas Uneas elite disponibles y conocidas por aquellos expertos en la materia del cultivo de maíz. Una ~población elite" es un Conjunto de individuos o lineas elite que puede usarse para representar el estado de la técnica en terminas de genotipos superiores desde el punto de vista agrícola de una especie de cultivo dada, tal como el maíz. De forma similar, un "germoplasma elite' o una cepa elite de germoplasma es un germoplasma superior desde el punto de vista agrícola, tipicamente derivado y/o capaz de dar lugar a una planta con un desempeno agrlcola superior, tal Como una línea elite de maíz existente o recién desarrollada. ES 2 498 440 A2 En contraste, una "cepa de maíz exótica" o un "germoplasma de maíz exótico" es una cepa o un germoplasma derivado de un maíz Que no pertenece a una linea o una cepa de gemoplasma elite de maíz. En el coolexto de un cruzamiento entre dos plantas o cepas de germoplasma de maiz, un germoplasma exótico no está relacionado estrechamente con la descendencia del germoplasma elite con el que se cruza. Más comunmente, el germoplasma exótico no deriva de ninguna linea elite de maíz, sino que se selecCiona para introducir nuevos elementos genéticos (típicamente nuevos alelas) en un programa de desarrollo. El término "amplificar", en el contexto de la amplificación de ácidos nudeicos, comprende cualquier proceso en el que se producen copias adicionales de un ácido nudeico seleccionado (o una forma transcripta de éste) , los métodos de amplificación típicos incluyen varios métodos de replicación basados en polimerasa, incluyendo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , métodos mediados por ligasa, tales como la reacción en cadena de la ligasa (LCR) , y métodos de amplificación basada en ARN polimerasa (por ejemplo, por transcripción) . Un ~amplicón" es un ácido nucleico amplificado, por ejemplo, un acido nucleico producido mediante la amplificación de un ácido nucleico molde por un método de amplificación disponible (por ejemplo, peR, lCR, transcripción o semejantes) . Un ", áCido nudeico genómico" es un acido nucleico que corresponde en secuencia a un aCido nudeico hereditario en una célula. los ejemplos comunes incluyen ADN genómico nudear y amplicones de este. En algunos casos, un ácido nucleico genómico es diferente de un ARN que ha sufrido ·splicing", o un ADNc correspondiente, debido a que el ARN que ha sufrido "splicing" o el ADNc han sido procesados, por ejemplo, por la maquinaria de ~splicing", para retirar los intrones. Los acidos nudeicos genómicos opcionalmente comprenden secuencias no transcritas (por ejemplo, secuencias estructurales cromosómicas, regiones promotoras o regiones potenciadoras) y/o no traducidas (por ejemplo, intrones) , mientras que el ARN separado/ADNc típicamente no contiene secuencias no transcritas o ¡ntrones. Un "acido nudeico molde" es un acido nudeico que sirve como molde en una reacción de amplificación (por ejemplo, una reacción de amplificación basada en polimerasa, tal como la PCR, una reacción de amplificación basada en ligasa, tal como la lCR, una reacción de transcripción, o semejantes) . Un ácido nudeico molde puede ser de origen genómico, o como alternativa puede derivar de secuencias expresadas, por ejemplo, un ADNc o una EST. Un "ácido nucleico exógeno" es un ácido nucleico que no es nativo de un sistema especifico (por ejemplo, un germoplasma, una planta o una variedad) , respedo de su secuencia, su posición genómica o ambos. Como se los usa en la presente documentación, los términos ~exógenos" o "heterólogos' , aplicados a polinucleótidos o polipéptidos, típicamente hacen referencia a moléculas que han sido introducidas artificialmente en un sistema biológico (por ejemplo, una célula vegetal, un gen vegetal, una especie o una variedad vegetal particular, o un cromosoma vegetal estudiado) , que no son nativas respedo del sistema biológico partiCUlar. los términos pueden indicar que el material relevante esta originado en una fuente distinta de una fuente de ocurrencia natural, o puede designar moléculas que tienen una configuración, una localización genética o una disposición de partes no natural. En contraste, por ejemplo, un gen "nativo" o "endógeno" es un gen que no contiene elementos de ácidos nudeicos codificados por fuenles distintas del cromosoma o de otro elemento genético con el cual se halla normalmente en la naturaleza. Un gen, un transcrito o un polipéptido endógeno es codificado por su locus cromosómico natural, y no se introduce artificialmente en la célula. El término "recombinante", en referencia a un acido nucleico o un polipéptido, indica que el material (por ejemplo, un ácido nudeico recombinante, un gen, un polinudeólido o un polipéptido) ha sido alterado por la intervención humana. Generalmente, la disposiCión de las partes de una molécula recombinante no es una configuración nativa, o la secuencia primaria del polinucleótido o el polipéptido recombinante ha sido manipulada de algún modo. la alteración para proporcionar el material recombinante puede efectuarse sobre el material dentro o fuera de su ambiente o estado natural. Por ejemplo, un acido nucleico de ocurrencia natural se convierte en un acido nudeico recombinante si es alterado, o si se transcribe a partir de un ADN que ha sido alterado, por medio de la intervención humana sobre la célula en la que se origina. Un marco abierto de lectura de la secuencia de un gen es recombinante si dicha secuencia de nucleótidos ha sido extraida de su contexto natural y clonada en cualquier tipo de vector de ácido nucleico artificial. Los protocolos y los reactivos para producir moléculas recombinantes, especialmente ácidos nudeicos recombinantes, son comunes y de rutina en la técnica. En una realización, puede crearse un cromosoma artificial para insertarlo en plantas de maiz de acuerdo con cualqUier método conocido en la técnica (por ejemplo, procesos de transferencia directa, tales como, por ejemplo, captación de ADN inducida por PEG, fusión de protoplaslos, microinyección, eleclroporación y bombardeo con microproyediles) . Un cromosoma artificial es un trozo de ADN que puede replicarse de manera estable y segregar junto con los cromosomas endógenos. Tiene la capacidad de alojar y expresar genes heterólogos insertados en él. La integración del ADN heterólogo en la megarregión de replicación (sitio de inicio de la replicación primario de los centro meros) o cerca de él inicia una amplificación a gran escala de segmentos cromosómicos con un tamal"io del orden de las megabases, lo que resulta en la formación de cromosomas de novo. Véase, por ejemplo, la Patente de los EEUU Nº 6077697, incorporada en la presente documentación a modo de referencia. El término recombinante también puede hacer referencia a un organismo que aloja material recombinante, por ES 2 498 440 A2 ejemplo, una planta que comprende un ácido nucleico recombinanle se considera una planta recombinante. En algunas realizaciones, un organismo recombinanle es un organismo transgénico. El término "introducido" en referencia a la Iranslocación de un ácido nucleico heterólogo o exógeno en una célula, hace referencia a la incorporación del ácido nucleico en la célula usando cualquier metodología. El término comprende métodos de introducción de ácidos nudeicos tales como "transfección", "transformación" y ·Iransducción~. Como se usa en la presente documentación, el leonino 'vedor" hace referencia a polinucleólidos u otras moléculas que transfieren segmentos de ácidos nucleicos a una célula. Algunas veces se usa el término "vehlculo' indistintamente con "vector". Un vedor opcionalmente comprende partes que median en el mantenimiento del vector y permiten el uso que se pretende de él (por ejemplo, secuencias necesarias para la replicación, genes que imparten resistencia a drogas o antibióticos, un sitio de donación múltiple o elementos promotoreslpotenciadores unidos operativamente que permiten la expresión de un gen donado) . los vedores comúnmente derivan de plásmidos, bacteriófagos o virus vegetales o animales. Un "vector de clonación", un "'veclor de transporte" o un "vector de subclonación" contienen partes unidas operativamente que facilitan los pasos de subclonación (por ejemplo, un sitio de donación múltiple que contiene múltiples sillos de restricción con endonudeasas) . El término "vector de expresión", como se usa en la presente documentación, hace referencia a un vector que comprende secuencias polinucleotrdicas unidas operativa mente que facilitan la expresión de una secuencia codificante en un organismo huésped particular (por ejemplo, un vector de expresión en bacterias o un vector de expresión en plantas) . las secuencias polinudeotídicas que facilitan la expresión en procariotas tlpicamente incluyen, por ejemplo, un promotor, un operador (opcional) y un sitio de unión a ribosomas, comúnmente con otras secuencias. las células eucariotas pueden usar promotores, potenciadores, sei'\ales de terminación y poliadenilación, y otras secuencias generalmente diferentes de aquellas usadas por los procariotas. El término "planta transgénica" hace referencia a una planta que comprende en sus células un polinudeótido heterOlogo. En general, el polinucleótido heterólogo se integra en forma estable en el genoma, de modo que el polinudeótido pasa a las generaciones sucesivas. El polinucleótido heterólogo puede estar integrado en el genoma solo o como parte de un cassette de expresión recombinante. "Transgénico' se usa en la presente documentación para designar cualquier célula, linea celular, callo, tejido, parte de planta o planta cuyo genotipo ha sido alterado por la presencia de un ácido nucleico heterólogo, incluyendo aquellos organismos o células transgénicas alteradas inicialmente de este modo, así como aquellas creadas por medio de cruzamientos o propagación asexual a partir del organismo o la célula transgénica inicial. El término "transgénico", como se usa en la presente documentación, no comprende la alteración del genoma (cromosómico o exlra-cromasómico) mediante el uso de métodos de cultivo de plantas convencionales (por ejemplO, cruzamientos) o sucesos de ocurrencia natural, tales como fertilización cruzada al azar, infección por virus no recombinantes, transformación por bacterias no recombinantes, transposición no recombinante o mutación espontánea la ~clonación posicional" es un procedimiento de donación en el que se identifica y aisla un ácido nucleico diana sobre la base de su proximidad genómica con un écida nudeico marcador. Por ejemplo, un clon de un ácida nucleico genómico puede induir una parte o la totalidad de dos o más regiones cromosómicas próximas una de otra. Si puede usarse un marcador para identificar el don de ácido nucleico genómico a partir de una biblioteca genómica, pueden usarse métodos convencionales, tales como subclonación o secuenciación para identificar y/o 45 aislar subsecuencias del don localizadas cerca del marcador. Un acido nudeico especifico "deriva de" un ácido nucleico dado cuando se construye usando la secuencia del ácido nudeico dado, o cuando el ácido nudeico especifico se construye usando el ácido nudeico dado Por ejemplo, un AONc o una EST deriva de un ARNm expresado. El término "elemento genético" o "gen" hace referencia a una secuencia de ADN hereditaria, es decir, una secuencia genómica, con significación funcional. El término "gen" también puede usarse, por ejemplo, para designar un AONc y/o un ARNm codificado por una secuencia genómica, asi como la secuencia genómica en sI. El término "genotipo" designa la constitución genética de un individuo (o un grupo de indiViduos) en uno o más loo genéticos, en oposición al carácter observable (el fenotipo) . El genotipo se define a través de los alelos de uno o más loei que ha heredado el individuo de sus progenitores. El término genotipo puede usarse para hacer referencia a la constitución genética de un individuo en un único locus, en múltiples loci, o mas generalmente, puede usarse el término genotipo para hacer referencia a la composición genética de un individuo en lodos los genes de su genoma. Un "haplolipo" es el genotipo de un individuo en una pluralidad de loo genéticos. Tipicamente, los loci genéticos descritos por un haplolipo están asociados física y genélicamente, es decir, estan en el mismo segmento cromosómico. los términos "fenotipo", o "carácter fenotípico· o "carácter" hacen referencia a uno o más caracteres de un 65 organismo. El fenotipo puede observarse a simple vista o con cualquier otro medio de evaluación conocido en la técnica, por ejemplo, microscopia, análisis bioquímicos o un ensayo para determinar la resistencia a una ES 2 498 440 A2 enfermedad particular. En algunos casos, el fenotipo es controlado directamente por un solo gen o locus genético. es decir, un "carácter de un solo gen~. En otros casos, el fenotipo es el resultado de varios genes. Un "fenotipo molecular-es un fenotipo que puede detectarse en el ámbito de una población de (una o más) moléculas. Estas moléculas pueden ser ácidos nudeicos, lales como AON genómico o ARN, proteínas o melabolilos. Por ejemplo. un fenotipo molecular puede ser un perfil de expresión de uno o más productos génicos. por ejemplo, en una etapa especifica del desarrollo de la planta. en respuesta a una condición ambiental o estrés, etcétera. Los perfiles de expresión típicamente se evalúan a nivel del ARN o las proteínas, por ejemplo, en un conjunto de fiados nucleicos o ~chip", o usando anticuerpos u otras proteinas de unión. El término "rendimiento" hace referencia a la productividad por unidad de area de un producto vegetal particular de valor comercial. Por ejemplo, el rendimiento del maiz comúnmente se mide en fanegas de semillas por acre o en toneladas métricas de semillas por hectárea por temporada. El rendimiento es afectado por factores genéticos y ambientales. "Agrlcola' , "caracteres agricolas", y "desempeño agricola" hacen referencia a los caracteres (y los elementos genéticos subyacentes) de una variedad vegetal dada que contribuyen al rendimiento en el curso de una temporada de cultivo. Los caracteres agrlcolas individuales incluyen el vigor de emergencia, el vigor vegetativo, la tolerancia al estrés, la resistencia o la tolerancia a enfermedades, la resistencia a herbicidas, la ramificación, el florecimiento, la producción de semillas, el tamaño de las semillas, la densidad de las semillas, la altura, el rendimiento en la cosecha y semejantes. Por consiguiente, el rendimiento es la culminación final de todos los caracteres agrícolas. Un "conjunto' de marcadores o sondas hace referencia a una colección o un grupo de marcadores o sondas, o los datos derivados de éstos, usados para un propósito común, por ejemplo, para identificar plantas de maíz con un carácter deseado (por ejemplo, resistencia al MRCV) . Frecuentemente, los datos que corresponden a los marcadores o las sondas, o los datos derívados de su uso, se almacenan en un medio electrónico. Sí bien cada uno de los miembros de un conjunto posee utilidad para un propósito específico, los marcadores individuales seleccionados entre el conjunto, así como los subconjuntos que incluyen algunos, pero no todos los marcadores, también son efectivos para lograr el propóSito especifico. Una "tabla de búsqueda" es una tabla donde se correlaciona una forma de datos con otra, o una o mas formas de datos con un resultado predicho relevante para los datos. Por ejemplo, una labia de búsqueda puede incluir una correlación entre datos de alelos y un carácter predicho que puede presentar una planta que comprende un alelo dado. Estas tablas pueden ser multidimensionales, y comúnmente lo son, por ejemplo, tienen en cuenta varios alelas en forma simultánea, y opcionalmente tienen en cuenta también otros factores, tales como el trasfondo genético, por ejemplo, para predecir un carácter. Un "medio que puede ser leido por un ordenador" es un medio de almacenamiento de información al que puede accederse con un ordenador, usando una interfase disponible o modificada. Los ejemplos induyen memoria (por ejemplo, ROM, RAM o memoria instantanea) , medios de almacenamiento óptico (por ejemplo, CD-ROM}, medios de almacenamiento magnético (discos duros de ordenador, discos exlraibles, etcétera) , tarjetas perforadas, y muchos otros medios disponibles comercialmente. Puede transmitirse la información entre un sistema de interés y el ordenador, o hada o desde el ordenador y el medio que puede ser leido por un ordenador, para almacenarla o acceder a información almacenada. Esta transmisión puede ser una transmisión eléctrica, o puede efectuarse a través de otros métodos disponibles, tales como un enlace IR, una conexión inalámbrica o semejantes. Las "instrucciones del sistema" son conjuntos de instrucciones que pueden se ejecutadas parcial o completamente por el sistema. Típicamente, los conjuntos de instrucciones están presentes como software de sistema. DESCRIPCiÓN BREVE DE LAS FIGURAS Y LAS SECUENCIAS En la Figura lA se ilustra un análisis de asociación estructurada para un grupo argentlno. Nota: región Significativa (valor de p: menos de 0, 00005) entre las posiciones 65, 99 y 85, 84. Eje X: Distancia expresada en cM desde el extremo del cromosoma 2. Eje Y: Valor de probabilidad. En la Figura 18 se ilustra un análisis de asociación estructurada para un grupo SS. Nota: marcador significativo principal en MRCV1, MZA1525 en la poSición 54, 62 y MZA11826 en la posición 65, 99. Eje X: Distancia expresada en cM desde el extremo del cromosoma 2. Eje Y: Valor de probabilidad. En la Figura 1C se ilustra un análisis de asociación estructurada para otro grupo SS. Nota: El marcador más asociado en el brazo corto del cromosoma 2 fue MZA12899 en la posición 53, 83 (p = 0, 0 (0298) . Eje X: Distancia expresada en cM desde el extremo del cromosoma 2. Eje Y: Valor de probabi lidad. En la Figura 2 se ilustra un mapeo de intervalos para el cruzamiento PH3DTxPH7WT. Cromosoma 2, Máximo de la calificación LOO: PQsición 65, 89, 46% de la variación fenotipica. En la Figura 3A se presentan fotografías de maiz con slntomas de MRCV. En la Figura 38 se presentan fotografias de maiz CQn susceptibilidad al MRCV. ES 2 498 440 A2 En la Figura 4A se ilustra un gráfico de genotipos en la región del QTL y fenotipos promediados (MRCVSC) para un grupo de recombinanles de la población de mapeo de alta resolución BC5F3, obtenida del cruzamiento PH3DTxPH1WT, Se ilustra el trozo del progenitor resistente en el antecedente susceptible y la región de recombinación. La región incluye los recombinanles localizados entre MZA1525-98-A y MZA10094-9-A. En la Figura 48 se ¡lustra un gráfico de genotipos en la región del QTL y fenotipos promediados (MRCVSC) para un grupo de recombinantes de la población de mapeo de alta resolución BC5F3, obtenida del cruzamiento PH3DTxPH7WT. Se ilustra el trozo del progenitor resistente en el antecedente susceptible y la región de recombinación. La región incluye los recombinantes localizados entre MZA15490 y MZA18224. También se incluyen tres recombinantes en el intervalo entre MZA11826 y MZA9105, Y su caracterización genética. El fenotipo se indica con círculos a la derecha del gráfico (circulos negros: susceptible; clrculos blancos: resistente; circulos con líneas diagonales: mezcla de resistente y susceptible; circulos grises: desconocido) . En la Figura 5 se ilustra un mapeo de intervalos para el cruzamiento PH30TxPH7WT. Cromosoma 2, Máximo de la calificación LOO: posición 65, 99 (MZA2038) . No se incluyó MZA 11826 o MZA9105 en el análisis debido a que no eran recombinantes respecto de MZA2038 en esta población específica. Nota: el mapa genético fue adaplado para permitir el mapeo de intervalos en la posición 65, 99; los marcadores MZA16656, MZA15490 Y MZA2038 están muy ligados, a menos de 0, 5 cM, pero se colocaron artificialmente a distancias de 0, 5 cM para este análisis especifico. En la Figura 6 se ilustra un análisis de mapeo de intervalos para el cruzamiento PH9T JxPH890 en regiones de aTL específicas en el cromosoma 2 y el cromosoma 5. Cromosoma 2, Máximo de la calificación LOO: posición 65, 99-68, 8. No hubo recombinantes entre los marcadores preferidos y los marcadores en la posición 68, 8; por lo que solamente se incluyó MZA91 05 como representante de los marcadores preferidos para este análisis. En la Figura 7 se presenta una fotografia de una planta afectada severamente por el MRCV; corresponde a una isollnea para marcadores preferidos que contiene el haplotipo susceptible del cruzamiento PH30TxPH7WT. En la Figura 78 se presenta una fotografía de dos hileras sembradas lado a lado en la región endémica de Río Cuarto, Argentina, donde la hilera a la izquierda corresponde a la isolinea que contiene el haplotipo susceptible y la hilera a la derecha corresponde a la ¡salinea que contiene el alelo resistente para los marcadores preferidos. Estas isallneas se obtuvieron de una sola planta 8C5F2 heterocigota para marcadores preferidos del cruzamiento PH30TxPH7WT. En la Figura 8 se ilustra la región del aTL del cromosoma 2 entre los marcadores MZA15490 y MZA2038. En la Figura 9 se ilustra un gráfico de la reglón del intervalo entre MZA15490 y MZA2038 donde se indica la posición de los fragmentos secuenciados especificas en un grupo de lineas endocriadas susceptibles y resistentes representativas. En la Figura 10 se ilustra una descripción gráfica de un individuo recombinante en et intervalo entre MZA15490 y MZA2038. El punto de recombinación estuvo localizado dentro de PC0644442, para generar un gen quimérico entre progenitores resistentes (PH7WT) y susceptibles (PH30D. La posición de los SNP y los indets se i odica en la región secuenciada. En ta Figura 11 se ilustra el desempeño (calificación del MRoV) de hibridos de maíz bajo una infección de MROV entre clases genotipicas para la región de marcadores preferidos. En el eje X, "-2", '0' Y "2" (clase genotípica) representan las clases genotípicas del haplotipo susceptible, el haplotipo heterocigoto y el haplotipo resistente homocigoto, respectivamente. La Figura 12 es un mapa de intervalos de las calificaciones fenotípicas promedia en tres temporadas de cultivo para la población de mapeo PH7WTxPH30T. Vale deslacar que el máximo de la calificación LOO es cercano a umc1756. La Figura 13 es un mapa de intervalos compuesto de las calificaciones fenotípicas promedio en tres temporadas de cultivo para la población de mapeo PH7WTxPH3DT mapeo. Vale destacar que el máximo de la calificación LOO es cercano al intervalo umc1756-umc1518. La Figura 14 es un mapa de intervalos compuesto de la población de mapeo PH9TJxPH890. El máximo de la calificación LOO para el QTL MRCV1 estuvo localizado en la posición 65, 99-68, 8. La Figura 15 es un alineamiento ClustalW entre SEO ID NG 194 (promotor pco644442 de PH7WT) y SEQ ID W 195 (promotor pc0644442 de PH30T) . La Figura 16 es un alineamiento ClustalW entre SEa ID Nº 196-219 En las siguientes descripciones de secuencias se resume el listado de Secuencias adjunlo. El listado de ES 2 498 440 A2 Secuencias contiene los códigos de una letra para los caracteres de las secuencias de nucleótido y los códigos de tres letras para los aminoácidos, como se define en los alineamientos de la IUPAC-IUB descritos en Nucleic Acids Research 13:3021-3030 (1985) y 8iochemical JoumaI 219 (2) :345-373 (1984) . SEO 10 Nº 1-5, 8-11, 13, 14, 16, 19, 21, 25, 26. 28, 30-33, 35, Y 38-44 son secuencias consenso para los marcadores MZA hallados en la Tabla 6. SEa ID Nº 6, 7, 12, 15, 17, 18, 20, 22-24, 27, 29, 34, 36, Y 37 son secuencias SNP consenso para los marcadores SNP hallados en la Tabla 7. SEO 10 Nº 45-52 son las secuencias de los cebadores izquierdo y derecho para los marcadores públicos hallados en la Tabla 3. SEQ ID Nº 53-168 son los cebadores externo directo, inlerno directo, inverso interno e inverso elClerno para los marcadores MZA hallados en la Tabla 6. SEQ ID N" 169-193 son los cebadores directos e inversos para los marcadores SNP hallados en la Tabla 7. SEQ ID Nº 194 es la región promotora PC0644442 de la linea endocriada de maiz PH7WT. SEQ ID Nº 195 es la región promotora PC0644442 de la linea endocriada de maíz PH30T. SEQ ID Nº 196 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PH30T. SEO ID Nº 197 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz AP19506160. SEQ ID Nº 198 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz AP19506157. SEQ ID Nº 199 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de ma[z AP19506156. SEQ ID Nº 200 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de maíz PH7WT. SEO ID Nº 201 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la I1nea endocriada de maíz 630. SEQ ID Nº 202 es la región de secuencia que incluye MROV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHG63. SEQ ID N" 203 es la región de secuencia que incluye MROV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHK09. SEQ ID N" 204 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de malz PHR33. SEQ ID Nº 205 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de maíz 501. SEO ID Nº 206 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MROV10673 de la línea endocriada de maíz 157. SEO ID Nº 207 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de malz PHK56. SEQ ID Nº 208 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz 661 . SEQ ID Nº 209 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHR03. SEQ ID Nº 210 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 1047. ES 2 498 440 A2 SEa 10 Nº 211 es la region de secuencia que incluVe MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHJ4Q. SEO 10 Nº 212 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 274. SEO 10 Nº 213 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 165. SEO ID Nº 214 es la región de secuencia que ¡nauye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de maíz 873. SEO ID Nº 215 es la región de secuencia que induye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHN47. SEa ID Nº 216 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PH26N. SEa ID Nº 217 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHDG9. SEO ID Nº 218 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz ST10H60. SEQ ID Nº 219 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz PHKP5. DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN La identificación y la selección de plantas de maíz que presentan resistencia al MRCV usando MAS puede proveer un abordaje efectivo e inocuo para el ambiente al superar las pérdidas causadas por esta enfermedad. En la presente invención se proveen loei marcadores de maiz que presentan una co-segregación de significación estadística con la resistencia al MRCV. La detección de estos loci o de loei ligados adicionales puede usarse en programas de desarrollo de maiz asistidos por marcadores para producir plantas resistentes o plantas con resistencia mejorada al MRCV o a fijivirus relacionados. Los marcadores SSR, MZA y SNP ligados identificados en la presente documentación se proveen en las Tablas 1 y 2. Estos marcadores incluyen MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA 15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105. Cada uno de los marcadores de tipo SSR presenta una pluralidad de alelas que pueden visualizarse como amplicones de PCR de distintos tamaños. Los cebadores de PCR que se usean parea generear los eamplicones de mearcadores SSR se proveen en la Tabla 3. Los alelas de los marcadores de tipo SNP se determinean usando un protocolo de hibridación con especificidad por los alelas, como es conocido en la técnica. Los cebadores de PCR usados para amplificar el dominio SNP y las sondas especificas para los alelas usadas para determinar el genotipo dellocus se proveen en las Tablas 6 y 7. Tabla 6 w ~ tT1 Vl N ... 'D t o :> N MZA8926 SEO ID Nº 161 SEO ID Nº 162 SEO ID Nº 163 SEO ID Nº 164 SEO ID Nº 43 MZA5057 SEO ID Nº 165 SEO ID Nº 166 SEO ID Nº 167 SEO ID Nº 168 SEO ID Nº 44 '" '" tT1 (/) N ... 'D :E:: O :> N ES 2 498 440 A2 En las Tablas 6 y 7 se detallan los marcadores SNP que presentaron desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV. En estas labias se proveen las secuencias de los cebadOres de pCR usados para generar un amplicón que contenía el SNP, y de las sondas específicas para los alelos que se usaron para identificar el alelo del SNP en un ensayo de hibridación con especificidad pOr dicho alelo (ensayo ASH) . Según se reconoce en la técnica, cualquier otro marcador que está asociado a un QTL marcador (por ejemplo, un marcador de resistencia a una enfermedad) también puede usarse con este fin. En la presente documentación se proveen ejemplOS de marcadores adicionales que están asociados a los marcadores de resistencia a enfermedades mencionados. Por ejemplo, un marcador ligado puede de1erminarse a partir de lOs marcadores ligados estredlamente indicados en la Tabla 8. Tabla 8 Marcadores li ados pco061820a, pco116928a, sog0930a, pco102443, sog5467ac, cl721 1_1 1, k4-14p, p00135612a, pco101521 , si687005h09c, si707023g07c, cl15901_1a, pco134907, si660032f12i, d7048_1b, cl2578_1 , cl5312_1a, pco094715, sog5829a , cl30_1e , pco125905, sog0690, d36282_1b, pco118508, gpm636, pc0066747a, pc0083425q, sog5844av , bnlg1458b, si606065e12a, cl22018_1, pc0091058, si946053g10, sog1265, sog0743c, d9862_1, pco114887, bnlg1327, sog5587a. d1488_-4a, pc0085208a, sog1295c, sog5609b, sog0912a, tel7sc1ah, si66060d11b, cl1 0933_1 d, cl37019_1 a, sog1856ae, pC01170071, cl40761 _1 a, siaf099388e. pco137067a, sog2274m, d31185_3a, pc0098939a, pco151039r, d 11825_1a, pc0122145b, cl24291 _1a, si618065b03a, si707029g03a, s091495a IDP4006 umc1262a, umc1261a, sog57580 Sin embargo, no se pretende limitar los marcadores ligados que pueden usarse con la invenciÓn a aquellOS 15 mencionados en la Tabla 8 En la invención también se proveen intervalos de QTL cromos6micos que estan correlacionados COn la resistencia al MRCV. Estos intervalos estan localizados en el grupo de ligamiento 2. Cualquier marcador localizado en estos intervalos puede usarse como marcador para la resistencia al MRCV. Estos intervalos incluyen los siguientes: (i) MZA8381 Y MZA18180: (ii) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA15490 Y MZA2038; 25 (iv) bnlg1458b y umc1261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261a: y (viii) bnlg1327 y umc1262a. Los métodos para la identificación de las plantas o el germoplasma de maiz que contienen los alelos preferidos de los loei marcadores de resistencia son una caracteristica de la invención. En estos métodos se utiliza cualquiera de una variedad de protocolos de detección de marcadores para identificar IOci marcadores, dependiendo del tipo de loci marcador. Los métodos ti picos para la detección de marcadores incluyen la amplificación y la detección de los marcadores amplificadOS resuHantes, por ejemplo, mediante los métodos de amplificación basados en la transcripción, PCR, LCR, o semejantes. t-stos incluyen la ASH. la detección de SSR, el analisis de RFLP, Y muchos otros. A pesar de que algunos alelos particulares de un marcador pueden presentar co-segregación con el fenotipo de resistencia o susceptibilidad a una enfermedad, es importante hacer notar que el locus marcador no es 40 necesariamente parte del locus del QTL responsable de la resistencia o susceptibilidad. Por ejemplo, no es un requerimiento que la secuencia polinuleolidica del marcador forme parte de un gen que imparta resistencia a la enfermedad (por ejemplo, que sea parte del marco abierto de lectura del gen) . La asociación entre un alelo espeCifico del marcador con el fenotipO de resistencia o susceptibilidad se debe al ligamiento del "acoplamiento' de fase original entre el alelo del marcador y el alelo QTL de resistencia o susceptibilidad en la linea de maíz 45 original a partir de la cual se origin6 el alelo de resistencia o susceptibilidad. Eventualmente, con recombinaciones repetidas, los eventos de cruzamiento entre el marcador y el locus del QTL pueden cambiar esta orientación. Por esta razón, el alelo del marcador favorable puede cambiar dependiendo de la fase de ligamiento que exista en el progenitor resistente usado para crear las poblaciones segregantes. Esto no cambia el hecho de que el marcador genétiCO pueda ser usado para monitorear la segregación del fenotipo. 5010 cambia 50 cuál alelo marcador es considerado favorable en una población segregante dada. La identificación de plantas o gerrnoplasma de maíz que incl uyen un locus marcador o loci marcadores asociados a uno o más caracteres de resistencia provee una base para llevar a cabo una selección de maiz asistida por marcadores. Se seleccionan a favor plantas de maíz que comprenden marcadores favorables o 55 aletos favorables, mientras que las plantas de maiz que comprenden marcadores o alelos que están correlacionados negativamente con la resistencia pueden ser sometidas a una selección negativa. Los ES 2 498 440 A2 marcadores y/o los alelos deseados pueden introducirse en un maíz que tenga los antecedentes genéticos deseado (por ejemplo, elite o exótico) para produdr una planta o un germoplasma de maíz modificado resistente. En algunos aspectos, se contempla la posibilidad de seleccionar y/o introducir de manera simultánea o consecutiva una pluralidad de marcadores de resistencia. las combinaciones de marcadores de resistencia seleccionados para una planta individual no se halla limitada, y puede incluir cualquier comblnadon de los marcadores indicados en las Tablas 1 y 2, cualquier marcador ligado a los marcadores indicados en las Tablas 1 y 2, o cualquier marcador localizado en los inlervalos de aTL definidos en la presente documentación. Como una alternativa a los métodos de cultivo convencionales para introducir caracteres de interés en maíz (por ejemplo, introducción) , también pueden usarse abordajes lransgénicos. En estos métodos, se introducen ácidos nucleicos exógenos que codifican caracleres ligados a marcadores en plantas o germoplasma diana. Por ejemplo, se dona un ácido nucleico que codifica un caráder de resistencia, por ejemplo, a través de la clonación posicional, y se lo introduce en una planta o germoplasma diana. La verificación de la resistencia puede realizarse con los protocolos de resistencia disponibles (véase, por ejemplo, el Ejemplo 10) . los ensayos de resistencia son utiles para verificar que el carácter de resistencia aun segrega con el marcador en cualquier pla nta o población particular, y por supuesto. para medir el grado de mejoramiento en la resistencia logrado mediante la introducción o la introducción recombinante del carácter en un fondo deseado. los sistemas, incluyendo los sistemas automatizados para seleccionar plantas que comprenden un marcador de interés, ylo para correlacionar la presencia del marcador con la resistencia, también son características de la invención. Estos sistemas también pueden incluir sondas relevantes para la detección del locus marcador, detectores para detectar marcas sobre las sondas, elementos de manejo de fluidos apropiados y controladores de temperatura que mezclan sondas y moldes ylo amplifican moldes, e instrucciones de sistemas que correlacionan la detección de la marca con la presencia de un locus marcador o alelo particular. los conjuntos de elementos también son una caraclerlstica de la invención. Por ejemplo, un conjunto de elementos puede induir cebadores o sondas apropiadas para detec1ar loei marcadores asociados con la resistencia, e instrucciones para usar los cebadores o las sondas para detectar los loci marcadores y correlacionar los loci con la resistencia at MRCV predicha. Además, los conjuntos de elementos pueden induir materiales de envasado para alojar tas sondas, los cebadores o las instrucciones, centroles, tales como reacciones de amplificación de control, que incluyen sondas, cebadores o ácidos nudeicos molde para realizar las amplificaciones. marcadores de tamaño molecular, o semejantes. Marcadores de resistencia y alelos favorables En el análisis de ligamiento tradicional no se requiere un conocimiento directo de la relación flsica de los genes sobre un cromosoma. la primera ley de Mendel es que los factores de pares de caracteres son segregados, significando que los alelas de un carácter diploide se separan en dos gametos y luego en diferentes descendientes. El análisis de ligamiento dásico puede ser concebido como una descripción estadística de las frecuencias relativas de co-segregación de caracteres diferentes. El análisis de ligamiento es el marco de trabajo descriptivo bien caracterizado de cómo los caracteres están agrupados en base a la frecuencia con la cual segregan juntos. Vale decir, si dos caracteres no alélicos se heredan juntos con una frecuencia mayor que la determinada por el azar, se dice que están ·Iigados~. La frecuencia con la cual los caracteres son heredados en conjunto es la medida primaria de cuán estrechamente ligados están los caracteres, es decir, los caracteres que son heredados en conjunto con una frecuencia mayor están ligados más estrechamente que los caracteres que son heredados en conjunto con una menor frecuencia (pero aun por encima del azar) . Los caracteres están ligadOS porque los genes donde subyacen los caracteres residen en el mismo cromosoma. Cuanto más apartados residen los genes en un cromosoma, menos probable es que segreguen juntos, debido a que los cromosomas homólogos recombinan durante la meiosis. Por lo tanto, cuanto más apartados residen los genes en un cromosoma, más probable es que exista un evento de cruzamiento durante la meiosis que resulte en dos genes segregandO de forma separada en la progenie. Una medida comun del ligamiento es la frecuencia con la cual los caracteres co-segregan. ¡;:sta puede ser expresada como un porcentaje de la ce-segregación (frecuencia de recombinación) , o también comúnmente, en centiMorgans (cM) . El cM es nombrado en honor al genetista pionero Thomas Hunt Margan, y es una unidad de medida de la frecuencia de recombinación genética. Un cM es igual a una probabilidad del 1% de que un carácter que se encuentra en un tocus genético sea separado de un carácter que se encuentra en olro locus genético debido al cruzamiento en una única generación (significando Que los caracteres segregan juntos el 99% del tiempo) . Debido a que la distancia cromosómica es aproximadamente proporcional a la frecuencia de los eventos de cruzamiento entre caracteres, hay una distancia fisica aproximada que correlaciona con la frecuencia de recombinación. Por ejemplo, en el maiz, 1 cM está correlacionado, en promedio, con aproximadamente 2140000 pares de bases (2, 14 Mbp) . Los loo marcadores son caracteres en sí mismos y pueden ser determinados de acuerdo con un análisis de ES 2 498 440 A2 ligamiento convencional, rastreando los loo marcadores durante la segregación. Por lo tanto, en el contexto de la presente invención, un cM es igual a una probabilidad de 1 % de que un locus marcador sea separado de olro locus (el cual puede ser cualquier otro caracter, por ejemplo, otro locus marcador, u olro locus de un caracter que codifique un QTL) , debido al cruzamiento en una única generación. En la presente documentación, se ha establecido que los marcadores descritos en las Tablas 1 y 2, por ejemplo, MZA625, MZA16656. MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA91 05, así como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (iii) MZA15490 Y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261a y (viii) bnlg1327 y umc1262a, están correlacionados con la resistencia conferida recientemente, la resistencia mejorada o la susceptibilidad al MRCV en maíz. Esto significa que los marcadores estén lo suficientemente próximos a un carácter de resistencia para poder usarlos con el fin de predecir el carácter de resistencia. Esto es extremadamente útil en el contexto de la selección asistida por marcadores (MAS) , que se describirá en detalle más adelante. En resumen, es posible realizar una selección en plantas o germoplasma de maíz para marcadores o alelas marcadores que presentan una correlación positiva con la resistencia, sin que sea necesario cultivar maiz y medir la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada (o en el caso contrario, las plantas de maíz pueden someterse a una selección negativa si poseen los marcadores que están correlacionados negativamente con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada) . la MAS es un atajo poderoso para realizar una selección a favor de los fenotipos deseados e introducir los caracteres deseados en cultivares de maiz (por ejemplo, introducir los caracteres deseados en lineas elite) . La MAS está fácilmente adaptada a métodos de análisis molecular de alto desempel'lo que permiten analizar rápidamente una gran cantidad de material genético de plantas o germoplasma en busca de los marcadores de interes, y tiene una relación mucho mejor entre costo y efectividad que el cultivo y la observación de plantas en busca de caracteres visibles. En algunas realizaciones , los QTL marcadores más preferidos son un subconjunto de los marcadores provistos en las Tablas 1 y 2. Por ejemplo, los marcadores más preferidos son MZA15490 Y MZA2038. Cuando se hace referencia a la relación entre dos elementos geneticos, tal como un elemento genético que contribuye a la resistencia y un marcador proximal, el ligamiento de "acoplamiento" de fase indica el estado en que el alelo "favorable" en ellocus de resistencia está ~gado físicamente a la misma cadena cromosómica que el alelo "favorable" dellocus marcador asociado respectivo. En el acoplamiento de fases, ambos alelos favorables se heredan juntos en la progenie que hereda la cadena cromosómica En el ligamiento de fases de "repulsión", el alelo "favorable" en ellocus de interés (por ejemplo, un QTL de resistencia) está asociado físicamente a un alelo "desfavorable" en el locus marcador proximal, y los dos alelos "favorables· no se heredan juntos (es decir, los dos loci están "fuera de fase" uno de otro) . Un alelo favorable de un marcador es aquél alelo del marcador es el que co-segrega con un fenotipo deseado (por ejemplo, resistencia a la enfermedad) . Como se lo utíliza en la presente documentación, un QTL marcador tiene un mlnimo de un alelo favorable, a pesar de que es posible que el marcador pueda tener dos o más alelas 45 favorables encontrados en la población. Cualquier alelo favorable de ese marcador puede ser utilizado de forma ventajosa para la identificación y la construcción de lineas de maíz resistentes. Opcionalmente, uno, dos, tres o más alelo (s) favorables de diferentes marcadores son identificados o introducidos en una planta, y pueden ser sometidos a una selección positiva o negativa durante la MAS. En terminas deseables, se identifican plantas o germoplasma que tienen al menos uno de estos alelas favorables que están correlacionados positivamente con la resistencia conferida recientemente o mejorada. Como alternativa, en la presente invenciÓn también puede usarse un alelo de un marcador que co-segrega con la susceptibilidad a la enfermedad, ya que ese alelo puede ser utilizado para identificar y realizar una selección negativa de las plantas susceptibles a la enfermedad. Dicho alelo puede usarse para propósitos de exclusión 55 durante el cultivo, con el fin de identificar alelas correlacionados negativamente con la resistencia, y para eliminar plantas o germoplasma susceptibles de los cruzamientos subsiguientes . En algunas realizaciones de la invención, se selecciona a favor una pluralidad de alelas del marcador de manera simultánea en una lInica planta o una población de plantas. En estos metodos, se seleccionan plantas que contienen alelas favorables de más de un marcador de resistencia, o como alternativa, se introducen alelos favorables de más de un marcador de resistencia en un germoplasma deseado de marzo Aquellos expertos en la materia han de reconocer que es probable que la selecciÓn simultánea de alelos favorables de más de un marcador de resistencia a la enfermedad en la misma planta resulte en un efecto protector aditivo (o aún sinérgico) para la planta. Aquellos expertos en la materia han de reconocer que la identificación de alelas favorables de marcadores es ES 2 498 440 A2 específica para el germoplasma. La determinación de cuáles alelos del marcador se correlacionan con la resistencia (o la susceptibilidad) se determina para el germoplasma particular estudiado. Aquellos expertos en la materia han de reconocer que los métodOs para identificar los alelos favorables son de rutina y bien conocidos, y aun más, que la identificación y el uso de dichos alelos favorables se encuentran dentro del alcance de la invención. Más aún, la identificación de los alelos favorables de los marcadores en poblaciones de maíz diferentes a las poblaciones usadas o descriptas en la presente se encuentra dentro del alcance de la invención. los cebadores de amplificación para amplificar loci marcadores de lipo SSR son una característica de la invención. Otra característica de la invención comprende cebadores específICos para la amplificación de dominios SNP (marcadores SNP) , y las sondas que se usan para determinar el genotipo de las secuencias de los SNP. En las Tablas 6 y 7 se proveen cebadores especificos para la amplificación de loci marcadores y sondas para detectar los loci marcadores amplificados. Sin embargo, aquellos expertos en la materia han de reconocer de inmediato que es posible usar otras secuencias a cualquiera de ambos lados de tos cebadores dados en lugar de los cebadores dados, siempre y cuando tos cebadores permitan amplificar una región que incluya el alelo a detectar. Además, ha de apreciarse que la sonda precisa a utilizar para la detección puede variar, por ejemplo, cualquier sonda que permita identificar ta región de un ampticón marcador a detectar puede ser sustituida por aquellos ejemplos provistos en la presente documentación. Más aún, la configuración de los cebadores de amplificación y las sondas de detección obviamente puede variar. Por lo tanto, la invención no está limitada a los cebadores y sondas mencionados especificamente en la presente documentación. En algunos aspectos, en los métodos de la invención se utiliza un paso de amplificación para delectar/determinar el genotipo de un locus marcador. Sin embargo, ha de apreciarse que la amplificación no es un requerimiento para la detección del marcador -por ejemplo, es posible detectar diredamente el AON genómico no amplificado simplemente mediante la realización de una transferencia Southern sobre una muestra de AON genómico. Los procedimientos para realizar una transferencia Southern, una amplificación (PCR, LCR, o semejantes) y muchos otros métodos de detección de ácidos nucleicos están bien establecidos y se describen, por ejemplo, en Sambrook el al., Molecular Cloning A Laboratorv Manual (3-edición) , Vol. 1-3, Cold Spring Harbar labarator y , Cold Spring Harbar, Nueva York, 2000 ("Sambrook") ; Current ProtQCQls in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., editores, Current Protocols, una empresa conjunta entre Greene Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, lne., (presentado a lo largo de 2002) ("Ausubel") ) y PCR Protocols A Guide to Methods and Aoclicalions (Innis el al. editores) Acaclemic Press Inc. San Diego, CA (1990) (Innís) . También pueden encontrarse detalles adicionales relacionados con la detección de ácidos nucleicos en plantas, por ejemplo, en Plant MoleOJlar -ªlQ!Qgy (1993) Croy (editor) BIOS Scientific Publishers. InC. eCroy") . También pueden omitirse las sondas de detección separadas en los métodos de anvlificación/detección, por ejemplo, a través de la realización de una reacción de amplificadón en tiempo real que permita detectar la formación del producto mediante la modificación del cebador de amplificación relevante durante la incorporadón en un producto, la incorporadón de nudeótidos marcados en un amplicón, o mediante el monitoreo de cambios en las propiedades de rotación molecular de los amplicones en comparadón con los precursores nO amplificados (por ejemplo, por polarización de Huorescenda) . Típicamente, los marcadores moleculares son detectados con cualquier método establecido disponible en la técnica, incluyendo, sin limitaciones, la hibridación especifica con especificidad por los alelos (ASH) u otros métodos para detectar polimorfismos de nudeótidos individuales (SNP) , la detección de polimorfismos de longitud de fragmentos amplifICados (AFlP) , la detección de secuencias variables amplificadas, la detecciÓn de ADN polimórfico amplificado al azar (RAPO) , la detección de pOlimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFlP) , la detección de la replicación autosostenida de secuencias, la detección de repeticiones de seOJencias individuales (SSR) , la deteCCión de polimorfismos de conformación de cadenas individuales (SSCP) , la detección de marcadores de isoenzimas, o semejantes. Si bien los ejemplos de marcadores provistos en las figuras y las tablas de la presente documentación son marcadores SSR o SNP (ASH) , puede emplearse cualquiera de los tipos marcadores mencionados con anterioridad en el contelC!o de la invención para identificar aquellos segmentos de los cromosomas que comprenden elementos genéticos que contribuyen al desempeño agricola superior (por ejemplo, resistencia conferida redentemente o resistencia mejorada) . Intervalos cromosómicos de gTL En algunos aspectos, en la invención se proveen intervalos cromosómicos de QTl, donde en dichos intervalos hay un QTl (o un QTl múltiple) que segrega con la resistencia al MRCV. Hay una variedad de métodos bien conocidos en la tecnica disponibles para identificar intervalos cromosómicos (como también se describe en detalle en los Ejemplos 1 y 2) . los limites de dichos intervalos cromosómicos están disel"iados para rodear los marcadores que se encontrarán asodados a uno o más QTl. En otras palabras, el intervalo cromosómico se diseña de modo tal que cualquier marcador que esté dentro de dicho intervalo (incluyendo los marcadores terminales que definen los límites del intervalO) pueda ser usado como marcador para la resistencia a la enfennedad. Cada intervalo comprende al menos un QTl, y de hecho, puede comprender más de un QTl. La proximidad cercana de múhiples QTl en el mismo intervalo puede anular la correlación de un marcador partiOJlar con un QTl particular, ya que un marcador puede presentar correlación con más de un QTL. Por el contrario, por ES 2 498 440 A2 ejemplo, si dos marcadores próximos presentan co-segregación con el carácter fenotlpico deseado, a veces no queda daro si cada uno de aquellos marcadores identifica al mismo QTL o a dos QTl diferentes. Independientemente de esto, el conocimiento de cuántos QTL están presentes en un intervalo particular no es necesario para realizar o poner en practica la invención. En la presente invendón se proveen intervalos cromosómicos de maíz, donde los marcadores en dicho intervalo presentan ca-segregadón con la resistencia al MRCV. Por consiguiente, cada uno de estos intervalos comprende al menos un QTL de resistencia al MRCV, como se ilustra en la Tabla 9. Cada uno de los intervalos descritos con anterioridad presenta un agrupamiento de marcadores que co-segregan con la con resistencia al MRCV. Este agrupamiento de marcadores ocurre en dominios relativamente pequeños de los grupos de asociación, lo que indican la presencia de uno o más QTL en aquellas regiones cromosómicas. Los intervalos de QTL fueron diseñados para rodear los marcadores que co-segregan con la resistencia. Los intervalos están definidos por los marcadores en sus extremos, donde el intervalo rodea a todos los marcadores que están localizados dentro del intervalo, y también los marcadores que definen las terminales. En algunos casos. puede diseñarse un intervalo que esté definido por el ligamienlo con un marcador preferido. Por ejemplo, se define un intervalo en el cromosoma 2 donde cualquier marcador ligado oon el MZA16656 es un miembro de dicho intervalo. Por ejemplo, como se lo usa en la presente documentación, el ligamiento se define como cualquier marcador que se halla a 25 cM de MZA16656. Este intervalo en el cromosoma 2 se ilustra con mayor detalle en la Tabla 8. Los marcadores que están ligados a MZAl6656 (por ejemplo, a 5 cM de MZA16656) pueden determinarse con cualquier mapa de ligamiento genético apropiado (por ejemplo, el mapa 18M2 2005 Neighbors Frame 2 hallado en el sitio MaizeGDB) . Estos marcadores se indican en el orden genético. Cada uno de los marcadores indicados, incluyendo los marcadores terminales pco061820a y sog57580, son miembros del intervalo. Los marcadores pco061820a y sog57580 son conocidos en la técnica. Como se describió con anterioridad, no es necesario que un intervalo (por ejemplo, un intervalo cromosómico o un intervalo de QTL) dependa en una medida absoluta del tamaño del intervalo como un valor en centimorgans. Un intervalo puede describirse en función de los marcadores terminales que definen los extremos del intervalo, y tipicamente, el intervalo incluirá los marcadores terminales que definen la extensión del intervato. Un intervato puede incluir cualquier marcador localizado dentro de dicho dominio cromosómico, ya sea que estos marcadores sean conocidos en la actualidad o desconocidos. En la invención se provee una variedad de medios para definir un intervalo cromosómico, por ejemplo, en las listas de marcadores ligados de la Tabla 8 y las referencias citadas en la presente documentación. Mapas genéticos Como han de reconocer los expertos en la materia, las frecuencias de recombinación (y como resultado, las posiciones en el mapa genético) en cualquier población particular no son estáticas. las distancias genéticas que separan dos marcadores (o un marcador y un QTL) pueden variar dependiendo de cómo se determinan las posiciones en el mapa. Por ejemplo, las variables, tales como las poblaciones progenitoras de mapeo usadas. el software usado en el mapeo del marcador o en el mapeo del QTL Ylos parámetros ingresados por el usuario del software de mapeo pueden contribuir a las relaciones de mapa genético de QTUmarcador. Sin embargo, no ha de interpretarse que la invención se halla limitada a una población de mapeo particular, el uso de un software particular o un conjunto de parámetros de software particular para determinar el ligamiento de un marcador o un intervalo cromosómico particular con el fenotipo de resistencia al MRCV. Aquellos expertos en la materia han de poder extrapolar las características novedosas descritas en la presente a cualqUier conjunto de genes o 50 población de maíz de interés, y han de poder usar cualquier software y parámetros de software partiCUlares. En efecto, las observaciones relacionadas con los marcadores de resistencia y los intervalos cromosómicos en poblaciones distintas de las descritas en la presente documentación pueden realizarse fácilmente haciendo uso de las enseñanzas en la presente documentación. Software de mapeo ES 2 498 440 A2 Se encuentra disponible una variedad de software comercial para estudios de mapeo genético y de asociación de marcadores (por ejemplo, mapeo de QTL) . Este software incluye, sin limitaciones, aquellos indicados en la Tabla 10. Tabla 10 oftware Wlndows QT Cartoarsoher, versión 2.5 Descripción/Referencias Wang S., C. J. Basten, y Z. B. Zeng (2007) . Windows QTL Cartographer 2, 5. Department of Statistics, North Carolina Slate Universitv, Raleiah, Ne. oinMap® VanOoijen. y Voorrips (2001) "JoinMap 3, 0 software for the calculation o genetic linkage maps', Plan! Research International, Wageningen, Paise Bajos; y Stam ·Construction of integraled genetie linkage maps by means o a new comouter packaae: JoinMao" The Plan! Journal 3fSl:739-744 (1993) MapQTL® J.w. vanOoijen , "Software for the mapping de quantitative trait loci i eXDerimental DODulations", Kvazma BV, Waaeninaen Néterlands MapManager OT Manly y Olson, "Overview af on. mapping software and introduction to Ma~ Manager Qr Mamm. Gename 10:327-334 (1999) tMapManager OTX Manly, Cudmore y Meer, "MapManager QTX , cross-platform software fe! Igenetic mapping" Mamm. Genome 12:930-932 (2001) ~~neFlow® TLocateTlol GENEFLOW, Inc. (Alexandria, VA) ASSEL (Trait Analysis byaSSociation, Evolution, and linkage) por Ectward Buckler puede hallarse información sobre este programa en la página de Internet de Buckler Lab, en el Instituto de Diversidad Genómica de la Universidad de Cornell. MaDas genéticos unificados Se han creado mapas genéticos ·unificados·, "consenso' o "integrados' que incorporan los datos de mapeo de dos o más fuentes, incluyendo fuentes que usaron diferentes poblaciones de mapeo y diferentes modos de análisis estadistico. La combinación entre la información de los mapas genéticos aumenta la densidad de marcadores en el mapa al mismo tiempo que mejora la resolución del mapa. Estos mapas mejorados pueden ser usados de forma ventajosa en la selección asistida por marcadores. en la clonación basada en mapas, para proveer un marco de trabajo mejorado para el posicionamiento de marcadores molecular recientemente identificados y ayudar en la identificación de intervalos cromosómicos de QTL y grupos marcadores asociados de focma ventajosa. En algunos aspectos, se obtiene un mapa consenso simplemente mediante la superposición de un mapa sobre olro. En otros aspectos, pueden usarse varios algoritmos, por ejemplo, el análisis JoinMap"', para la combinación de los datos del mapeo genético provenientes de múltiples fuentes la conciliación de las discrepancias entre los datos de mapeo provenientes de las fuentes originales. Véase, Van Ooijen y Voorrips (2001) • JoinMap 3, 0 software for ¡he calculation of genetic linkage maps·, Plant Research Intemallonal, Wageningen, Paises Bajos; Stam (1993) "Construction of integrated genelic linkage maps by means de a new compuler package: JoinMap", The Plan! JoumaI3 (5) :739-744. Marcadores ligados A partir de la presente descripción y el conocimiento téCflico. está claro que puede usarse cualquier marcador genético que tenga una probabilidad significativa de co-segregación con un carácter fenotípico de interés (por ejemplo, en este caso, un carácter de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) como marcador para dicho carácter. En las Tablas 1 y 2 se provee una lista de los QTl marcadores útiles provistos por la presente invención. Además de los QTl marcadores mencionados en las Tablas 1 y 2, también pueden usarse otros marcadores ligados (en desequilibrio de ligamiento) a los QTL marcadoces para predecir un carácter de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada en una planta de maíz. En otras palabras, cualquier otro marcador que presente una frecuencia de recombinación menor que 50% (separado por una distancia genética menor que 50 cM) con un QTL marcador de la invención (por ejemplo, los marcadores provistos en las Tablas 1 y 2) también sera una característica de la invención. Cualquier marcador que está asociado a un QTl marcador también puede usarse de manera ventajosa en una selección asistida por marcadores a favor del carácter particular. Los marcadores genéticos que están ligados a QTL marcadores (por ejemplo, los QTL marcadores provistos en las Tablas 1 y 2) son particularmente útiles cuando se hallan suficientemente próximos (por ejemplo, asociados cercanamente) a un QTL marcador dado, de modo tal que el marcador genético y el OTL marcador presentan 45 una frecuencia de recombinación baja. En la presente invención, los marcadores ligados estrechamente de tal modo son una característica de la invención. Como se los define en la presente documentación, los marcadores ES 2 498 440 A2 ligados estredlamente presentan una frecuencia de recombinaaón de aproximadamente 10% o menos (el marcador dado se encuentra a aproximadamente 10 cM del QTL) . Dicho de otro modo, estos loei ligados estrechamente ca-segregan al menos 90% del tiempo. Efectivamente, cuanto mas cerca se halla un marcador de un aTl marcador, el marcador se torna cada vez más efectivo y ventajoso como indicador para el carácter deseado. Por lo lanto, en otras realizaciones, los loei ligados estrechamente, tales como ellocus de un QTL marcador y un segundo lacus, presentan una frecuencia de cruzamiento entre locus de aproximadamente 10% o menos, preferiblemente, aproximadamente 9% o menos, aun más preferiblemente, aproximadamente 8% o menos, aún mas preferiblemente, aproximadamente 7'% o menos, aún más preferiblemente, aproximadamente 6% o menos, aún más preferiblemente, aproximadamente 5% o menos, aún más preferiblemente, aproximadamente 4% o menos aún más preferiblemente, aproximadamente 3% o menos, y aún más preferiblemente, aproximadamente 2% o menos. En las realizaciones más preferidas, los loci relevantes (por ejemplo, un locus marcador y un locus diana, tal como un aTl) presentan una frecuencia de recombinación de aproximadamente 1% o menos, por ejemplo, aproximadamente 0, 75% o menos, más preferiblemente, aproximadamente 0, 5% o menos, aún más preferiblemente, aproximadamente 0, 25'% o menos. Por lo tanto, los loci están separados aproximadamente 1 º cM, 9 cM, 8 cM, 7 cM, 6 cM, 5 cM, 4 cM, 3 cM, 2cM, 1cM, 0, 75 cM, 0, 5 cM o 0, 25 cM, o menos. Dicho de otro modo, se dice que dos loci que están localizados en el mismo cromosoma, y que se hallan separados por una distancia tal que la recombinación entre los dos loei ocurre en una frecuencia menor que 10% (por ejemplo, de aproximadamente 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0, 75%, 0, 5%, 0, 25%, o menos) , se hallan ·próximos· uno del otro. En algunos aspectos, los marcadores ligados (incluyendo los marcadores ligados estrechamente) de la invención se determinan revisando un mapa genético, por ejemplo, los mapas genéticos integrados hallados en el sitio de Internet de MaizeGOB. Por ejemplo, en la presente documentación se demuestra que los marcadores del grupo de ligamiento 2 MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105 están correlacionados con al menos un QTL de resistencia al MRCV. Los marcadores que están ligados a MZA625, MZA 16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA91D5 pueden determinarse a partir de la lista provista en la Tabla 8 (véase también la Tabla 11 , donde se presentan identificadores genéticos de loo de trabajo de arroz y maiz para marcadores genéticos entre MZA625 y MZA9105) . Ii:lUli:I '1 tT1 Vl N ... 'D .. o t O :> N PHO Cromosoma Posición en el mapa PHO UC7PCO versus ampliciones Mvriad Orden del locus l ocus de arroz Identificador genético de trabajo de maíz Resumen de la anotación 2 64 05 MZA625 Loe 029 loe 028 LOC 0'04051320 lOC Os04951310 AC191302 5part AC191302 3 Factor de transcripción Proteína de unión a utrescina; roteina hi otética Loe 027 loe 025 Loc_024 LOe Os04 51300 LOe 0s04g51280 LOC_Os04g51270 0600856 I pco530474 pC0593067 L-ascorbato eroxidasa robable Proteína de desarrollo de plástidos: DAG Proteína hipotética: Subunidad de la ATP sintetasa vacuolar? Loe 023 loe 022 Loe 021 LOC 0, 04051260 LOe Os04951250 LOe Os04 51240 AC191302 6 Inferido en arroz '1 sorgo 0641713 Proteína hipotética Proteína hi otética Proteína hi tética 2 65, 99 MZA166656 Loe 016 loe 015 Loe_014 LQC OS04951190 LOC Os04 51180 LOC_Os04g51172 I pco591841 Genomic PC0622600 PC0666161 pco638426 Factor regulador del crecimiento Rece tor unido a roteina G 89C Horno ss iens Proteina inlrlnseca mayor; NIP: similar a BREV1S RADIX 1 2 65, 30 MZAl5451 Loe 013 Loe_012 LOC Os04g51166 LOC_Os04g51160 LOC Os04Q51150 c0514627 pC0588936 Proteína hi otética Oxidasa AOX3 alternativa Loe 010 Loc_009 LOC 0s04g51140 LOC_Os04g51130 Inferido en arroz y sorgo pc0644442 Proteína hipotética Similar a Myb: componente 2 del regulador de la respuesta 2 65, 99 MZA2038 Loe_008 LOC_Os04g51120 pco641455 Factor de interacción con c1atrina; Epsina: Proteína hipotética Loe 007 LOC Os04g51110 I pc0640541 Proteína repetitiva CDC20 WD Loc 006 LOC Os04 51100 co651091 Proteína de la síntesis de cobalamina Loe 005 LOC Os04 51090 0571541 Proteína hipotética Loc 004 LOC Os04g51 080 I pc0525409 Scramblasa Loe 003 LOC Os04g51070 IPC0553755 Proteína hi otética Loe 002 LOC Os04 51060 c0644099 Proteína hi otética 2 6544 MZA9105 Loe 001 LOC Os04 51050 co588179 Protein uinasa receptora ES 2 498 440 A2 Por ejemplo, los marcadores en el grupo de ligamiento 2 que estan ligados a MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA 15490, MZA203B, MZA11826 Y MZA9105 incluyen los indicados en la Tabla 12. Tabla 12 ES 2 498 440 A2 De manera similar, los marcadores asociados (incluyendo los marcadores ligados estrechamente) de la invención pueden determinarse analizando cualquier mapa genético apropiado de malz. Por ejemplo , pueden hallarse mapas genéticos integrados en el recurso de Internel de MaizeGDB. No se pretende limitar la determinación de los marcadores asociados o ligados estrechamente al uso de un mapa genético de maíz particular. En efecto, hay una gran cantidad de mapas genéticos de maíz disponibles que son bien conocidos por aquellos expertos en la materia. Como alternativa, la deleoninación de los marcadores ligados y ligados estrechamente puede realizarse generando un conjunto de datos experimental y realizando un análisis de ligamiento. Tampoco se pretende limitar la identificación de los marcadores que están ligados (por ejemplo, a aproximadamente 50 cM o aproximadamente 10 cM) a los QTl marcadores de resistencia al MRCV identificados en la presente documentación a un mapa o una o metodología panicular. los mapas genéticos integrados provistos en el sitio de Internet de MaizeGDB sirven solamente a modo de ejemplo para identificar marcadores ligados. En efecto, los marcadores ligados, tal como se los define en la presente documentación, pueden determinarse a panir de cualquier mapa genético conocido en la tecnica (un mapa experimental o un mapa integrado) , o como alternativa, pueden detenninarse a partir de cualquier conjunto nuevo de datos de mapeo. Vale destacar que las listas de marcadores ligados y ligados estrechamente pueden variar para distintos mapas y metodologias debido a diversos factores. Primero, los marcadores que son colocados en cualquiera de los dos mapas pueden no ser idénticos, y además, algunos mapas pueden tener una mayor densidad de marcadores que otros mapas. También, las poblaciones de mapeo, las metodologías y los algoritmos usados para construir los mapas genéticos pueden diferir. Aquellos expertos en la materia han de reconocer que un mapa genético no es necesariamente más o menos preciso que otro, y además, han de reconocer que cualquier mapa genético de maíz puede utilizarse para determinar marcadores que están ligados y ligados estrechamente a los QTl marcadores de la presente invención. Técnicas para detectar marcadores En la invenciÓn se proveen marcadores moleculares que tienen una probabilidad significativa de ca-segregación con QTL que imparten un fenotipo de resistencia al MRCV. Estos QTL marcadores pueden usarse en la selecciÓn asistida por marcadores para caracteres seleccionados (resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) , y también tienen otros usos. No se pretende limitar la invenciÓn a un método particular para la detecciÓn de estos marcadores. Los marcadores que corresponden a polimorfismos genéticos entre miembros de una población pueden detectarse mediante numerosos métodos bien establecidos en la técnica (por ejemplo, amplificación de seruencias especIficas basada en la PCR, polimorfismos de la longitud de fragmentos de restricción (RFLPs) , marcadores de isozimas, hibridación especifica para alelos (ASH) , secuencias variables amplificadas del genoma vegetal, replicación de secuencias autosostenida, repeticiones de seruencias individuales (SSR) , polimorfismos de nucleótidos individuales (SNP) , ADN polimÓrfico amplificado al azar ("RAPO') o polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFlP". En una realización adicional, la presencia o la ausencia de un marcador molecular es determinada simplemente a través de la secuenciación de nudeótidos de la región marcadora polimórfica. Este método puede adaptarse fácilmente para el análisis de alto desempeño, al igual que los otros métodos mencionados con anterioridad, por ejemplo, usando mélodos de secuenciación de alto desempeño disponibles, tales como la secuenciación por hibridaciÓn En general, la mayoría de los marcadores genéticos se basan en una o más propiedades de los ácidos nudeicos para su detección. Por ejemplo, en algunas técnicas para la detección de marcadores genéticos se utiliza la hibridaciÓn de una sonda de ácidos nucleicos con ácidos nucleicos que corresponden al marcador genético (por ejemplo, ácidos nudeicos amplificados producidos usando el AON genómico de malz como molde) . los formatos de hibridación, que induyen, sin limitaciones, los ensayos de hibridaciÓn en fase de solución, fase sólida, fase mixta o in situ son ullles para la detección de alelas. Puede hallarse una gura extensa para la hibridación de ácidos nucleicos en Tijssen (1993) Laboratorv Temniques in Biochemistr y and Molecular Biology -Hybridization ES 2 498 440 A2 wilh Nudeic Add Probes EIsevier, Nueva York, así como en Sambrook y Ausubel (en la presente dorumentación) : y Berger y Kimmel, Guide 10 Molerular Cloning Technigues Methods in Enzymoloqv volumen 152 Academic Press, Inc., San Diego, CA ("Berger") . Por ejemplo. los marcadores que comprenden polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) se detectan, por ejemplO, a través de la hibridación de una sonda que típicamente es un subfragmento (o un oIigonucleótido sintético que corresponde a un subfragmento) del ácido nucleico a detectar mediante la digestión de restricción de AON genómico. La enzima de restricción se selecciona para proveer fragmentos de restricción de al menos dos longitudes alternativas (O polim6rficos) en individuos o poblaciones diferentes. La determinación de una o más enzimas de restricción que producen fragmentos informativos para cada cruzamiento es un procedimiento simple, bien conocido en la técnica. Después de la separación por tamaño en una matriz apropiada (por ejemplo, agarosa o poliacrilamida) y la transferencia a una membrana (por ejemplo, nitrocelulosa, nylon, etcétera) , la sonda marcada se hace hibridar bajo condiciones que resultan en la unión de equilibrio de la sonda al diana, a lo que sigue la remoción del exceso de sonda por lavado. las sondas de ácidos nucleicos contra los loei marcadores pueden ser clonadas y/o sintetizadas. Puede emplearse cualquier marca apropiada con una sonda de la invención. Las marcas detectables apropiadas para el uso con sondas de ácidos nudeicos incluyen, por ejemplo, cualquier composición detectable por medios espectroscópicos, radioisotópicos, fotoquimicos, bioquímicos, inmunoquimicos, eléctricos, ópticos o químicos. las marcas útiles incluyen biotina, para realizar una coloración con un conjugado de estreptavidina marcada, esferas magnéticas, fluorocromos, radiomarcas, enzimas y marcas colorimétricas. Otras marcas incluyen ligandos que se unen a anticuerpos marcados con fluoróforos, agentes quimioluminiscentes y enzimas. Una sonda también puede prepararse con cebadores de PCR radiomarcados que son utilizados para generar un amplicón radiomarcado. Pueden hallarse estrategias de marcado para el marcado de ácidos nUcleicos, y las estrategias de detección correspondientes, por ejemplo, en Haugland (1996) Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals sexta ediciÓn por Molecular Probes. Inc. (Eugene OR) ; o en Haugland (2001) Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals octava edición por Molecular Probes, Inc. (Eugene OR) (disponible en CO ROM) . Métodos de detección basados en amplificación La PCR, RT-PCR Y LCR tienen un uso particularmente amplio como métodos de amplificación y amplificacióndetección para amplificar los acidos nucleicos de interés (por ejemplo, aquellos que comprenden loo marcadores) , lo que facilita la delección de los marcadores. Pueden hallarse detalles relacionados con el uso de estos y otros métodos de amplificación en cualquiera de una variedad de textos convencionales, que incluyen, por ejemplo, Sambrook, Ausubel, Berger y Croy, en la presente documentación. En diversos textos de biología disponibles también pueden hallarse discusiones extensas acerca de la PCR y de los métodos de amplificación relacionados. Aquellos expertos en la materia han de apreciar que esencialmente cualquier ARN puede ser convertido en un AON de cadena doble apropiado para la digestión por restricción, expansión por PCR y secuenciación usando la transcritasa inversa y una polimerasa ("PCR de transcripción inversa", o "RT-PCR") . Véase también Ausubel, Sambrook y Berger, supra Métodos de amplificaciónl detección en tiempo real En un aspecto, la PCR o la LCR en tiempo real se realizan sobre las mezclas de amplificación descritas en la presente documentación, por ejemplo, usando senales moleculareS o sondas TaqManTt, j. Una senal molecular (MB) es un oligonucleÓtido o un PNA que, bajo condiciones de hibridación apropiadas, autohibrida para formar una estructura de tallo-Iazo. La MB tiene un fluorocromo y un componente quencher en las terminales del oligonucleótido o el PNA; por lo tanto, bajo condiciones que permiten una hibridación intramolecular, el f1uorocromo tipicamente es absorbido (o al menos alterado en su fluorescencia) por el componente quencher. Bajo condiciones donde la MB no presenta una hibridación inlramolecular (por ejemplo, cuando está unida a un ácido nucleico diana, por ejemplo, a una región de un amplicón durante la amplificación) , el fluorocromo MB no es absorbido. Los detalles relacionados con los métodos convencionales para hacer y usar MB están bien establecidos en la literatura, y los MB están disponibles a partir de una cantidad de fuentes de reactivos comerciales. Véanse también, por ejemplo, Leone et al. (1995) "Molecular beacon probes combined with amplification by NASBA enable homogenous real-time detection of RNN, Nucleic Acids Res. 26:2150-2155; Tyagi y Kramer (1996) "Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization" Nature Biotechnology 14:303-308; Blok y Kramer (1997) "Amplifiable hybrldizalion probes containing a molecular switch" Mol Cel! Probes 11 :187-194; Hsuih et al. (1997) "NOvel , ligalion-dependent PCR assay for detection of hepatitis C in serum" J Clin Microbiol 34:501 -507; Kostrikis et al. (1998) HMolecular beacons: spectral genotyping of human alleles" Science 279:1228-1229; Sokol et al. (1998) "Real lime detection de DNA: RNA hybridization in living cells" Proc. NatL Acad. Sci. U.S.A. 95:11538-11543; Tyagi et al. (1998) "Multicolor molecular beacons for allele discrimination~ Nature Biotechnoloay 16:49-53; Bonnet el al. (1999) ~Thermodynamic basis of the chemical specificity ofstructured DNA probes" Proc. Nat!. Acad. Sci. U.S.A. 96:6171-6176; Fang et al. (1999) "Oesigning a novel molecular beacon for surface-immobilized DNA hybridization studies" J. Am. Chem Soc. 121:2921-2922; ES 2 498 440 A2 Marras el al. (1999) "Multiplex deleclion of single-nucleolide varialion using molecular beacons" Gene!. Anal. Siomo!' Eng. 14:151-156; y Ve! el al. (1999) "Multiplex deleclion of tour palhogenic retroviruses using molecular beacons· Proc. Na!!. Acad Sei. U.S.A. 96:6394-6399. Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con la construcción de MB y su uso en la literatura de patentes, por ejemplo, en las Patentes de los EEUU Nº 5925517, 6150097 y 6037130. La detección y la cuantificación de la PCR usando sondas de oligonucleólidOS f1uorogénicas marcadas de forma dual, conocidas comúnmente como sondas "T aqMan TM" , también puede realizarse de acuerdo con la presente invención. Estas sondas están compuestas por oligodesoxinucleótidos cortos (por ejemplo, 20-25 bases) que están marcados con dos fluorocromos diferentes. En el extremo 5' de cada sonda se encuentra un fluorocromo reporter, yen el extremo 3' de cada sonda se encuentra un fluorocromo ~quencher". La secuencia de la sonda oligonucleotidica es complementaria con una secuencia diana interna presente en un amplicón de PCR . Cuando la sonda está inlacta, ocurre una transferencia de energía entre los dos fluoróforos y la emisión del "reporter" es absorbida por el ~quencher" mediante FRET. Durante la fase de extensión de la peR, la sonda es escindida por una actividad 5' nucleasa de la polimerasa usada en la reacción, con lo que se libera el ~reporter" del "quencher" y se produce un incremento en la intensidad de emisión del "reporter" . De acuerdo con esto, las sondas TaqMan"" son oligonucleótidos están marcados presentando también un "quencher", donde el marcaje es liberado durante la amplificación merced a la acción exonucleasa de la polimerasa usada en la amplificación. Esto provee una medida en tiempo real de la amplificación durante la síntesis. Una variedad de reactivos TaqMan™ se hallan disponibles comercialmente, por ejemplo, en Applied Biosystems (Cuarteles Generales de la División en la Ciudad de Foster, CA) , también en una variedad de proveedores de especialidades, tales como Biosearch Technologies (por ejemplo, sondas "black hole quencher") . Detalles adicionales relacionados con las secuencias variables amplificadas SSR AFLP ASH SNP y marcadores de isoenzimas Las secuencias variables amplificadas son las secuencias amplificadas del genoma de la planta que presentan una variabilidad elevada en los residuos de los ácidos nucleicos entre miembros de la misma especie. Todos los organismos tienen secuencias genómicas variables, 'i cada organismo (con la excepción de un clon) tiene un conjunto diferente de secuencias variables. Una vez identificada, la presencia de secuencias especificas variables puede ser usada para predecir caracteres fenotipicos. Es preferible que el ADN de la planta sirva como molde para la amplificación con cebadores que rodean una secuencia de ADN variable. La secuencia variable es amplificada y luego secuenciada. Como altemativa, la replicación autosostenida de la secuencia puede utilizarse para identificar marcadores genéticos. La replicación autosostenida de la secuencia hace referencia a un método de amplificación de ácidos nucleicos donde se utilizan secuencias de ácidos nucleicos diana que se replican exponencialmente in vitre bajo condiciones sustancialmente isotérmicas, haciendo uso de tres actividades enzimálicas relacionadas con la replicación retroviral: (1) Transcriptasa reversa, (2) ARNasa H, y (3) una ARN pOlimerasa dependiente de ADN (Guatelli et al. (1990) Proc Nall Acad Sci USA 87:1874) . Al imitar una estrategia retroviral para la replicaCión del ARN a través de intermediarios de AONc, esta reacción permite acumular copias de AONc y ARN de la diana original. También pueden utilizarse como marcadores genéticos los polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFLP) (Vos el al. (1995) Nucleic Acids Res 23:4407) . La frase ·polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados· hace referencia a los fragmentos de restricción seleccionados que son amplificados antes o después de la escisión por una endonucleasa de restricción. El paso de amplificación permite una detección más fácil de los fragmentos de restricción especIficas. los AFLP permiten detectar una gran cantidad de marcadores pOlimórficos, y han sido utilizados para el mapeo genético de plantas (Becker et al. (1995) Mol Gen Genet 249:65; y Meksem et al. (1995) Mol Gen Genet249:74) . La hibridación especifica para alelos (ASH) puede utilizarse para identificar los marcadores genélicos de la invención. La tecnologia ASH se basa en el apareamienlo estable de una sonda corta de cadena simple de oligonucleótidos con un ácido nucleico diana de cadena simple completamente complementario. La detección se realiza a través de una marca isotópica o no isotópica adosada a la sonda. Para cada pOlimorfismo, se diseñan dos o más sondas de ASH diferentes que poseen secuencias de AON idénticas, excepto los nudeótidos polimórficos. Cada sonda poseerá una homologla exacta con una secuencia alélica, de tal forma que el conjunto de sondas pennita distinguir todas las secuencias alélicas alternativas conocidas. Se hace hibridar cada sonda con el ADN diana. Con las condiciones de hibridación y el disei'io de sondas apropiados, una diferencia de una sola base entre la sonda y el AON diana impedirá la hibridación. De esta forma, solamente una de las sondas alternativas hibridará con una muestra diana que es homocigola u homogénea para un alelo. las muestras que son heterocigotas o heterogéneas para dos alelos hibridarán con dos sondas alternativas. ES 2 498 440 A2 los marcadores de ASH se utilizan como marcadores dominantes, donde la presencia o la ausencia de s610 un alelo se determina a partir de la hibridación o la falta de hibridación de solamente una sonda. El alelo alternativo puede inferirse a partir de la falta de hibridación. Las sondas de ASH y las moléculas diana opcionalmente son ARN o ADN; las moléculas diana tienen cualquier longitud de nucleótidos, mas allá de la secuencia que es complementaria a la sonda; la sonda se diseña para que hibride con cualquiera de las cadenas del ADN diana; la sonda tiene un lamal'io variable para adaptarla a condiciones de rigurosidad variable, etcétera. la PCR permite amplificar la secuencia diana para la ASH a partir de concentraciones bajas de ácidos nucleicos en volúmenes relativamente pequeños. Por otro lado, la secuencia diana proveniente del ADN genómico se digiere con una endonucleasa de restricción y se separa mediante una electroforesis en gel. la hibridación tlpicamente se realiza con la secuencia diana unida a la superficie de una membrana, o tal como se describe en la Patente de los EEUU Nº 5468613, la secuencia de la sonda de ASH puede unirse a una membrana. En una realización, los datos de la ASH típicamente se obtienen amplificando fragmentos de ácidos nucleicos (amplicones) a partir de ADN genómico utilizando una PCR, transfiriendo el ADN diana del amplicón a una membrana en un formato de transferencia puntual (dol-blof) , haciendo hibridar un oligonucleótido sonda marcado con el amplicón diana, y observando los puntos de hibridación mediante una autorradiografi a. los polimorfismos de nucleótidos individuales (SNP) son marcadores que consisten en una secuencia compartida que se diferencia en un solo nudeótido. Tipicamente, esta distinción se detecta por el patrón de migración diferencial de un amplicón que contiene el SNP, por ejemplo, en un gel de acrilamida. Sin embargo, tambiim son apropiados métodos otros de detección, tales como la hibridación, por ejemplo, la ASH, o el análisis de RFlP. Como marcadores geneticos pueden emplearse los marcadores de isoenzimas, por ejemplo, para rastrear marcadores distintos de los marcadores de resistencia mencionados en la presente documentación, o para rastrear marcadores de isoenzima asociados a los marcadores descritos en la presente documentación. las isoenzimas son múltiples formas de enzimas que difieren unas de otras en su secuencia de aminoácidos, y por lo tanto, en sus seCuencias de ácidos nucleicos. Algunas isoenzimas son enzimas multiméricas que contienen subunidades ligeramente diferentes. Otras isoenzimas son tanto multiméricas como monoméricas, pero deben ser escindidas desde la proenzima en distintos sitios de su secuencia de aminoácidos. las isoenzimas pueden caracterizarse y analizarse a nivel proteico, o como alternativa, pueden determinarse isoenzimas que difieren a nivet de los ácidos nudeicos. En estos casos, puede utilizarse cualquiera de los métodos basados en ácidos nudeicos descritos aquí para analizar marcadores de isoenzima. Detalles adicionales relacionados con la amplificación de ácidos nucleicos Como se ha mencionado, los procedimientos de amplificación de ácidos nucleicos, tales como la PCR y l CR, son bien conocidos en la técnica y pueden aplicarse a la presente invención para amplificar y/o detectar los ácidos nudeicos de interés, tales como los ácidos nudeicos que comprendan loci marcadores. Aquellos expertos en la materia han de poder hallar ejemplos de procedimientos apropiados de métodos in vitro en las referencias mencionadas con anterioridad, por ejemplo, Innis, Sambrook, Ausubel, Berger y Croy, donde dichos metodos incluyen la reacción en cadena de la pOlimerasa (PC R) , la reacción en cadena de la ligasa (l CR) , la amplificación de la OOIl-replicasa y otros procedimientos mediados por la ARN pOlimerasa (por ejemplo, NASBA) . Pueden hallarse detalles adicionales en Multis et al. (1987) Patente de los EEUU Nº 4683202; Amheim & levinson po de Octubre, 1990) C&EN 36-47; The Journal of NIH Research (1991) 3, 81-94; (Kwoh et al. (1989) Proc. Nat!. Acad. Sci. USA 86, 1173; Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874; lomell et al. (1989) J. crn. Chem 35:1826; landegren et al. (1988) $cience 241 :1077-1080; Van Brunt (1990) ~~1" 8:291-294; Wu y Wanace (1989) Gene 4: 560; Barringer et al. (1990) Gene 89:117; y Sooknanan y Biotechnolooy 13:563-564. los metodos mejorados para amplificar grandes ácidos nucleicos por PCR que son útiles en el contexto de la donación posicional se resumen adicionalmente en Cheng et al. (1994) Nature 369:684, y las referencias dtadas en dicha publicación, y con ellos pueden generarse amplicones de PCR de hasta 40 kb. Detección de marcadores para clonación posicional En algunas realizaciones, se utiliza una sonda de ácido nudeico para detectar un ácido nucleico que posee una secuencia marcadora. Estas sondas pueden utilizarse, por ejemplo, en la d onación posicional, para aislar secuencias de nudeótidos ligadas a la secuencia de nucleótidos marcadora. No se prelende limita las sondas a sondas de un tamano en particular. En algunas realizaciones, la sonda de ácido nucleico tiene al menos 20 nude6tidos de longitud, o como alternativa, at menos 50 nuc!eótidos de tongitud, o como alternativa, al menos 100 nucleótidos de longitud. o como alternativa, al menos 200 nucleótidos de longitud. Una sonda hibridada se detecta utilizando autorradiografía, nuorografia u otras técnicas de detección similares, 65 dependiendO de la marca a detectar. Los ejemplos de protocolos de hibridación especificos se encuentran ES 2 498 440 A2 ampliamente disponibles en la técnica; véase, por ejemplo, Berger, Sambrook, y Ausubel, lodos en la presente documentación. Métodos de sintesis de sondasfcebadores En general, los métodos de síntesis para fabricar oIigonucleótidos, incluyendo sondas, cebadores, set\ales moleculares, PNA, LNA (ácidos nucleicos cerrados) , etcétera, son bien conocidos. Por ejemplo, los oIigonudeátidos pueden ser sometidos a una síntesis química de aQJerdo con el método de fase sólida de triéster de fosforamidita, desaipto por Beaucage y Caruthers (1981) , Tetrahedron LeNs. 22 (20) :1859-1862, por ejemplo, usando un sintetizador automatizado disponible comercialmente, por ejemplo. como se describe en Needham-VanDevanter el al. (1984) Nucleic Acids Res. 12:6159-6168. Aquellos expertos en la materia también pueden ordenar los oligonude6tidos, incluyendo los oligonucleótídos modificados, en una variedad de fuentes comercial. Existen muchos proveedores comerciales de servicios de oIigo síntesis, y por lo tanto, se trata de una tecnología ampliamente accesible. Cualquier ácido nucleico puede ser ordenado a medida a cualquiera de una variedad de fuentes comerciales, tales como The Midland Certified Reagent Company, The Great American Gene Company, ExpressGen Inc., Operan Technologies Inc. (Alameda, CA) , y muchos otros. De forma similar, los PNA pueden ser ordenados a medida a cualquiera de una variedad de fuentes, tales como PeptidoGenic, HTI Bío-ProdUctos, Inc., BMA Biomedicals Ud (Reino Unido) , Bio·Synthesis, Inc., y muchos otros. Detección de marcadores in silico En realizaciones altelOativas, los mélodos in si/ica pueden ser usados para detectar loei marcadores de interés. Por ejemplo, la secuencia de un ácido nucleico que comprende el locus marcador de inlerés puede ser almacenada en un ordenador. La secuencia del locus marcador deseado o su homóloga puede ser identificada usando un algoritmo de busqueda de ácidos nucleicos apropiado, tal como los provistos, por ejemplo, en programas fácilmente disponibles, tales como BLAST, o aun en procesadores de texto simples. Cebadores de amplificación para detectar marcadores En algunas realizaciones preferidas, los marcadores moleculares de la invención se detectan usando un método de detección basado en PCR apropiado, donde el tamaño o la secuencia del amplícón de PCR son indicativos de la ausencia o la presencia del marcador (por ejemplo, un alelo marcador en particular) . En dichos tipos de métodos, los cebadores de PCR hibridan con las regiones conservadas que rodean la región del marcador polimórfico. Según se acostumbra en la técnica, los cebadores de PCR que se utilizan para amplificar un marcador molecular se denominan a veces "marcadores de PCR" o simplemente "marcadores." Ha de apreciarse que, aunque en la presente dOOJmentación se proveen muchos ejemplos especificos de cebadores (véase la Tabla 3) , es posible diseñar cebadores apropiados para utilizar con la invención usando cualquier método apropiado. No se pretende limitar la invención a un cebador o un par de cebadores en particular. Por ejemplo, los cebadores pueden diseñarse usando cualquier programa de software apropiado, tal como LASERGENE"". En algunas realizaciones, los cebadores de la invención son radiomarcados, o se marcan mediante cualquier medio apropiado (por ejemplo, usando un marcador fluorescente no radiactivo) , para permitir una visualización rápida de los amplicones de distinto tamaño después de la reacción de amplificación, sin un paso de marcado o un paso de visualización adicional. En algunas realizaciones, los cebadores no son marcados, y los amplicones se visualizan después de su resolución en función de su tamaño, por ejemplo, después de una electroforesis en gel de agarosa. En algunas realizaciones, la coloración de los amplicones de PCR con bromuro de etidio después de la resolución en función del tamaño permite la visualización de los amplicones de distintos tamai'ios. Los cebadores de la invención no se limitan a la generación de un amplicón de un tamaño en particular. Por ejemplo, los cebadores que se utilizan en la invención para amplificar los locus y los alelos del marcador no se limitan a amplificar la región completa dellOOJs relevante. Los cebadores pueden permitir generar un amplicán de cualquier longitud apropiada. En algunas realizaciones, la amplificación del marcador produce un amplicón de al menos 20 nucleótidos de longitud, o como alternativa, al menos 50 nucle6tídos de longitud, o como alternativa, al menos 100 nucleótidos de longitud, o como allelOativa, al menos 200 nucleótidos de longitud. Selección y desarrollo de plantas asistidos por marcadores Una motivación primaria para el desarrollo de marcadores moleculares en especies de OJltivo es la posibilidad de incrementar la eficiencia en el cruzamiento de plantas a través de selección asistida por marcadores (MAS) . Los marcadores genéticos se utilizan para Identificar las plantas que contienen un genotipo deseado en uno o mas lOOJs, de las que se espera que transfieran el genotipo deseado a su progenie, junto con un fenotipo deseado. Pueden utilizarse marcadores genéticos para identificar las plantas que contienen un genotipo deseado en un ES 2 498 440 A2 locus, o en varios locus no ligados o ligados (por ejemplo, un haplolipo) , de las que podria esperarse que transfirieran el genotipo deseado a la progenie, junto con un fenotipo deseado. En la presente invenciOn se provee el medio para identificar plantas, particularmente plantas de maiz, que tienen resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada. o que son susceptibles al MRCV, por medio de la identificación de aquellas plantas que tienen un alelo especifico en uno de diversos loci, por ejemplo, MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 o MZA91Q5. En una realización, las plantas resistentes identificadas lienen el siguiente haplotipo: e en MRQV_08351-173, A en MRQV_08351-262, G en MRQV_08351-280, G en MRQV_08351-323, C en MRQV_08351-369, C en MROV_08351-372. De manera similar, al identificar plantas que carecen del locus marcador deseado, pueden identificarse las plantas susceptibles o menos resistentes, y por ejemplo, pueden eliminarse de los cruzamientos subsiguientes. De manera similar, dichos loci marcadores pueden introducirse en cualquier antecedente genómico, germoplasma, planta, linea o variedad deseada, etcétera, como parte de un programa de desarrollo general MAS diseñado para mejorar el rendimiento del maíz. En una realización, las plantas susceptibles identificadas tienen el siguiente haplotipo: T en MRQV_08351-173, T en MRQV_08351-262, A en MRQV_08351-280, C en MRQV_08351-323, T en MROV_08351-369, T en MRQV _08351-372. En la invención también se proveen intervalos de QTL cromosómicos que también pueden usarse en la MAS para seleccionar aquellas plantas que presentan resistencia conferida recientemente o mejorada al MRCV. De manera similar, los intervalos de QTL tambirm pueden usarse para realizar una selección negativa de aquellas plantas que son susceptibles o tienen una resistencia reducida al MRCV. Con la invención puede emplearse cualquier marcador localizado dentro del intervalo de QTI.. (incluyendo los extremos de los intervalos) . Estos intervalos están definidos por los siguientes pares de marcadores: (i) MZA8381 Y MZA18180: (ji) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA 15490 Y MZA2038; (iv) bnlg1458b y umc1261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261a; y (viii) bnlg1327 y umc1262a. En general, en la MAS se utilizan marcadores polimórficos en los que se ha identificado una probabilidad de cosegregación significativa con un carácter de resistencia. Se supone que dichos marcadores están localizados cerca de uno o más genes que le confieren a la planta su fenotipo de resistencia, se consideran indicadores del carácter deseado, y se denominan marcadores QTL. En las plantas se busca la presencia de un alelo deseado en el marcador QTL. Los marcadores (o los alelos marcadores) más preferidos son aquellos que tienen la asociación más fuerte con el carácter de resistencia. Se utiliza un análisis de unión para determinar cuál alelo marcador polimórfico presenta una probabilidad estadística de ca-segregación con el fenolipo de resistencia (por lo tanto, se trata del ~alelo marcador de resistencia") . Después de la identificación merced a la co-segregación de un alelo marcador con el fenotipo de resistencia, es posible utilizar este marcador para una detección rápida y precisa del alelo de resistencia en lineas de plantas, sin la necesidad de cultivar las plantas a través de su ciclo vital y esperar evaluaciones fenotípicas. y además, permite la detección genética del alelo de resistencia en particular, aún cuando la identidad molecular del QTL de resistencia real sea desconocida. Pueden tomarse muestras de tejido, por ejemplo, desde la primera hoja de la planta. y puede analizárselas con el marcador molecular apropiado, para determinar rápidamente cuál progenie avanzará. Los marcadores ligados también permiten eliminar la influencia de factores ambientales que frecuentemente pueden influir en la expresión fenotipica. Puede utilizarse un locus marcador QTL polimórfico para seleccionar aquellas plantas que contienen el alelo (o los alelos) marcador que está correlacionado con el fenotipo de resistencia deseado, lo que tipicamente se denomina selección asistida por marcadores (MAS) . En resumen, se detecta un ácido nucleico correspondiente al ácido nucleico del alelo marcador en una muestra biológica proveniente de una planta a seleccionar. Esta detección puede tomar la forma de la hibridación de un ácido nucleieo sonda con un alelo marcador o un amplicón de éste, por ejemplo, usando una hibridación con especificidad por alelos, un análisis Southern, un análisis Northern, una hibridación in situ, una hibridación de cebadores seguida por una amplificación por PCR de una región del marcador, o semejantes. En la presente documentación se describe una variedad de procedimientos para detectar marcadores, por ejemplo, en la sección intitulada "Técnicas para detectar marcadores". Después de verificar la presencia (o la ausencia) de un alelo marcador en particular en la muestra biológica, la planta se selecciona, (por ejemplo, se uliliza para desarrollar progenie por medio de un cruzamiento selectivo) . Los encargados del cultivo de plantas de maiz desean combinaciones de locus de resistencia con genes de alto rendimiento y otros caracteres deseables para desarrollar variedades de maiz mejoradas. El análisis de grandes cantidades de muestras mediante métodos no moleculares (por ejemplo, evaluación de caracteres en plantas de ES 2 498 440 A2 maiz) puede ser costoso, demorar mucho tiempo y resultar poco confiable. El uso de los marcadores polimórficos que se describen en la presente documentación, cuando están ligados genéticamente a un locus de resistencia, provee un método efectivo para seleccionar variedades resistentes en programas de desarrollo. Por ejemplo, una ventaja de la selección asistida por marcadores con relación a las evaluaciones de resistencia en el campo es que la MAS puede realizarse en cualquier momento del año, independientemente de la temporada de cultivo. Además, en su mayor parte. lOs efectos ambientales son irrelevantes para la selección asistida por marcadores. Cuando segregan varios locus que afectan uno o varios caracteres en una población. por ejemplo, varios locus asociados con la resistencia, o varios locus asociados cada uno con la resistencia a diferentes enfermedades, la eficiencia de la MAS en comparación con et analisis fenotlpico se toma aun mayor, ya que tOdos los locus pueden evaluarse juntos en el laboratorio a partir de una única muestra de ADN. En este caso, pueden evaluarse los marcadores MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 y MZA9105, asi como cualquiera de los siguientes intervalos cromosÓmicos: (i) MZA8381 y MZA18180, (ii) MZA4305 y MZA2803, (iii) MZA15490 y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261a, y (viii) bntg1327 y umc1262a, de manera simultanea o consecutiva, a partir de una sola muestra o una población de muestras. Otro uso de la MAS en el cruzamiento de plantas consiste en asistir en la recuperación del genotipo progenitor recurrente por retrocruzamiento. El relrocruzamiento es un proceso que comprende volver a cruzar una progenie con uno de sus progenitores º líneas progenitoras. El retrocruzamiento comunmente se realiza con el propósito de intrOducir un locus o unos pocos loei desde un progenitor donante (por ejemplo, un progenitor que comprende loei marcadores de resistencia deseables) en un fondo genético que es deseable en los aspectos restantes provenientes del progenitor recurrente (por ejemplo, una linea de maiz que de otra manera tendria alto rendimiento) . Cuantos más ciclos de retrocruzamiento se realicen, mayor sera la contribución genética del progenitor recurrente a la variedad introducida que se obtiene. Frecuentemente, esto es necesario porque las plantas resistentes pueden no ser deseables en otros aspectos, por ejemplo, debidO un rendimiento bajo, una fecundidad baja, etcétera. En contraste, las cepas que son el resultado de programas de desarrollo intensivas pueden tener un rendimiento o una fecundidad excelentes, o semejantes, pero pueden ser deficientes en un carácter deseado, tal como la resistenCia al MRCV. La presencia ylo la ausencia de un marcador genético o un alelo particular, por ejemplo, los marcadores MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490. MZA2038, MZA11826 Y MZA9105, asi como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 y MZA2803, (iii) MZA15490 y MZA2038. (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261a, y (viii) bnlg1327 y umc1262a, en el genoma de una planta. puede determinarse mediante cualquier método mencionado en la presente documentación. Si los acidos nucleicos provenientes de la planta son positivos con relación a un alelo marcador genético deseado. la planta puede autofertilizarse para crear una verdadera linea de cruzamiento con el mismo genotipo, o puede cruzársela con una planta con el mismo marcador o con otras caraCleristicas deseadas para crear una generación hlbrida por medio de un cruzamiento sexual. Introducción de alelos favorables -retrocruzamiento eficiente de marcadores de resistencia en líneas elite Una aplicación de la MAS en el contexto de la presente invención es en el uso de los marcadores de resislencia conferida recientemente o resistencia mejorada para incrementar la eficiencia del esfuerzo de intrOducción o retro cruzamiento dirigido a la introducción de QTL de resistencia en un antecedente deseado (típicamente de alto rendimiento) . En el retrocruzamiento asistido por marcadOres de marcadores específicos (y QTl asociados) a partir de una fuente donante, por ejemplo, en un fondo genético elite o exótico, se realiza una selección entre la progenie del retrocruzamiento para el carácter donante. y luego se utiliza el retrocruzamiento repetidO con la linea elite o exótica para reconstituir tanto del genoma del antecedente elite/exótico como sea posible. ES 2 498 440 A2 Por lo tanto, los marcadores y los métodos de la presente invención pueden utilizarse para guiar la selección asistida por marcadores o el cruzamiento de variedades de malz con el complemento deseado (conjunto) de formas alélicas de segmentos de cromosomas asociados con un rendimiento agricola superior (de resistencia, junto con cualquier otro marcador disponible de rendimiento, etcétera) . Cualquiera de los alelos marcadores descritos puede introducirse en una línea de maíz por introducción, cruzamiento tradicional (o puede introducirse por transformación, o ambas) para obtener una planta de maíz con un rendimiento agrícola superior. La cantidad de alelos asociados con la resistencia que pueden introducirse o que pueden estar presentes en una planta de maíz de la presente invención varía dentro del rango entre 1 y la cantidad de alelas descrita en la presente documentación, y cada uno de estos valores se incorpora en la presente documentación COmo si se mencionara de manera explicita. La presente invención también se extiende a un método para crear una progenie de plantas de maiz, y a dicha progenie de plantas de maíz per se. El metodo comprende cruzar una primera planta de maíz progenitora con una segunda planta de maíz, y cultivar la planta de maíz femenina bajo condiciones apropiadas para el crecimiento de la planta para obtener una progenie de plantas de maiz. Los métodos de cruzamiento y cultivo de plantas de maíz se encuentran dentro de la capacidad de aquellos e:xpertos en la materia. Dicha progenie de plantas de maíz puede analizarse en busca de alelas asociados con resistencia, y de esa manera puede selecciOnarse la progenie deseada. Dicha progenie de plantas o semillas puede comercializarse para la producción de marz, puede utilizarse para atimentos, puede procesarse para obtener un constituyente deseado del malz, o puede utilizarse adicionalmente en episodios de cruzamiento subsiguientes. Por lo menos una de las primera o segunda planta de maíz es una planta de malz de la presente invención, ya que at menos una de las formas alélicas de los marcadores de la presente invención, de manera tal que la progenie es capaz de heredar el alelo. Un método de la presente invención puede aplicarse a al menos una planta de maíz relacionada, tal como de lineas progenitoras o descendientes en el pedigrí de la planta de maíz en cuestión, de modo que sea posible rastrear el atelo de resistencia deseado. La cantidad de generaciones que separan las plantas de maiz sometidas a los métodos de la presente invención será en general de entre 1 y 20, comúnmente entre 1 y 5, Y típicamente 1, 2, 6 3 generaciones de separación, y más frecuentemente, se someterá al método a un descendiente o un progenitor diredo de la planta de maiz (es decir, una generación de separación) . Introducción de alelas favorables -incorporación de gennoplasma "exótico" mientras se mantiene el progreso del cruzamiento La diversidad genética es importante para la ganancia genética a largo ptazo en cualquier programa de desarrollo. Con una diversidad limitada, la ganancia genética eventualmente llegará a una meseta cuando todos los alelas favorables se hayan fijado en la población elite. Un objetivo consiste en incorporar diversidad en un lote elite, sin perder la ganancia genética que ya se ha conseguido y con una inversiÓn lo minima posibte. La MAS provee una indicaciÓn de cuáles regiones genómicas y cuáles alelas favorables provenientes de los ancestros original se han seleccionado y se han conservado durante el transcurso del tiempo, lo que facilita los esfuerzos para incorporar variadones favorables de fuentes de germoplasma exótico (progenitores que no están relacionados con el lote de genes elite) con la esperanza de encontrar alelas favorables que no existan actualmente en el lote de genes elite. Por ejemplo, los marcadores de la presente invención pueden utilizarse para la MAS en cruzamientos relacionados con lineas de maíz elite x exóticas, sometiendo a ta progenie que se está segregando a una MAS para mantener los alelas de rendimiento principales, junto con los alelos marcadores de resistencia descritos en la presente documentación. Clonación posicional Los loei marcadores moleculares y los alelas de la presente invención, por ejemplo, los marcadores MZA625, MZA16656, MZA15451, MZAI5490, MZA2038, MZA11826 y MZA91 05, así como cualquiera de los siguientes inteNalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (iii) MZA15490 Y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umcl262a, (vi) bnlg1327y umc1261a, y (viii) bnlg1327 y umc1262a, pueden utilizarse, según se indicó con anlerioridad, para identificar un aTL de resistencia, el cual puede donarse mediante procedimientos bien establecidos, por ejemplO, según se describe en detalle en Ausubel, Berger & ES 2 498 440 A2 Sambrook, citado en la presente documentación. Dichos clones oon resistencia se identifican en primer lugar por su ligamiento genético con los marcadores de la presente invención. El aislamiento de un :.tcido nueleieo de interes se realiza mediante cualquier cantidad de mélodos, tal como se describe en detalle en referencias tales como Ausubet, Berger & Sambrook, citado en la presente documentación, y Clark, editor (1997) Plan! Molecular Siolooy: A Laboratorv Manual Springer-Verlag, Berlín. Por ejemplo, en la ·clonación posicional de genes" se utiliza la proximidad de un marcador de resistencia para definir físicamente un fragmento cromosómico aislado que contiene un QTL de un gen de resistencia. El fragmento cromosómico aislado puede producirse utilizando métodos bien conocidos, tales como la digestión de AON cromos6mico Con una o más enzimas de restricdón, o la amplificación de una región cromosómica en una reacción en cadena de polimerasa (PCR) , o con cualquier reacción de amplificación alternativa apropiada. El fragmento digerido o amplificado típicamente se une a un vector apropiado para la replicación, y por ejemplo, la expresión del fragmento insertado. los marcadores que son adyacentes a un marco abierto de lectura (ORF) asociado con un carácter fenotípico pueden hibridar con un clon de ADN (por ejemplo, un clan proveniente de una biblioteca genómica de AON) , con lo que puede identificarse sobre cuál ORF (o fragmento de ORF) está localizado un don. Si el marcador es más distante, se identifica un fragmento que contiene el ORF mediante episodios sucesivos de selección y aislamiento de clones que Juntos comprenden una secuencia de AON contigua, un proceso que se denomina "rastreo crom6somico", que da como resultado un "contigO o "mapa de contigs". Pueden encontrarse protocolos apropiados para guiar a aquellos expertos en la materia en el aislamiento de clones asociados con marcadores ligados, por ejemplo, en Berger, Sambrook y Ausubel, todos citados en la presente documentación. Generación de células v plantas transgénicas la presente invención también se relaciona con células y organismos huésped que han sido transfonnados con ácidos nucleicos correspondientes a un QTl de resistencia identificado de acuerdo con la invención. Por ejemplo, estos ácidos nucleicos incluyen intervalos cromosómicos (por ejemplo, fragmentos genómicos) , ORF y/o ADNc que codifICan un carácter de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada. Adicionalmente, en la invención se provee la producción de polipéplidos que proveen resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada por medio de técnicas recombinantes. los textos generales donde se describen lécnicas de biología molecular para la clonación y la manipulación de ácidos nucleicos, y la producción de los polipéptidos codificados incluyen Berger, Sambrook y Ausubel, supra. En dichos textos se describe la mutagénesis, el uso de vectores y promotores, y muchos otros tópicos relevantes relacionados, por ejemplo, con la generación de clones que comprenden ácidos nucleicos de interés, por ejemplo, loci marcadores, Sondas marcadoras, QTl que se segregan con loei marcadores, etcétera. las células huésped se diseñan geneticamente (por ejemplo, se transducen, transfectan, transforman, etcétera) con los vectores de la presente invención (por ejemplo, vectores tales como vedores de expresión que comprenden un ORF derivado de un QTl de resistencia o relacionado con éste) , que pueden ser, por ejemplo, un vector de donación, un vector versálil o un vector de expresión. Dichos vectores toman la forma, por ejemplo, de un ptásmido, un fagémido, un Agrobacterium, un virus, un polinucleótido desnudo (lineal o circular) o un polinucleótido conjugado. los vectores pueden introducirse en bacterias, especialmente con el propósito de su propagación y expansión. los vectores también se introducen en tejidos vegetales y se cultivan en Células vegetales o protoplastos vegetales mediante una variedad de métodos convencionales conocidos en la técnica, que incluyen, sin limitaciones, electroporación (From et al. (1985) Proc. Nat!. Acad. Sci. USA 82; 5824) , infección con vectores virales, tales como el virus en mosaico de la coliflor (CaMV) (Hohn et al. (1982) Molecular Biolog ... of Plant Tumors (Academic Press, Nueva York, pp. 549-560; Patente de los EEUU Nº 4407956) , penetración balística a alta velocidad con pequeñas partículas con el ád do nudeico, ya sea denlro de una matriz en esferas o partículas pequeñas, o sobre la superficie (Klein et al. (1987) Nature 327; 70) , uso de polen como veelor CNO 85/01856) , o uso de Agrobacterium lumefaciens o A. rhizogenes que contienen un plasmido ADN-T donde se donan fragmentos de ADN. El ADN-T del plásmido se transmite a células vegetales al infectar1as con Agrobacterium tumefaciens, y una porción se integra de manera estable en el genoma de la planta (Horsch et al. (1984) Science 233; 496; Fraley et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 80; 4803) . Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con los metodos para introducir acidos nudeicos en Sambrook, Berger y Ausubel, supra. El mélodo para introducir un ácido nudeico de la presente invención en una célula huésped no es crítico para la presente invención, y no pretende limilar la invención a un método en particular para introdudr material genético exógeno en una célula huésped. Por lo lanto, con la invención puede emplearse y utilizarse cualquier método apropiado, por ejemplo, que incluya, sin limitaciones, los métodos descritos en la presente documentación, que permita realizar una introducción efectiva de un acido nucleico en una célula o un proloplasto. las células huésped diseñadas pueden cultivarse en medios nutritivos convencionales modificados, según sea ES 2 498 440 A2 apropiado para dichas actividades, tal como con promolores activadores, o seleccionando las transfonnantes. Opcionalmente, dichas células pueden cultivarse para obtener plantas transgénicas. Además de en Sambrook, Berger y Ausubel, supra, la regeneración de plantas a partir de prolop' aslos cultivados se describe en Evans el al. (1983) "Protoplast lsolation and Culture", Handbook oí Plan! Cell Cultures 1, 124-176 (MacMillan Publishing Ca., Nueva York.; Davey (1983", "Recen! Oevelopmenls in Ihe Culture and Regeneration of Plan! Protoplasts", Proloplasls. pp. 12-29, (Birkhauser, Basel) ; Dale (1983) · Protoplast Culture and Planl Regeneralion of Cereals and Olher Recalcitran! Crops', Protoplasts pp. 31-41, (Birkhauser, Basel) ; Binding (1985) "Regeneration of Plants', Plant Protoplasts, pp. 21+73, (e Re Press, Boca Raton, FL) . Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con el cultivo y la regeneración de células vegetales en Payne et al. (1992) Plant Cell and Tissue Culture in liguid Syslems John Witey & Sons, Inc. Nueva York, NY: Gamborg y Phillips (eds) (1995) Plant Cell Tissue and Oraan Culture' Fundamental Methods Springer Lab Manual, Springer+Verlag (Berlín Heidelberg Nueva York) , y Plant Molecular Biology (1993) R. R. D. Croy, editor, Bios Scientific PUblishers, Oxford, Reino Unido. ISBN O 12 198370 6. También se describen medios de cultivo para células en generat en Atlas y Parks (editores) The Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Raton, FL. Puede hallarse información adicional para el cultivo de células en literatura que puede adquirirse comercialmente, tal como life Science Research Cell Culture Catalogue (1998) , de Sigma-A1drich, Inc (St Louis, MO) ("Sigma+LSRCCC") , y por ejemplo, Plant Culture Catalogue y suplementos (por ejemplo, 1997 o posteriores) , también de Sigma-Aldrich, tnc (St Louis, MO) ("Sigma+PCCS·) . La presente invención también se relaciona con la producción de organismos transgénicos, que pueden ser bacterias, levaduras, hongos, animales o plantas, transducidos con los ácidos nudeicos de la invendón (por ejemplo, ácidos nudeicos que comprenden los loo y/o OTl marcadores descritos en la presente documentación) . Puede encontrarse una descripción exhaustiva de las técnicas relevantes para el cultivo de bacterias, organismos eucariotas unicelulares y células en las referencias citadas en la presente documentación y las que se mencionarán mas adelante. Hay varios metodos bien conocidos disponibles para introducir ácidos nucleicos diana en células bacterianas, cualquiera de los cuales puede utilizarse en la presente invención. ¡;stos inCluyen la fusión de las células receptora con protoplastos bacterianos que contienen el ADN, el tratamiento de las célutas con liposomas que contienen el AON, la electroporación, el bombardeo con proyectiles (biolistica) , la administración por medío de fibras de carbono y la infección con vectores virales (que se describirá con mayor detalle más adelante) , etcétera. Las células baderianas pueden utilizarse para amplificar los plásmidos que contienen las construcciones de AON de la presente invención. Las bacterias se cultivan hasta la fase logarítmica, y los plásmidos dentro de las bacterias pueden aislarse mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Sambrook) . Además, pueden obtenerse comercialmente muchos conjuntos de elementos para la purificación de plásmidos a partir de bacterias. Para su uso correcto, han de seguirse las instrucciones del fabricante (véase, por ejemplo, EasyPrep T~, FlexiPrep T~, ambos de Pharmacia Biotech; StrataClean nA, de Stratagene, y OIAprep T~ de Oiagen) . los plásmidos aislados y purificados se siguen tratando para producir otros plásmidos, que se utilizan para transfectar células vegetales o se incorporan en vectores relacionados con Agrobacterium tumefaciens para infectar plantas. Los vectores típicos contienen terminadores de la transcripción y la traducción, secuencias de inicio de la transcripción y la traducción, y promotores útiles para regular la expresión del ácido nucleico diana en particular. los vectores opcionalmente comprenden cassettes de expresiOn genéricos que contienen al menos una secuencia de terminación independiente, secuencias que permiten la replicación del cassette en eucariotas o procariotas, o ambos, (por ejemplo, vectores vetsatiles) . y marcadores de selección para sistemas procatiotas y eucariotas. los vectores son apropiados para la replicación y la integración en procariotas, eucariotas, o preferiblemente ambos. Véanse Giliman & Smilh (1979) ~8: 81: Roberts et al. (1987) Nature 328: 731; Schneider et al. (1995) Protein Expr. Purif. 6: 10: Ausubel, Sambrook, Berger (supra) . Se provee un catálogo de bacterias y bacteriófagos útiles para la clonación, por ejemplo, en la Colección Americana de Tipos de Cultivo (ATCC) , por ejemplo, The ATCe Catalogue of Bacteria and Bacteriophage (1992) Ghema et al. (editores) , publicado por la ATCe. los procedimientos básicos adicionales para la secuenciación, la clonación y otros aspectos de la biologia molecular, y las consideraciones teóricas subyacentes también pueden encontrarse en Watson el al. (1992) Recambinant DNA, Segunda Edición, Scientific American Books, NY. Además, esencialmente cualquier ácido nucleico (y virtualmente cualquier ácido nuc1eico marcado, ya sea convencional o no convencional) puede encargarse a medida o como referencia en cualquiera de diversas fuentes comerd ales, at1es como Midland Certified Regent Company (Midland, TX) , The Great American Gene Company (Ramona, CA) , ExpressGen Inc. (Chicago, Il) , Operon Technologies Inc. (Alameda, CA) , y muchos otros. Introducción de ácidos nucleicos en plantas Las realizaciones de la presente invención se relacionan con la producción de plantas transgén¡cas que comprenden los ácidos nucleicos clonados, por ejemplo, ORF y ADNc aislados genes que COdifican genes de resistencia. las técnicas para transformar células vegetales con ácidos nucleicos pueden obtenerse y adaptarse fácilmente a la invención. Además de Berger, Ausubel y Sambrook, todos citados anteriormente, las referencias generalmente útiles para la clonación, el cultivo y la regeneración de células vegetales incluyen Jones (editor) (1995) Plant Gene Transference and Exoression Protocols Melhods in Motecular Biology Volumen 49, Humana Press Towata NJ ("Jones") ; Payne et al. (1992) Plant Cel! and Tissue Culture in Liquid Systems John Wiley & ES 2 498 440 A2 Sons, Inc. Nueva York, NY (·Payne~) ; y GamboTg y Phillips (editores) (1995) Planl Gell Tissue and Orqan Culture' Fundamental Melhods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlín Heidelberg Nueva York) ("Gamborg") . En Atlas y Parks (editores) The Handbook of Microbioloqical Media (1993) eRe Press, Boca Ralon, Fl rAllas") se describe una variedad de medios de cultivo para células. Puede hallarse información adicional para el cultivo de células vegetales en literatura que puede adquirirse comercialmente, tal como life Sclence Research Gell Culture Catalogue (1998) , de Sigma-Aldrich, Inc (SI louis, MO) (Sigma-LSRCCC) , y por ejemplo, Plan! Culture Catalogue y suplementos (1997) , también de Sigma-Aldrich, Inc (SI Louis, MO) (Sigma-PCCS) . Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con el cultivo de células vegetales en Croy. Las construcciones de ácidos nucleicos de la invención, por ejemplo, los plásmidos, los cósmidos, los cromosomas artificiales, los polinudeótidos de ADN y ARN, se introducen en células vegetales, ya sea en cultivo o en los órganos de una planta, mediante una variedad de téO'licas convencionales. Si la secuencia se expresa, la secuencia opcionalmente se combina con secuencias reguladoras del inicio de la transcripción y la traducción, las cuales dirigen la transcripción o la traducción de la secuencia a partir del AON exógeno en los tejidos deseados de la planta transformada. Los ilcidos nucleicos aislados de la presente invención pueden introducirse en plantas de acuerdo con cualquiera de los diversos procedimientos que se conocen en la técnica . Los procedimientos para transformar una amplia variedad de especies de plantas superiores también son bien conocidos y están descrit-os en la literatura técnica, cientifica y de patentes, literatura que puede -obtenerse fácilmente. Véase, por ejemplo, Weising et al. (1988) Ann. Rev. Gene!. 22: 421-477. Las construcciones de AON de la invención, por ejemplo, los plásmidos, los fagémidos, los cósmidos, los fagos, los polinucleótidos de AON desnudos o conjugados de manera diferente (por ejemplo, AON conjugado con polilisina, AON conjugado con péptidos, AON conjugado con liposomas) , o los cromosomas artificiales pueden introducirse directamente en el ADN genómico de la célula vegetal usando procedimientos tales como la electroporación y la microinyección de protoplastos en las células vegetales, o las construcciones de ADN pUeden introducirse directamente en las células vegetales usando métodos balísticos, tales como el bombardeo con partículas de AON. los procedimientos de microinyección para inyectar plantas, por ejemplo, células, embriones, callos y protoplastos, se conocen en la técnica y están bien descritos en la literatura científica y de patentes. Por ejemplo, se describe una cantidad de métodos en Jones, y también en las otras referencias mencionadas en la presente documentación y disponibles en la literatura. Por ejemplo, en Paszkowski, et al., EMBO J. 3: 2717 (1984) se describe la introducción de construcciones de ADN usando una precipitación con polietilenglicol. En Fromm, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 5824 (1985) se describen técnicas de electroporación. En Klein, et al., Nature 327: 70-73 (1987) se describen técnicas de transformación ballstica. Pueden hallarse detalles adicionales en Jones y Gamborg, supra, y en la Patente de los EEUU Nº 5990387. Como alternativa, y preferiblemente en algunos casos, se emplea una transformación mediada por Agrobacterium para generar plantas transgénicas . Las técnicas de transformación mediadas por Agrobacterium, que incluyen el desarme y uso de vectores binarios, también están bien descritas en la literatura científica. Véase, por ejemplo, Horsch, et al. (1984) Science 233; 496; Fraley et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4B03, y se revisan en Hansen y Chillon (1998) Curr. Top. Microbiol. Immunol. 240:21, y Das (1998) Subcellular Biochemistrv 29: Plant Microbe Interactions, pp. 343-363_ Las construcciones de ADN opcionalmente se combinan con regiones adyacentes de AON-T apropiadas y se introducen en un vector huésped convencional Agrobacterium tumefaciens. Cuando la bacteria infecta la célula, las funciones de virulencia del huésped Agrobacterium tumefaciens dirigen la inserción de la construcción y el marcador adyacente en el ADN de la célula vegetal. Véase la Patente de los EEUU Nº 5591616. Aunque Agrobacterium es útil en principio en dicotiledóneas, determinadas monocotiledóneas pueden transformarse utilizando AgrobBcterium. Por ejemplo, la transformación de maíz con Agrobacterium se describe en la Patente de los EEUU Nº 5550318. Otros métodos de transfección o transformación induyen (1) la transformación mediada por Agrobacterium mizogenes (véanse, por ejemplo, lichtenstein y Fuller (1987) en Genetic Engineering, vol. 6, PWJ Rigby, Editor, landres, Academic Press; y lichtenstein; y Draper (1985) en DNA Cloning, Vol. 11, D. M. Glover, editor, Oxford, IRI Press; WO 88102405, publicado el 7 de Abril de 1988, donde se describe el uso de una cepa de A. rhizogenes A4 y su plásmido Ri, junto con los vectores de A. tumefaciens pARC8 o pARC16) , (2) la absorción de AON mediada por liposomas (véase, por ejemplo, Freeman et al. (1984) Plant Cell Physiol. 25:1353) , y (3) el método vortex (véase, por ejemplo, Kindle (1990) Proc. Na!1. Acad. Sci. (USA) 87:1228) . El ADN tambíén puede introducirse en plantas por transferencia directa en polen, tal como se describe en Zhou el al. (1983) Methods in Enzymoloay, 101: 433; O, Hess (1987) Intem. Rev, Cytol. 107: 367; Luo et al. (1988) ES 2 498 440 A2 Plan! Mol. Biol Reo. 6:165. La expresión de genes que codifican polipéplidos puede obtenerse inyectando el ADN en los órganos reproductores de una planta, tal como se describe en Pena el al. (1987) Nature 325:274. El ADN tambien puede inyectarse directamente en las células de embriones inmaduros, y los embriones desecados pueden rehidralarse como se describe en Neuhaus el al. (1987) Theor. ARPI. Gene!. 75:30; y Benbrook el al. (1986) en Proceedings Sio Expº ButtelWorth, Stoneham, Mass., pp. 27-54. En la técnica se conoce una variedad de virus que atacan vegetales que pueden emplearse como veclores. los cuales incluyen el virus en mosaico de la coliflor (CaMV) , el virus géminis. el virus en mosaico de la broma y el virus en mosaico del tabaco. Generaciónfregeneración de plantas transgénicas Las células vegetales transformadas que se obtienen mediante cualquiera de las técnicas de transformación anteriores pueden cultivarse para regenerar una ptanta completa que posee el genotipo transformado. y por lo tanto, el fenotipo deseado. Dichas técnicas de regeneración se basan en la manipulación de detenninadas fitohormonas en un medio de cultivo para el desarrollo de tejidos, que típicamente se basa en un marcador biocida y/o herbicida que ha sido introducido junto con las secuencias de nucleótidos deseadas. la regeneración de plantas a partir de protoplastos en cultivo se describe en Payne; Fundamental Methods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin, Heidelberg, Nueva York) ; Evans et al. (1983) Protoplasts Isolation and Culture Handbook af Plant Cell Culture pp. 124-176, Macmillian Publishing Company, Nueva York; y Binding (1985) Regeneration of Plants Plant Prot0plasts pp. 21-73, CRC Press, Boca Raton. la regeneración también puede realizarse a partir de callos vegetales, explantes, embriones somáticos (Dandekar et al. (1989) J. Tissue Cul!. Meth. 12: 145; McGranahan, et al. (1990) Célula vegetal Rep. 8:512) órganos, o partes de éstos. Dichas técnicas de regeneración se describen en general en Klee et al. (1987) Ann. Rev. Plant Phvs. 38:467-486. Pueden hallarse detalles adicionales en Payne y Jones, supra, y Weissbach y Weissbach, editore (1988) Methods for Plant Molecular Bioloqy, Academic Press, Inc., San Diego, CA. Dicho proceso de regeneración y desarrollo incluye los pasos de selección de las células y los brotes transformados, formación de raíces en los brotes transformados, y cultivo de las plántulas en tierra. Dichos métodos se adaptan a la invención para producir plantas transgénicas con QTL y olros genes aislados de acuerdo con los métodos de la invención. Además, la regeneración de plantas que contienen polinucleótidos de la presente invención, los cuales han sido introducidos mediante Agrobacterium en células de explantes de hojas, puede efectuarse como se describe en Horsch el al. (1985) Science 227:1229-12331. En dicho procedimiento, las transformantes se cultivan en presencia de un agente de selección y en un medio que induce la regeneración de brotes en las especies vegetales a transformar, tal como se describe en Fraley et al. (1983) Proc. Nat!. Acad. 8ci, USA 80:4803. Dicho procedimiento típicamente resulla en brotes en un periodo de entre dos y cuatro semanas, y dichos brotes transformados se transfieren posteriormente a un medio inductor de ralces apropiado que contiene el agente de selección y un antibiótico para impedir el crecimiento de bacterias. Las plantas transgénicas de la presente invención pueden ser fértiles o estériles. No se pretende limitar la transformación de plantas y la expresión de pOlipéptidos que proveen resistencia a enfennedades a maiz, tal como se describe en la presente invención. En efecto, se contempla la posibilidad de usar los pOlipéplidos que proveen la resistencia deseada en maiz para proveer dicha resistencia en olras especies de importancia agricola y hortícola, merced a procedimientos de transformación y expresión. Por ejemplo, estas especies incluyen soja, canota, alfalfa, trigo, girasol y sorgo. En la construcción de los cassettes de expresión recombinantes de la invención, los cuales incluyen, por ejemplo, plásmidos auxiliares que comprenden funciones de virulencia, y plásmidos o virus que comprenden secuencias de AON exógeno, tales como genes estrudurales, opcionalmente se emplea un fragmento promotor vegetal que dirige la expresión de un ácido nucleico en atguno o todos tos tejidos de una planta regenerada. los ejemplos de promotores constitutivos inctuyen la región de inicio de transcripción del virus en mosaico de la coliflor (CaMV) 358, el promotor l' ó 2' derivado del ADN-T de Agrobacterium lumefaciens, y otras regiones de inicio de transcripción de distintos genes vegetales conocidos por aquellOS expertos en la materia. Como alternativa, el promotor vegetal puede dirigir la expresión del polinucleótido de la invención en un tejido especifico (promotores con especificidad por tejidos) , o puede estar bajo un control ambiental más preciso (promotores inducibles) . los ejemplos de promotores con especificidad por tejidos bajo el control del desarrollo incluyen los promotores que permiten iniciar la transcripción solamente en determinados tejidos, tales como frutos, semillas o flores. Puede ser apropiado cualquiera de los diversos promotores que dirigen la transcripción en células vegetales. El promotor puede ser constitutivo o inducible. Además de los promotores mencionados con anterioridad, los promotores de origen bacteriano que operan en plantas incluyen el promotor de octopina sintetasa, el promotor de nopalina sintetasa y otros promotores derivados de plásmidos Ti nativos. Véase Herrara-Estrella et al. (1983) , Nature, 303:209. los promotores virales incluyen los promotores 35S y 19S del virus de ARN en mosaico de la coliflor. Véase, Odell el al. (1985) Nature, 313:810. Otros promotores vegetales incluyen el promotor del inhibidor de tripsina de Kunilz (KTI) , SCP1, SUP, UCD3, el promotor de la subunidad pequeña de la ribulosa-l, 3-bisfosfato carboxilasa y el promotor de la faseolina. También puede utilizarse la secuencia promotora del gen E8 y otros genes. El aislamiento y la secuencia del promotor E8 se describen en detalle en Deikman y Fischer (1988) ES 2 498 440 A2 EMBO J. 7:3315. Actualmente están en uso muchos otros promotores, los cuales pueden acoplarse COn una secuencia de ADN exógeno para dirigir la expresión del aado nudeico. Si se desea la expresión de un polipéptido proveniente de un AONc, típicamente se incluye una región de poliadenilación en el extremo 3' de la región que lo codifica. la región de poliadeniladón puede derivar del gen natural, proveniente de una variedad de otros genes vegetales, o por ejemplo, de ADN-T. El vedor que comprende las seruencias (por ejemplo, las regiones promotoras o codificantes) provenientes de genes que codifican productos de expresión y transgenes de la invenCión típicamente incluirán una subsecuencia de ácido nudeico, un gen marcador que confiere un fenotipo de selección, o como alternativa, detectable, a las células vegetales. Por ejemplo, el marcador puede codificar tolerancia a un biocida, en particular, tolerancia a un antibiótico, tal como tolerancia a kanamicina, G418, bleomicina, higromicina, o tolerancia a un herbicida, tal como tolerancia a cloroslufurón º fosfinotricina (el ingrediente activo en los herbicidas Bialaphos º Basta) . Véase, por ejemplo, Padgette et al. (1996) en Herbicide-Resistant Croos (Duke, editor) , pp 53-84, CRC Lewis Publishers. Boca Raton. Por ejemplo, la selectividad por herbicidas especificos para el cultivo puede conferirse incluyendo en los cultivos genes que codifican enzimas apropiadas que metabolizan el herbicida y provienen de otros organismos, tales como microbios. Véase, Vasil (1996) en Herbicide-Resistant Crops (Duke. editor) , pp 85-91 . eRe lewis Publishers. Boca Raton) . Aquellos expertos en la materia han de reconocer que, después de incorporar de manera estable el cassette de expresión recombinante en plantas transgénicas y confirmar que es operativo, puede introducírselo en otras plantas por medio de un cruzamiento sexual. Puede utilizarse cualquiera de una variedad de técnicas de cruzamiento convencional, dependiendo de las especies a auzar. En cultivos propagados de manera vegetativa. las plantas transgénicas maduras pueden propagarse tomando cortes, o mediante técnicas de cultivo de tejidos para producír muchas plantas idénticas. Se realiza la selección de los transgénicos deseables. y se obtienen nuevas variedades y se propagan de manera vegetativa para uso comercial. En cultivos propagados por semillas, las plantas transgénicas maduras pueden endocruzarse para producir una planta homodgota por endocruzamiento. La planta proveniente del endocruzamiento prOduce semillas que contienen el écido nucleico heterólogo introducido recientemente. Dichas semillas pueden cultivarse para producir plantas que podrian prOducir el fenotipo seleccionado. Las partes que se obtienen de la planta regenerada, tales como las flores. las semillas, [as hojas, las ramas, los frutos. etcétera. están incluidas en la invención, siempre y cuando dichas partes comprendan células que comprendan el écido nucleico aislado de la presente invención. La progenie y las variantes. y los mutantes de las plantas regeneradas también están incluidos dentro del alcance de la invención. siempre que estas partes comprendan las secuencias de ácido nucleico introducidas. La transmisión del ácido nucleico de la presente invención en las plantas transgénicas o introducidas que expresan un polinucleótido de la presente invención puede detectarse. por ejemplo. mediante métodos de detección de ácidos nucleicos convencionales, o por protocolos de inmunotransferencia. Puede determinarse la expresión a nivel del ARN para identificar y cuantificar las plantas COn expresión positiva. Pueden emplearse técnicas de análisis de ARN convencionales, las cuales incluyen ensayos de amplificación por RT-PCR empleando cebadores de oligonudeótidos diseñados para amplificar solamente ARN molde heteróloga o de intragresión, y ensayos de hibridación en solución usando muestras específicas marcadas a unidas a QTl. También puede analizarse la expresión de protelnas en las plantas. por ejemplo, con análisis de inmunotransferencia Western, usando anticuerpos que reconocen los polipéptidos codificados. Además. puede realizarse una hibridación in silu e inmunocitoquimica de acuerdo con protocolos convencionales, usando polinucleótidos sonda especlficos para los ácidos nudeicos heterólogos y los anticuerpos. respectivamente, con el fin de localizar sitios de expresión dentro del tejido transgénico. En general. usualmente se analiza el ácido nucleico incorporadO en varias lineas transgénicas para identificar y seleccionar las plantas con los pertiles de expresión más apropiados. Una realización de la invención consiste en una planta transgénica que es homocigota para el ácido nucleico heterólogo agregado; por ejemplo, una planta transgénica que contiene dos copias de la secuencia de ácido nudeico agregada, por ejemplo. un gen en el mismo lorus en cada cromosoma de un par de aomosomas homólogos. Una planta transgénica homocigota puede obtenerse cruzando sexualmente (auto-fertilizando) una planta transgénica heterocigota que contiene un único ácido nudeico heterólogo agregado, haciendo germinar algunas de las semillas que producen, y analizando las plantas que se obtienen en busca de la expresión alterada de un polinude6tido de la presente invención, en comparación con una planta control (por ejemplo. una planta no transgénica nativa) . Puede utilizarse un retrocruzamiento con una planta progenitora y un exocruzamiento con una planta no transgénica para introducir el ácido nucleico heterólogo en un antecedente seleccionado (por ejemplo, una linea elite o exótica de maiz) Métodos para las plantas de maiz resistentes al MRCV Aquellos experimentados en el cultivo de plantas pueden reconocer las plantas de malz resistentes en el campo y seleccionar los individuos o las poblaciones resistentes para propósitos de desarrollo o propagación. En este ES 2 498 440 A2 contexto, los encargados del cultivo de las plantas pueden reconocer las plantas de maíz "resistentes' y "no resislentes~, o · susceptibles", Los encargados del cultivo de las plantas han de apreciar que la resistencia de la planta es un espectro fenotípico que consiste en extremos de resistencia, susceptibilidad, y un contínuo de fenotipos de resistencia intermedia. la resistencia también varra debido a efectos ambientales y a la gravedad de la infección por patógenos. La evaluación de los fenotipos usando ensayos reproducibles y métodos de calificación de la resistencia son valiosos para los científicos que buscan identificar los locus genéticos que confieren resistencia, para realizar la selección asistida por marcadores para crear poblaciones resistentes, y para las técnicas de introducción que tienen por objeto incluir un carácter de resistencia en una linea de maíz elite, por ejemplo. En contraste con las observaciones de campo fortuitas donde las plantas se clasifican como "resistentes· o ·susceptibles", se conocen diVersos sistemas para calificar el grado de resistencia o susceptibilidad de una planla. Estas técnicas pueden aplicarse a distintos campos en distintos momentos, y resultan en califICaciones de la resistencia que pueden usarse para caracterizar una cepa dada, independientemente de las condiciones de aJltivo o la localización. Sistemas de detección/correlación automatizados de la invención En algunas realizaciones, en la presente invención se induye un sistema automatizado para detectar los marcadores de la invención y/o correlacionar los marcadores con un fenotipo deseado (por ejemplo, la resistencia) . Por ende, un sistema tipico puede incluir un conjunto de sondas o cebadores marcadores configurados para detectar al menos un alelo favorable de uno o más loci marcadores asociados con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada al MRCV. Dichas sondas o cebadores se configuran para detectar los alelos marcadores indicados en las tablas y los ejemplos en la presente documentación, por ejemplo, usando cualquier formato de detección de alelos disponible, por ejemplO, la detección basada en matrices en fase sólida o liquida, la detección en muestras con base microfluida, etcetera. Por ejemplo, en una realización, ellocus marcador es MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA91 05, o cualquier combinación de estos, asi como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (iii) MZA 15490 Y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261 a, y (viii) bnlg1327 y umc1262a, o cualquier combinación de estos, yel conjunto de sondas se configura para detectar el locus. El sistema ¡¡pioo incluye un detector que se configura para detectar uno o más señales de salida desde el conjunto de sondas marcadoras o cebadores, o amplicones de estos, con lo que puede identificarse la presencia o la ausencia del alelo. Hay una amplia variedad de aparatos disponibles para detección de set'iales, los cuales incluyen tubos fotomultiplicadores, especlrofotómelros, matrices de CCD, matrices y analizadores de matriz, detectores de barrido, fototubos y fotodiodos, estaciones de microscopia, analizadores galvánicos, aparatos de detección de amplificación de ácidos nudeicos con base microfluida, etcétera. la configuración precisa del detector dependerá en parte del tipo de marcador que se utilice para detectar el alelo marcador, asi como del instrumental que el usuario pueda obtener de manera más conveniente. Pueden usarse detectores que permiten detectar ta fluorescencia, la fosforescencia, la radiactividad, el pH, la carga, la absorbancia, la luminiscencia, la temperatura, el magnetismo, o semejantes. Las realizaciones típicas de los detectores incluyen detectores de luz (por ejemplo, fluorescencia) o detectores de radiactividad. Por ejemplo, la detección de una emisión de luz (por ejemplo, una emisión de fluorescenda) u otra sonda marcadora es indicatlva de la presencia o la ausencia de un alelo marcador. La detección de fluorescencia es especialmente preferible, y en general, se la utiliza para la detección de acidos nucleicos amplificados (sin embargo, sobre los amplicones tambien pueden llevarse a cabo operaciones hacia el extremo 5· y/o hacia el extremo 3· que pueden induir olros métodos de detección) . En general, el detector detecta uno o más marcadores de emisión (por ejemplo, luz) proveniente de un marcador de sonda, que es indicativo de la presencia o ausencia de un alelo marcador. El o los detectores opcionalmente monitorean una o varias señales provenientes de una reacción de amplificación. Por ejemplo, el detector puede monitorear señales ópticas que corresponden a los resultados de un ensayo de amplificación "en tiempo real". las instrucciones del sistema que permiten correlacionar la presencla o la ausencia del alelo favorable con la resistencia predicha también son una caracterlstica de la invención. Por ejemplo, las instrucciones pueden incluir ES 2 498 440 A2 al menos una tabla de consulta donde se inCluye una correlación entre la presencia o la ausenCia de los alelos favorables, y la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada predicha . La forma preCisa de las instrucciones puede ....ariar dependiendo de los componentes del sistema, por ejemplo, puede presentarse como un sistema de software en uno o més unidades de sistema integradas (por ejemplo, un microprocesador, un ordenador o un medio que puede ser leido por un ordenador) , o puede presentarse en una o más unidades (por ejemplo, ordenadores o medios que pueden ser leidos por un ordenador) acoplados al detector en forma operativa. Como se mencionó, en una realización típica, las instrucciones del sistema incluyen al menos una tabla de consulta donde se incluye una correlación entre la presencia o la ausencia de los alelos favorables, y la resistencia conferida recientemente o la resistenCia mejorada predicha. Las instrucciones tipicamente también induyen instrucciones que proveen una interfase de usuario con el sistema, por ejemplo, para permitir que un usuario vea los resultados del análisis de una muestra e ingrese los parámetros al sistema. El sistema típicamente incluye componentes para almacenar o transmitir datos que pueden ser leidos por un ordenador, los cuales representan o designan los alelas detectados con los métodos de la presente invención, por ejemplo, en un sistema automatizado. Los medios que pueden ser leídos por un ordenador pueden incluir memorias caché, principal y de almacenamiento, y/u otros componentes de almacenamiento electrónico de datos (discos rigidos, diskettes extraíbles, discos de almacenamiento, etcétera) para almacenar código de ordenador. Los datos que representan los alelas detectados mediante el método de la presente invención también pueden transmitirse por medios electrónicos, ópticos o magnéticos como una señal de datos de ordenador, en forma de un medio de transmisión a través de una red, tal como una Intranet o Internet, o combinaciones de éstas. Además, o como alternativa, el sistema puede transmitir datos por vía inalámbrica, IR, u otras alternativas de transmisión disponibles. Durante la operación, el sistema tipicamente comprende una muestra a analizar, tal como un tejido vegetal, o un material aislado a partir del tejido, tal como ADN genómico, ADN genómico amplificado, ADNc. AONc amplificado, ARN, ARN amplificado, etcétera. En el contexto de la presente invención, la frase ·sistema de detección/correlación de alelas· hace referencia a un sistema donde los datos que son ingresados en un ordenador corresponden a objetos físicos o procesos externos respecto del ordenador, por ejemplo, un alelo marcador, y un proceso que, dentro de unordenadof, causa una transformación física de las señales de ingreso para obtener señales de salida diferentes. En otras palabras, los datos de ingreso, por ejemplo, la amplificación de un alelo marcador en particular, se transforman a datos de salida, por ejemplo, la identificación de la forma alélica de un segmento de cromosoma. El proceso dentro del ordenador consiste en un conjunto de instrucciones o "programa" mediante el cual el sistema integrado reconoce las señales positivas de amptificación o hibridación, y las atribuye a muestras individuates como un genotipo. Otros programas adicionales correlacionan la identidad de las muestras individuales con valores fenotípicos o alelas marcadores, por ejemplo, métodos estadisticos. Además existen numerosos, programas de computación escritos, por ejemplo, en e/CH, Delphi y/o Java para interfaces GUI, y herramientas de productividad (por ejemplo, Microsoft Excel y/o SigmaPlot) para graficar o crear tablas de referencia de correlaciones alelo-carácter relevantes. Otras herramientas de software Utiles en el contexto de los sistemas integrados ele la invención induyen conjuntos estadíslicos, tales como SAS, Genstat, Matlab, Mathematica y SPlus, y conjuntos de modelado genético, tales como QU-GENE. Además, en los sistemas integrados de la invención también se emptean apropiadamente lenguajes de programaCión adicionales tal como Visual Basic Por ejemplo, los valores de un alelo marcador de resistencia asignado a la población de una progenie descendiente de cruzamientos entre lineas elite se registran en un medio que puede ser leido por un ordenador, con lo que se establece una base de datos donde se hacen corresponder los alelas de resistencia con identificadores únicos de miembros de la pOblación de progenie. En el contexto de la presente invención, cualquier arChivo o carpeta, ya sea hecha a medida u obtenida comercialmente (por ejemplo, en Oracle o Sybase) , que sea apropiada para grabar datos en un medio que pueda ser leído por un ordenador, es aceptable como base de datos. Los datos COn referencia a un genotipo para uno o más marcadores moleculares, por ejemplo, ASH, SSR, RFLP, RAPO, AFLP, SNP, marcadores de isozimas u otros marcadores, tal como se describe en la presente documentaCión, se registran de manera similar en una base de datos accesible para un ordenador. Opcionalmente, los datos de marcadores que se obtienen usando un sistema integrado que permite automatizar uno o mas aspectos del ensayo (O ensayos) se utilizan para determinar genotipo de los uno o más marcadores. En un sistema con esas caracteristicas, los datos de ingreso correspondientes a los genotipos de marcadores moleculares provenientes de un detector, por ejemplo, una matriz, un scanner, un CCO, u otro dispositivo de detección, pasan directamente a archivos en un medio que puede ser leido por un ordenador, que es accesible para la unidad central de proceso (CPU) . Después, el disposilivo informático ejecuta un conjunto de instrucciones del sistema (típicamente en forma de uno o más programas) que codifican las correlaciones entre resistencia y los alelos de la invención para identificar las correlaciones entre alelos marcadores y los fenotipos de caracteres predichos. Tipicamente, el sistema también incluye un dispositivo de ingreso para el usuario, tal como un teclado, un ratón, una pantalla sensible al tacto, etcétera, por ejemplo, para seleccionar arChivos, recuperar datos, revisar tablas de información sobre los marcadores, y un dispositivo de salida (por ejemplo, un monitor, una impresora) para ES 2 498 440 A2 observar o recuperar el producto del análisis estadístico. Por lo lanlo, en un aspecto, en la invención se proporciona un sistema integrado que comprende un ordenador o un medio que puede ser leido por unordenador, que comprende un conjunto de archivos ylo una base de dalos con al menos un conjunto de dalos que corresponde a los alelos marcadores de la presente invención. El sistema también induye una interfase de usuario que permite que un usuario vea de manera selectiva una o mas de dichas bases de datos. Además, puede utilizarse software de manipulación de textos convencional, lal como software de procesamiento de texto (por ejemplo, Microsoft Wordn• o Carel WordPerfect"') y software de bases de datos u hojas de cálculo convencional (por ejemplo, software de hojas de cálculo tal como Microsoft Excel"', Corel Quattro Pro"', o programas de bases de datos, tales como Microsoft Access'" o Paradox"') en combinación con una interfase de usuario (por ejemplo, una GUI en un sistema operativo convencional, tal como un sistema Windows, Macintosh, Unix o Linux) para manipular las cadenas de caracteres correspondientes a los alelos u otras caracterfsticas de la base de datos. Los sistemas opcionalmente incluyen componentes para la manipuladón de las muestras, por ejemplo, al incorporar dispositivos robóticos. Por ejemplo, un solenoide robótica de controt de liquidas para transferir soluciones (por ejemplo, extractos de células vegetales) provenientes de una fuente hacia un destino, por ejemplo, desde una placa de microtitulación hacia una matriz de sustrato, se conecta en forma operativa opcionalmente al ordenador digital (o a un ordenador adicional en el sistema integrado) . Comúnmente, una característica del sistema integrado consiste en un dispositivo de entrada para el ingreso de datos al ordenador digital, para controlar la transferencia de líquidos de alto rendimiento mediante el solenoide robótico de control de liquidas, y opcionalmente, para controlar la transferencia mediante el solenoide al soporte sólido. Muchos de dichos sistemas robóticos automatizados para manipular fluidos pueden obtenerse comercialmente. Por ejemplo, puede obtenerse una variedad de sistemas automatizados en Caliper Technologies (Hopkinton, MA) , donde se utilizan distintos sistemas Zymale, que tipicamente incluyen, por ejemplo, módulos robóticas y de manejo de fluidos. De manera similar, el robot común ORCA®, que se utiliza en una variedad de sistemas de laboratorio, por ejemplo, para la manipulación de bandejas de microtitulación, también puede obtenerse comercialmente, por ejemplo, en Beckman Coulter, Inc. (Fullerton, CA) . Como una alternativa a los robots convencionales, en la actualidad pueden obtenerse fácilmente sistemas de base microfluida para realizar el manejo y la detección de fluidos, por ejemplo, en Caliper Technologies Corp. (Hopkinton, MA) y Agilent Technologies (Pato Alto, CA) . Por lo tanto, los sistemas para el análisis de marcadores moleculares de la presente invención pueden incluir un ordenador digital con uno o más programas de software de alto rendimiento para el control de liquidos, software de análisis de imágenes para analizar los datos de las marcas de los marcadores, software de interpretación de datos, un solenoide robótico de control de liquidos para transferir las soluciones que van desde una fuente hacia un destino conectado en forma operativa al ordenador digital, un dispositivo de ingreso (por ejemplo, un teclado de ordenador) para la entrada de datos at ordenador digitat, con el fin de controlar la transferencia de liquidos de alto rendimiento mediante el solenoide robótico de control de liquidos, y opcionalmente, un scanner de imágenes para digitalizar las señales de los marcadores provenienles de las sondas marcadas hibridadas, por ejemplo, a marcadores sobre un soporte sólido conectado en forma operativa al ordenador digital. El scanner de imágenes tiene una interfase con el software de análisis de imágenes para proveer una medición, por ejemplo, de la intensidad del marcador de la sonda de ácido nucleico con el que hibridiza a una población de muestras de ácidos nucteicos dispuesta en una matriz (por ejemplo, que comprende uno o más marcadores) , donde el software de interpretación de datos sirve para interpretar la medición de la intensidad del marcador de la sonda para mostrar si (yen qué grado) , la sonda marcada hibridiza con un ácido nucleico marcador (por ejemplo, un alelo marcador amplificado) . Después, se establece la correlación entre los datos obtenidos y la identidad de la muestra para determinar la identidad de una planta con un genotipo particular para marcadores o alelos particulares, por ejemplo, para facilitar la selección asistida por marcadores de plantas de maiz con formas alélicas favorables de segmentos cromosómicos que participan en el desempeño agrícola (por ejemplo, resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) . En cualquiera de las realizaciones de la presente invención, las imágenes ópticas, por ejemplo, los patrones de hibridación que se observan (y opcionalmente, se registran) mediante una cámara u otro dispositivo de registro (por ejemplo, un totadiodo y dispOSitivo de almacenamiento de datos) se someten a una procesamiento adicional opcional, por ejemplo, digitalizando la imagen y/o almacenando y analizando la imagen en un ordenador. Hay una variedad de equipos y programas de software disponibles comercialmente para digitalizar, almacenar y analizar un video digitalizado o una imagen óptica digitalizada, por ejemplo, usando una pe (por ejemplo, una máquina con un chip Intel x86 o Pentium, o compatible, con un sistema operativo DOS~"', OS2T"' , WINDOWS''', WINDOWS NP"', WINDOWS 95"', WINDOWS 97"', WINDOWS 2000''', WINDOWS XP'" o WINDOWS VISTN"') o un ordenador basado en MACINTOSHTN, LINUX o UNIX (por ejemplo, una estación de trabajo SUN TM) . EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, pero no limitar la invención que se reivindica. Ha de Comprenderse que los ejemplos y las realizaciones que se describen en la presente documentación se proveen ES 2 498 440 A2 solamente a modo de ilustración, y aquellos expertos en la materia han de reconocer que es posible cambiar distintos reactivos o parámetros sin apartarse del esplritu de la ¡nvendón o el alcance de las reivindicaciones adjuntas. Este estudio fue completado por dos abordajes de anillisis de asociación diferentes: 1) Análisis de asociación estructurada basado en poblaciones y 2) Análisis de asociación basado en pedigrl. Mediante la identificación de estos marcadores genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia del cruzamiento oon relación a la resistencia mejorada del malz a las infecciones de MRCV. El mapeo de asociación es conocido en la técnica y se describe en diversas fuentes, por ejemplo, Jarde (2000) Genome Res. 10:1435-1444; Remington er al. (2001) 'Structure of linkage disequilibrium and fenotype associations in the maize genome", Proc Natl Acad Sci USA 98:11479-11484; Weiss y Clark (2002) Trends Genet. 18:19-24; y Shu et al. (2003) "Oetection Power of Random, Case-Control, and Case-Parent Control Oesigns for Association Tests and Genetic Mapping of Complex Traits", Proceedings of 15th Annual KSU Conference on Applied Statistics in Agriculture 15:191-204. Ejemplo 1 Análisis de mapeo de asociación Se puso en práctica una estrategia de mapeo de asociación para identificar marcadores genéticos de maíz asociados con la resistencia a la infección de MRCV, que es el agente causal del "mal de Río Cuarto". Mapeo de asociación la comprensión de la extensión y los patrones de desequilibrio de ligamiento (lO) en el genoma es un prerrequisito para desarrollar abordajes de asociación eficientes para identificar y mapear loci de caracteres cuantitativos (QTl) . El desequilibrio de ligamiento (lO) designa la asociación no azarosa de alelos en una colección de individuos. Cuando se observa lO entre alelos en loo relacionados, se lo mide como una disminución del lO a través de una región especifica de un cromosoma. La extensión del lO es un reflejo de la historia de recombinación de dicha región. la lasa promedio de dismin ución del lO en un genoma puede ayudar a predecir la cantidad y la densidad de los marcadores necesarios para efectuar un estudio de asociación en todo el genoma, y provee una estimación de la resolución que pUede esperarse. El mapeo de asociación o lO tiene por objeto identificar asociaciones significativas entre el genotipo y el fenotipo. Se lo ha explotado como una herramienta poderosa para realizar un mapeo fino en especies con cruzamientos entre individuos, tales como los seres humanos (Corder et al. (1994) ' Protective effect of apolipoprotein-E type-2 allel for late-onset Alzheimer-disease", Nat Genet 7:180-184; Hastbacka el al. (1992) "Unkage disequilibrium mapping in isolated fOunder populations: diastrophic dysplasia in Finland", Nat Genet 2:204-211 ; Kerem et al. (1989) "Identification of the cystic fibrosis gene: genetic analysis", Science 245:10731080) Y maiz (Remington et al. , (2001) "Struclure of linkage disequilibrium and fenotype associations in the maize genome", Proc Natl Acad Sci USA 98:11479-11484; Thomsberr y el al. (2001) "Dwarf8 polimorphisms associate with variaban in flowering time", Nal Gene! 28:286-289; revisado por Flint-Garcia et al. (2003) 'Struclure of linkage disequilibrium in plants", Annu Rev Planta Biol. 54:357-374) , donde la recombinación entre heterocigotos es frecuente y resulta en una caída rápida del LO. En las especies sometidas a la endocría, donde la recombinación entre los genotipos homocigotos no puede detectarse a nivel genético, la extensión del LO es mayor (es decir, se heredan juntos bloques más grandes) , y esto mejora dramáticamente la potencia de detección del mapeo de asociación (Wall y Pritchard (2003) "Haplotype blocks and linkage disequilibrium in the human genome", Nat Rev Genet4:587-597) . la historia de recombinación y mutación de una población es una función del habito de cruzamiento y del tamaño efectivo y la edad de una población. Los tamaños poblacionales grandes ofrecen mejores poSibilidades para detectar la recombinación, al tiempo que las poblaciones más viejaS generalmente se asocian con mayores niveles de polimorfismo, y ambos factores contribuyen a un decaimiento más veloz del lO. Por otro lado, las poblaciones de menor tamaño, por ejemplo, aquellas que han pasadO por un cuello de botella genético reciente, tienen a presentar una caída del LO más lenta, lo que resulta en una conservación más extensa del haplotipo (Flint-Garcia et al. (2003) "Structure of linkage disequilibrium in plants·, Annu Rev Planta Biol. 54:357-374) . las lineas de cruzamiento elite proporcionan un punto de partida valioso para los análisis de asociación. En los ani:llisis de asociación se usan calificaciones fenotípicas cuantitativas (por ejemplo, una tolerancia a enfermedades que varía entre uno y nueve para cada linea de maíz) , en contraste con la observación simple de las distribuciones de frecuencias de alelos entre tolerantes y resistentes en los tipos de análisis de distribución de alelos entre grupos. La disponibilidad de datos de desempeño fenotípico detallado, recolectados por los programas de desarrollo durante varios años y en varios ambientes para una gran cantidad de lineas elile, provee un conjunto de datos valioso para realizar los análisis de mapeo de asociación de marcadores genéticos. Esto facilita la integración sin problemas entre la investigación y la aplicación, y permite aprovechar los conjuntos ES 2 498 440 A2 de datos acumulados con el correr del tiempo. Sin embargo, la comprensiOn de la relación entre el polimorfismo y la recombinación es útil para desarrollar estrategias apropiadas para extraer eficientemente una cantidad de información maxima a partir de estos recursos. Este tipo de análisis de asociación no requiere ni genera datos de mapeo, sino que es independiente de la posición en el mapa. En este análisis se compara la calificaciÓfl fenotípica de las plantas con los genotipos en distintos loci. Subsiguientemente, puede usarse cualquier mapa de maíz apropiado (por ejemplo, un mapa compuesto) para contribuir en la observación de la distribución de los marcadores aTL identificados y/o la agrupación de marcadores OTL, usando localizaciones de mapa determinadas previamente para los marcadores. LIneas de maíz y calificación fenol1pica Las lineas de malz se sometieron a una calificación fenotípica sobre la base de su gradO de resistencia a las infecciones de MRCV (en cootraste con ta categorización simple de "tolerante" o ·susceptible") . Las variedades de plantas usadas en los análisis provinieron de diversas fuentes, incluyendo germoplasma elite, aJltivares dstribuidos en el ámbito comercial y otras variedades públicas. Las colecciones comprendieron 475 líneas de maíz. Las líneas usadas en el estudio tuvieron un amplio rango de madurez. que varió entre CRM (madurez relativa comparativa) 90 y CRM 140, lo que representa las líneas endocriadas más importantes de germoplasma Piooeer. El grado de resistencia de una planta a las infecciones de MRCV varió ampliamente, lo cual se midió usando una escala entre uno (muy susceptible) y nueve (muy resistente) . En general, se asignó una calificación de dos (2) a las cepas más susceptibles. se asignó una calificación de cuatro (4) como umbral para considerar una planta 25 susceptible o resistente (menos de 4, susceptible; 4 o más, resistente) , y se asignó una calificación de siete (5-7) a las lineas más resistentes. Se reservaron los valores de resistencia de ocho (8) y nueve (9) para niveles de resistencia muy raros. generalmente no observados en el germoplasma existente. De no haber enfermedad presente en un sembradío, no se calificó la resistencia. Sin embargo, de apreciarse señales de enfermedad en una localización especifica en el campo, se evaluaron tcxlas las lineas en dicha lOCalización. Se acumularon calificaciones para las cepas de prueba en múltiples localizaciones y años , y finalmente se le asignó un valor promedio (por ejemplo, consenso) a cada linea. Se recolectaron calificaciones de resistencia para la colección de 475 lineas endocriadas durante varias temporadas de aJltivo (se evaluaron 394 líneas endocriadas al mismo tiempo en la temporada de cultivo) . La 35 recolección de los datos típicamente se realizó en un procedimiento de calificación después del florecimiento. Para evaluar la relación entre los marcadores y la tolerancia, se usó un abordaje cuantitativo donde se determinó una calificación de resistencia para cada linea de marz y se la incorporó en el análisis estadístico de mapeo de asociación. Determinación delgenoUpo de maíz Se analizó una colección de 475 lineas de maiz realizando la secuenciación de ADN de 4000-10000 genes (loo genéticos) . Se usó la variación de los SNP para generar los haplotipos especificos de las lineas endocriadas SS 45 en cada locos. Estos datos se usaroo para identificar las asociaciones entre los alelas y la resistencia al MRCV a nivel del genoma. Métodos estadísticos Se realiza un análisis de asociación basado en la estructura usando métodos de mapeo de asociación convenciooales, doode la estructura de la población se controla usando los datos de los marcadores. Se usó el software de anátisis de agrupamientos basado en modelos Structure, desarrollado por Pritchard et al., con los datos de haplotipos para 880 lineas endocriadas de maiz elite y doscientos marcadores, para estimar los coeficientes de mezcla y asignar las lineas endocriadas a siete subpoblaciones (J.K. Pritchard, M. Stefens y P. J. Donnelly (2000) "Inference of population structure using multilocus genotype data", Genetics 155:945-959) . Esto reduce la ocurrencia de falsos positivos que pueden surgir debido al efecto de la estructura de la población sobre la estadistica de mapeo de asociación. Se usa la estadística de Kuiper, que permite determinar si dos distribuciooes son iguales. para evaluar un marcador dado para la asociación entre el haplotipo y el fenotipo en una subpoblación dada CN. H. Press, S. A. Teukolsky, W. T. Vetlerling, B. P. Flanner y , 2002; Numerical Recipes in C, segunda edición, Cambridge University Press, NY) . El mapeo de asociación basado en pedigri se realizó usando el procedimiento GPA (análisis de asociación general basado en pedigrí) , desarrollado por Shu et al. (Guoping Shu, Beiyan Zeng, y Osear Smith, 2003; Detection Power of Random, Case-Control, and Case-Parent Control Designs for Association Tests and Genetic 65 Mapping of Complex Traits. Proceedings of 15th Annual KSU Conference on Applied Statistics in Agriculture. 15: ES 2 498 440 A2 191+204) . El procedimiento GPA incluye un software de mapeo de asociación basado en la probabilidad condicional implementado en el lenguaje informático SAS, versión 9.0 (2001 , SAS Instilute, Car y , carolina del Norte) . Resultados En la Tablas 1 se detallan los marcadores de maiz que presentaron desequilibrio de ligamiento con el fenotipo del MRCV usando el método de mapeo de asociación. En la Tablas 1 también se indicala posición de cada marcador en el mapa respecto de olros marcadores conocidos, expresada en cM, donde la poSición cero es el primer marcador (más distal desde el cenlrómero) conocido al comienzo del cromosoma. Las posiciones en este mapa no son absolutas y representan una posición de mapeo estimada. En la Tablas 6 se proporcionan las secuencias consenso y de los cebadores para los marcadores MZA, y en la Tabla 7 se proveen las secuencias consenso para los marcadores SNP además de las secuencias de los cebadores directo e inverso. Las probabilidades estadlsticas de que el alelo marcador y el fenotipo de tolerancia a la enfermedad segreguen de manera independiente se reflejan en los valores de probabilidad ajustada del mapeo de asociación indicados en la Tabla 1, y constituyen una probabilidad (P) derivada del análisis de asociación entre genotipo y fenotipo. Cuanto menor es el valor de probabilidad, más significativa es la asociación entre el genotipo marcador en el locus y el fenotipo de tolerancia a la infección de MRCV El análisis de asociación no estructurada para el grupo denominado SS reveló la presencia de dos picos de probabilidad en el cromosoma 2, en la posición 65, 99, representados por los marcadores MZA2038 (p = 0, 00000266) Y MZA11826 (p = 0, 00000179) Y en la poSición 127, 18-131, 13, representados por los marcadores MZA11806 (p =0, 000002) YMZA14212 (p =0, 00000327) . El análisis no estructurado también reveló varias otras asociaciones en el genoma. La única asociación consistente que fue convalidada por abordajes independientes correspondió a la posición 65, 99 en el cromosoma 2. El análisis no estructurado permite incrementar la potencia de la evaluación de la variabilidad general de los alelos para una región dada, pero al mismo tiempo, resulta en el incremento de la cantidad de asociaciones pOSitivas falsas, ya que la estructura de la población no es corregida por este análisis. En la Figura l A se ilustra un análisis de asociación estructurada para un grupo de lineas endocriadas argentinas (o lineas endocriadas que fueron el blanco del programa de desarrollo en Argentina) donde fueron significativos varios marcadores, con un nivel de p de 0, 0005, en la región entre las posiciones 65, 99 y 85, 64, induyendo MZAl6656 (p = 0, 000194) , MZA18224 (p = 0, 000066) Y MZA5057 (p = 0, 000045) . En la Figura 18 se ilustra un análisis de asociación estructurada para un grupo SS, donde, en el brazo corto del cromosoma 2, los marcadores más asociados fueron MZA1525 en la posición 54, 62 (p = 0, 00043) Y MZA11826 en la posición 65, 99 (p = 0, 00168) . Se observaron dos asociaciones adicionales en la posicibn 91 , 19, representados por el marcador MZA13812 (p =0, 000299) , y la posición 154, 06, representados por el marcador MZA10682 (p = 0, 000024) . En la Figura 1 C se ilustra un análisis de asociación estructurada para otro grupo SS con un conjunto de datos fenotípicos diferentes. El marcador más asociado en el brazo corto del cromosoma 2 fue MZA12899 en la poSición 53, 83 (p = 0, 000298) . Hubo otros marcadores asociados en el brazo largo del cromosoma 2. donde los marcadores más asociados fueron MZA1067 (posición en el mapa: 141, 9; p = 0, 000094) Y MZA10832 (posición en el mapa: 159, 8; P = 0, 000086) . Ejemplo 2 Mapeo de intervalos de aTl y análisis de regresión de marcadores individuales Se realizó un análisis de mapeo de intervalos de QTL y un análisis de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromos6micos y marcadores genéticos de maíz (respectivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran conferirle resistencia a infecciones de MRCV a la planta de maíz. El mapeo de QTl y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loo genéticos que co-segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener lineas endocriadas e hlbridas de maíz mejoradas. Uneas de maíz Se crearon dos poblaciones de mapeo prindpales para la resistencia al MRCV a partir de los cruzamientos de las lineas endocriadas PH7WT (genotipo resistente) y PH3DT (genotipo muy susceptible) , y PH9T J (genotipo resistente) y PH890 (genotipo susceptible) . La población PH7WTxPH3DT consistió en 120 familias F5JF7, y la población PH9TJxPH890 consistió en 212 familias BC2F4/BC2F5. Calificación fenotrpica ES 2 498 440 A2 La calificación fenotipica de cada una de las líneas se basó en conjuntos de datos fenotipicos obtenidos en el carrpo durante dos o (cruzamiento PH890xPH9T J) o tres temporadas de cultivo diferentes (PH7WfxPH3DT) . Determinación del genotipo del maiz El genotipo de la progenie F5 de maiz PH7WTxPH3DT se determinó usando un total de 246 marcadores polimórficos y de buena calidad, y el genotipo de la progenie BC2F4 de PH890xPH9TJ se determinó con 167 marcadores polimórficos y de buena calidad. El primer procedimiento de determinación del genotipo induy6 marcadores SSR. Se llevó a cabo un segundo procedimiento de determinación del genotipo con un conjunto de 101 marcadores polimórficos y de buena calidad en la progenie F7 PH7WTxPH3DT. Se llevó a cabo ..., segundo procedimiento de determinación del genotipo en la población PH89OxPH9TJ usando un conjunto de marcadores en regiones genómicas especificas. Se usó Windows QTL Cartographer (la versión más actualizada de este software a la fecha del mapeo de QTl) para el análisis de regresión de marcadores y el mapeo de intervalos de QTL. las calificaciones lOO (logaritmo de la relación de probabilidades) se estimaron para todo el genoma, de acuerdo con procedimientos de mapeo de QTl convencionales. El término "relación de probabilidades" se usa para describir la probabilidad relativa de dos o mas explicaciones de las fuentes de variación en un caracter. Puede computarse la probabilidad de estas dos explicaciones diferentes (modelos) , y puede elegirse el modelo más probable. Si el modelo A es 1000 veces probable que el modelo B, luego la relación de probabilidades es de 1000:1 y el logaritmo de la relación de probabilidades es de 3. Se usaron los datos en bruto para las réplicas individuales y los anos y las calificaciones promedio en el mapeo de intervalos de QTl. El umbral l OO fue 2, 5. Se estimó un intervalo de confianza para cada QTL. luego se representaron las posiciones obtenidas como un histograma superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. Resultados Mapeo de Intervalos de QTL En este estudio se identificaron varios intervalos cromosómicos correlacionados con QTl asociados con la resistencia/susceptibilidad a las infecciones de MRCV. los QTL se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTL significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2 en ambos cruzamientos de mapeo (véanse las figuras 12-14; véase también la Tabla 13, donde se presenta un análisis de regresión de QTl marcadores para el cruzamiento PH89OxPH9TJ) . Tabla 13 '" '" tT1 Vl N ... 'D t O :> N ES 2 498 440 A2 Se identificó un segundo QTL en el grupo de ligamiento 5, en la posición 150-160 (población PH890xPH9TJ) , y olro en la posición 200-220 del grupo de ligamiento 5 (población PH7WTxPH3DT) . Se localizó un tercer aTL en PH7WTxPH3DT, en la posición 165-185 del cromosoma 2. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor, como se ilustra en las Tabla 13. Algunos de los marcadores identificados en el análisis de regresión de marcadores individuales presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. Discusión/conclusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromosómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para otros propósitos. Ejemplo 3 Convalidación de los QTL mediante selección asistida por marcadores Se realizó un mapeo de intervalos de QTL y un análisis de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromosómicos y marcadores genéticos de maíz (respectivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran conferirle resistencia a infecciones de MRCV a la planta de maiz. El mapeo de QTL y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loci genéticos que co-segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loa genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener líneas endocriadas e híbridas de maíz mejoradas. Lineas de maíz Se creó una población principal para la convalidación y el mapeo de la resistencia al MRCV a partir del cruzamiento de las líneas endocriadas PH7WT y PH3DT. Se generaron otras poblaciones para convalidar el efecto de este QTL en los distintos antecedentes. La población PH7WTxPH3DT consis1i6 en 82 familias BC3F3, generadas mediante la introducción de marcadores QTL localizados en el cromosoma 2 en PH3DT. Hubo 4 poblaciones BC1 F3 adicionales, las cuales se generaron mediante una selección asistida por marcadores, que consistieron en 24 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PH6KWxPH7WT, 12 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PH6B8xPH7'NT. 3 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PHP3P1xPH7'NT y 6 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PH6GFxPH7WT. Estas poblaciones se generaron autocruzando plantas BC3 o BC1 especificas, y obteniendo familias BC3F3 o BC1F3 con variaciones alélicas en la región del QTL. Calificación fenotípica La calificación fenotipica de BC1F3, BC3F3 y cada uno de los progenitores se basó en conjuntos de datos fenotípicos obtenidos en el campo durante una temporada de cultivo. Determinación del genotipo del malz El genotipo de la progenie BC1F3 de malz, originada en distintos cruzamientos, y el genotipo de la progenie BC3F3, originada en el cruzamiento PH7WTxPH3DT, se determinó usando SNP polimórficos en la región del QTL. BC3F3 se sometió a una depuración de los antecedentes genéticos en la etapa BC3, especialmente en el QTL del cromosoma 5. Los marcadores incluyeron marcadores SNP. Se usó Windows QTl Cartographer (la versión mas actualizada de este software a la fecha del mapeo de QTL) para el análisis de regresión de marcadores y el mapeo de intervalos de QTL. Las calificaciones LOO (logaritmo de la relación de probabilidades) se estimaron para todo el genoma, de acuerdo con procedimientos de mapeo de QTL convencionales. Se usaron los datos en bruto para las réplicas individuales y las calificaciones promedio en el mapeo de intervalos de QTL. El umbral l OO fue 2, 5. Se estimó un intervalo de confianza para cada QTL. Luego se representaron las posiciones obtenidas como un histograma superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. ES 2 498 440 A2 Como estas poblaciones se generaron con una selección asistida por marcadores (eventos de recombinación no azarosos) , se consideró que el análisis de regresión de marcadores seria tan poderoso como el análisis de mapeo de intervalos. Resultados Mapeo de Inlervalos de QTL En este estudio se identificó un solo intervalo cromosómico que estuvo correlacionado con QTL asociados con la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV. Los QTL se identificaron usando los dalos de campo. Se localizó un QTl significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2 en la población de convalidación principal BC3F3. Los marcadores principales en este QTL en la población de convalidación principal se verificaron en las otras progenies BC1 F3, lo que permitió confirmar el efecto de este QTl sobre la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor, como se ilustra en la Tabla 14. Algunos de los marcadores identificados en el análisis de regresión de marcadores individuales presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron idenlificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. El mapeo de intervalos puede observarse en la Figura 2, y el análisis de regresión de marcadores del cruzamiento PH30TxPH7WT puede observarse en la Tabla 14. Vale destacar que la replica Nº 3 fue afectada por el estrés provocado por los herbicidas. MRGVSC = calificación fenot!pica del MRCV. Inc. Sin!. Sev. = frecuencia de plantas con síntomas severos en cada unidad experimental 002 • 11 "<;'11' O o 1 ... .. , .. r= 44.21 ¡.. ~36 -1-0 44, r- 6, 51 ¡-;; , 49 , 24 tT1 VJ N ... 'D t o :> N '" '" -, -F '. 1 0, 07 0, 02 1" º r-= ... ~, 21 3, 17 ... . ~ F. 10, 2B I IMRCVSC ¡Rép. 3 . F (1 , n-2} ¡pr{F) "J>' ES 2 498 440 A2 El efecto de la variación alélica de MRCV1 sobre diversos antecedentes se evaluó con los datos fenotipicos de las progenies BC1F3 con variaciones alélicas en la región MRCV1. El alelo resistente a MRCV1 presentó un efecto positivo en otros 4 antecedentes genéticos (líneas endocriadas PH6GF, PHP3Pl, PH6B8 Y PH6KW) . En la Tabla 15 a continuación se detal1a la calificación fenotípica principal para la progenie BC1F3 con variaciones alélicas en la región MRCV1 . Tabla 15 lineas Posición del marcador: 65.99 endocriadas PH6GF I PHP3Pl PH6B8 PH6KW Calificación de la línea endocriadas 2, 5 3 450Alelo susce tibie BC1F3 {AA} 500 4, 10 4, 19 Alelo heterod oto Be1 F3 AB . 4, 26 3, 53 5, 17 Alelo resistente BC1F3 (B8) 6, 17 5, 47 5, 00 Efecto del QTL 1, 11 I 2, 07 I 0, 97 0, 81 Discusión/conclusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromosómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y tambien para otros propósitos. Ejemplo 4 Convalidación de los QTL en poblaciones de cruumiento OH Se realizó un análisis de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromosOmicos y marcadores genéticos de maíz (respectivamente) Que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran conferirle resistencia a infecciones de MRCV a la planta de maíz. El mapeo de aTl y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loci genéticos que ca-segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener líneas endocriadas e híbridas de maíz mejoradas. líneas de maiz las poblaciones para la selección de pedigri mejorada por marcadores (MEPS) , de acuerdo con un esquema de cruzamiento de poblaciones que permitiría obtener resistencia al MRCV, se crearon a partir de distintos cruzamientos de lineas endocriadas. los cruzamientos incluyeron los siguientes: a) Cruzamientos con MRCV1 fijo: PHKEFxPHBNA, PHKEFxPHS2G, PHKFDxPHS3J, PHKFAxPHBNA, PHKFAxPHKEF, PHS2YxPHKEF, y b) Cruzamientos con MRCV1 segregante: PH30TxPHKEF, PHKEFxPH9PR, PHKEFxPHKOK, PHKONxPHKFO, PHKONxPHS3J, PHKFOxPHCOG, PHKOKxPHKFA, PHKONxPH9PH. Tabla 16 Estas poblaCiones se generaron con el proceso de tos haploides dobles. La cantidad de individuos 40 caracterizados por resistencia al MRCV se detalla en la Tabla 16. Se usaron los datos de huellas digitales ES 2 498 440 A2 genéticas en la región del QTL principal y la información de identidad por descendencia para definir las poblaciones con QTL segreganles y QTL fijos. CalificaciÓn fenotípica La calificación fenotipica de cada una de las poblaciones OH MEPS se basó en conjuntos de datos fenotipicos obtenidos en el campo durante una temporada de cultivo. peterminaciÓn del genotipo del maíz El genotipo de la progenie OH de maíz se detenninó usando un conjunto de 756 SNP distribuidos en el genoma del maíz. Después, se representaron las posiciones obtenidas como un histograma superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. Resultados Análisis de QTL marcadores En este estudio se identificó un solo intervalo cromosómico de importancia correlacionado con QTL asociados con la resistenciafsusceptibilidad a infecciones de MRCV cuando se seleccionaron "a priori" poblaciones de cruzamientos SS resistente x susceptible, y segregantes para el QTL de mayor importancia para el MRCV en el cromosoma 2. Los QTL se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTL significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2. Los cruzamientos genéticos entre las lineas endocriadas que alojaban el alelo positivo del QTL de mayor importancia en el cromosoma 2 (QTL fijado por los progenitores) resultaron en una mayoria de progenies con una calificación de MRCV de campo de 4 o más. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor, como se ilustra en las Tablas 1 y 2. Algunos de los marcadores identificados en el análisis de regresión de marcadores individuales presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. En un grupo de lineas endocriadas SS, la asociación principal se localizó en el marcador MZA10538 (posición 54, 5) . En un grupo de lineas endocriadas NSS, se localizó una asociación de importancia en la posición 72 cM. Discusión/conclusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromosómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son utiles en la MAS, y también para otros propósitos. Ejemplo 5 Caracterización de las lineas endocriadas principales Se caracterizó un conjunto de materiales genéticos argentinos en función de su fenotipo y su genética para confirmar loci marcadores genétioos de maiz asociados con la resistencia al MRCV. Mediante la identificación de estos loci genétioos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener lineas endocriadas e híbridas de maiz mejoradas. Lineas de maíz y calificación de la resistencia Las variedades de plantas usadas en el análisis provinieron de diversas fuentes, incluyendo germoplasma elite, cultivares disponibles comercialmente y otras lineas publicas que representaban un amplio rango de germoplasma relacionado con el programa de desarrollo argentino, y se incluyeron las calificaciones principales de resistencia al MRCV. Se prepararon grupos de lineas de maiz para realizar análisis basados en sus respuestas fenotípicas contra infecciones de MRCV, donde las plantas se calificaron como variedades muy susceptibles o muy resistentes. Las clasificaciones de resistencia y susceptibilidad se basaron solamente en observaciones de incidencia de enfermedades fortuitas de ocurrencia natural, en pruebas de campo que se prolongaron durante varios años. El grado de resistencia de la planta a infecciones de MRCV varió ampliamente, y se midió usando una escala entre uno (muy susceptible) y nueve (muy tolerante) . En general, se asignó una calificación de dos (2) a las cepas más ES 2 498 440 A2 susceptibles, se asign6 una calificación de cuatro (4) como umbral para considerar una planta susceptible o resistente (menos de 4, susceptible; 4 o más, resistente) , y se asignó una calificación de siete (5-7) a las lineas más resistentes. Se reservaron los valores de resistencia de ocho (8) y nueve (9) para niveles de resistencia muy raros, generalmente no observados en el germoplasma existente. De no haber enfermedad presente en un sembradío, no se calificó la resistencia. Sin embargo, de apreciarse señales de enfermedad en una localización específica en el campo, se evaluaron todas las líneas en dicha localización. Se acumularon calificaciones para las cepas de prueba en múltiples localizaciones y años, y finalmente se le asignó un valor promedio (por ejemplo, consenso) a cada linea. La recolección de los datos típicamente se realizó en un periodo de calificación. Dicho período de calificación se estableció después del florecimiento. Para evaluar la relación entre los marcadores y la resistencia, se usó un abordaje de regresión simple por comparación. Se verificó el origen de los alelos con un abordaje de identidad por descendencia. Usando este abordaje, se usaron las lineas de maiz consideradas como representativas de las clases resistencia o susceptibles para evaluar la asociación. Se construyó un grupo de lineas resistentes, donde las lineas endocriadas con una calificación de resistencia de 4 o más se consideraron "resistentes". De manera similar, las líneas de maiz con calificaciones de tres o menos se consideraron en conjunto como susceptibles. Solamente se usaron las lineas que pudieron asignarse en forma confiable a cualquiera de los dos grupos. Una vez que una línea se incluye en un grupo "resistente" o "susceptible", se la trata como igual en dicho grupo. También se usaron las calificaciones cuantitativas reales para la prueba de asociación. Además de esta prueba, se usó la información de identidad por descendencia para confirmar el origen del alelo resistente con los marcadores más asociados. En el estudio se identificaron 85 lineas de maíz que fueron consideradas resístentes en el espectro fenotípico; estas plantas formaron el grupo "resistente". También se identificaron 35 lineas de ma iz que fueron consideradas susceptibles al MRCV; estas cepas formaron el grupo "susceptible". Determinación del genotipo de maiz Se determinó el genotipo de cada una de las líneas tolerantes y susceptibles de maíz con un conjunto de 63 marcadores SNP que abarcaron la región del QTL en el cromosoma 2, usando procedimientos bien conocidos en la técnica. El protocolo de determinación del genotipo consistió en recolectar tejido foliar joven y aislar ADN genómico a partir de tejido agrupado de cada linea endocriada. El AON genómico de maiz se extrajo con el método CTAB, como se describe en Maroof et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 81 :8014-8018. Después, el AON genómico aislado se usó en reacciones de PCR con cebadores de amplificación especificos para una gran cantídad de marcadores que abarcaron la región del QTL. Se determinó el genotipo de marcadores SNP usando un protocolo ASH. La lógica subyacente es que los marcadores con distribuciones de alelos significativamente diferentes entre los grupos resistente y susceptible (es decir, distribuciones no azarosas) podrian estar asociados con el carácter y podrian usarse para separarlOS para realizar una selección asistida por marcadores de lineas de maíz con resistencia o susceptibilidad al MRCV previamente no caracterizadas o caracterizadas. En el presente análisis se examinó un locus marcador por vez, y se determinó si la distribución de alelas dentro del grupo resistente era significativamente diferente de la distribución de alelos dentro del grupo susceptible. En este análisis se compara la calificación fenolipica de las plantas con los genotipos en los loci diana. Resultados La distribución no azarosa de los alelas entre los grupos de plantas resistentes y susceptibles en los diversos loci marcadores en la Tabla 1 (en la columna encabezada por "Método de identificación", el método indica "identidad por descendencia") es una evidencia clara de que los QTL que influyen en la resistencia al MRCV están ligados a estos loci marcadores. Considerando que la mayoría de las lineas endocriadas en este conjunto corresponden a un programa de desarrollo específico (programa de desarrollo argentino) , ha de esperarse que los inventores descubran desequilibrio de ligamiento con otros marcadores en las regiones circundantes del gen. Los marcadores más asociados correspondieron a los marcadores previamente considerados preferidos. Como es conocido en la técnica, el nivel de asociación de los marcadores diana con un carácter de interés será determinado a partir del nivel de desequilibrio de ligamiento en la región diana en dicho conjunto de materiales genéticos. En la Tabla 17 a continuación se detalla el nivel de asociación en la región diana entre los datos genotípicos de los marcadores SNP y la respuesta al MRCV. Tabla 17 Fr. !pos. !Marcador !F (1, n-2) !pr (F) !Car. MRCV ES 2 498 440 A2 64, 05 MZA625-29-A 1, 612 0, 322 95, 712 O '*u 64, 05 MZA625-3D-A 1, 602 -0, 326 92 , 373 O *"*" 65, 99 MZA16658-8-A 1, 613 0, 255 4, 107 O *"*" 65, 99 MZA16656-19-A 1, 571 0, 344 105, 781 O .... 65, 99 MZA 15490-137-A 1, 724 -0, 189 23 , 834 O *"u 65, 99 MZA15490-138-A 1, 731 -0, 179 20 , 667 O .... 65, 99 MZA15490-801-A 1, 727 -0, 172 19, 222 O *"u 65, 99 MZA2038-71-A 1, 702 0, 045 1, 095 0, 298 65, 99 MZA2038-76-A 1, 691 0, 063 1, 987 0, 181 65, 99 MZA11826-801-A 1, 673 0, 098 , 614 0, 034 · 65, 99 MZA11826-27-A 1, 681 0, 092 , 315 0, 04 · 65, 99 MZA 11826-803-A 1, 673 -0, 113 6, 286 0, 014 · 65, 44 MZA9105-B-A 1, 576 -0, 226 22, 461 O .... 65, 44 MZA9105-6-A 1, 681 -0, 081 3, 452 0, 066 Con el fin de evaluar el efecto de la variación alélica en este QTl a nivel de los híbridos, se caracterizó un conjunto de 371 híbridos (antecedentes genéticos heterogéneos) de acuerdo con la presencia de uno (heterocigotos para el QTL) o dos alelos resistentes (homocigotos para el QTL) en las lineas progenitoras. Se observó un efecto positivo y aditivo del alelo resistente en el QTL de importancia en las combinaciones híbridas; no se observaron efectos matemos. En la Tabla 18 a continuación se detalla el desempeño en el campo de híbridos con distintos genotipos en el QTL de mayor importancia. Discusión Existe una cantidad de maneras para usar la información proporcionada en este análisis para desarrollar variedades de maiz mejorado. Una aplicación consiste en usar los marcadores asociados (o más basados en un 15 valor de corte de probabilidad más alto) como cand idatos para mapear QTL en poblaciones especificas segregantes para plantas con tolerancia a la infección de MRCV. En esta aplicación, se efectúa un mapeo de QTL convencional en una población segregante, pero con atención especial en los marcadores asociados con la tolerancia a la infección de MRCV, en lugar de usar marcadores para el genoma completo. Esto hace que los esfuerzos de mapeo sean más económ icos al reducir dramáticamente los recursos de laboratorio empleados en 20 el proyecto. Por ejemplo, en lugar de analizar poblaciones segregantes con una gran cantidad de marcadores que abarcan el genoma completo, se realiza la búsqueda solamente con aquellos pocos marcadores que satisfacen un determinado corte estadístico en el estudio de asociación de alelos. Esto no solamente reduce el costo del mapeo, sino que también elimina las pistas falsas que sin duda aparecen con un gran conjunto de marcadores. En cualquier cruzamiento, es probable que solamente un pequeño subconjunto de los marcadores 25 asociados esté de hecho correlacionado con la tolerancia a infecciones de MRCV. Una vez que se identifican los pocos marcadores relevantes en cualquier progenitor tolerante, pueden centrarse los esfuerzos de la futura selección asistida por marcadores (MAS) solamente en aquellos marcadores que son importantes para esta fuente de tolerancia. Al preseleccionar las líneas que tienen el alelo asociado con la con tolerancia por MAS, pueden eliminarse las lineas susceptibles indeseable, y pueden concentrarse los recursos de las pruebas de campo costosas en las líneas que presentan una probabilidad elevada de ser resistentes a la infección de MRCV. Ejemplo 6 Evaluación de aTl en poblaciones de cruzamiento F3 Las asociaciones de marcadores se usan ampliamente en métodos para identificar loci genéticos que co segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener líneas endocriadas e hibridas de maiz mejoradas. ES 2 498 440 A2 Lineas de maíz Se usó el esquema de cruzamiento tradicional, basado en el método en el método de desarrollo de pedigrí convencional, para realizar los cruzamientos F1 y obtener varias generaciones de autocruzamiento (F2, F3, F4, etcétera) _Con el objetivo de comprobar la importancia de los alelos positivos y negativos en el QTl de mayor importancia para la resistencia al MRCV en un conjunto específico de materiales de desarrollo argentinos, se siguieron los sigu ientes pasos: al Selección de los progenitores resistentes cuya resistencia habría de esperarse sobre la base del MRCV1 de mayor importancia; b) Selección de un total de 2372 familias F3, originadas en múltiples cruzamientos de desarrollo; el Creación de dos grupos de familias F3, un primer grupo basado en cruzamientos entre progenitores sin los alelos positivos del QTL de importancia, y un segundo grupo donde ambos progenitores contienen el alelo positivo del QTL de importancia. Se usaron los datos de huellas digitales genéticas en la región del QTL principal y la información de identidad por descendencia para definir las poblaciones con QTL segregantes y QTL fijos (positivas/negativas) . MZA 16656 y/o los marcadores circundantes fueron los marcadores clave para definir la presencia del alelo positivo para MRCV1 . La cantidad total de individuos localizados en estos grupos fue 2372. Se usaron los datos de huellas digitales genéticas en la región del QTL principal y la información de identidad por descendencia para definir las poblaciones con QTL segregantes y QTL fijos . de cada una de las poblaciones F3 se basó en conjuntos de datos fenotípicos recolectados en el campo en una temporada de cultivo. Determinación del genotipo del maiz No se determinó el genotipo de familias F3 individuales. El genotipo del QTL más importante para cada población F3 individual se estimó de acuerdo con los alelas especificas en ambos progenitores. Si ambos progenitores en una población F3 específica contenían el alelo positivo en MRCV1, se consideró que la totalidad de la progenie de dicho cruzamiento contenia el alelo positivo. Si ambos progenitores en una población F3 especifica contenian el alelo negativo en MRCV1, se consideró que la totalidad de la progenie de dicho cruzamiento contenía el alelo negativo. Se usó software convencional para realizar el análisis ANOVA de los marcadores. Resultados Análisis de QTL marcadores Con este estudio pudo apoyarse la conclusión de que se obtiene un intervalo Cfomosómico de importancia correlacionado con QTL asociados con la resistenciafsusceptibilidad a infecciones de MRCV cuando se seleccionan ~a priori" poblaciones obtenidas de cruzamientos fijos para el QTL de mayor importancia para MRCV en el cromosoma 2. ANOVA de un solo marcador Usando un ANQVA para un marcador, se observó una cantidad de marcadores asociados con el fenotipo de tolerancia con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor. Algunos de los marcadores identificados en el análisis ANOVA presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. Discusiónlconclusiones: En este estudio se han identificado intervalos Cfomosómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para otros propósitos. En este ejemplo, los inventores evaluaron el efecto sobre la resistencia al MRCV de la variación alélica en MRCV1, y se observó una asociación clara entre esta variación alélica y el fenotipo esperado sobre una gran cantidad de progenies F3. En la Tabla 19 a continuación se presenta la prueba de F del modelo, donde la fuente fue el QTL y se consideraron dos niveles de dicha fuente: Nivel AA: poblaciones F3 con alelos susceptibles fijos en la región dianadiana (posición 65, 99 o inferidos por los marcadores circundantes) y nivel BB: poblaciones F3 con alelos resistentes fijos en la región dianadiana (posición 65, 99 o inferidos por los marcadores circundantes) . ES 2 498 440 A2 Tabla 19 s = 1, 094: R-Sq = 36, 87%; R-8q (adj) = 36, 84% Referencias: OF. Grado de libertado. SS. Suma de cuadrados. MS. Cuadrados medios. F. Valor de F. 10 P. Valor de probabilidad. En la Tabla 20 a continuación se presenta una prueba convencional, donde el nivel de AA y el nivel de BB representan la variación alélica en el QTL diana y de acuerdo con el modelo induido en la Tabla 19. El promedio fenotípico para el nivel de AA fue 3, 42 (categoría susceptible al MRCV) , y el promedio fenotípico para el nivel de SB fue 5, 138 (categoria resistente al MRCV) . Desviación estándar agrupada = 1, 094 20 Referencias: N: Cantidad de familias F3. Promedio: Promedio fenotípico de cada nivel. Desv. Est.: Desviación estándar. Ejemplo 7 Mapeo de genes de alta resolución y líneas casi isogénicas El mapeo de genes de aHa resolución basado en la evaluación de la progenie de plantas resistentes homocigotas se efectuó mediante la localización de los genes de resistencia al MRCV con atta resolución. Se realizó un mapeo de intervalos de QTl y un análisis de regreSión de marcadores individuales para identificar intervalos qomosómicos y marcadores genéticos de maiz (respectivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran mejorar la resistencia a infecciones de MRCV. El mapeo de QTl y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loci genéticos que co-segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener lineas endocriadas e hlbridas de maiz mejoradas. Uneas de malz Se creó una población principal para el mapeo de genes de resistencia al MRCV de alta resolución a partir del cruzamiento de las lineas endocriadas PH7WT y PH3DT. Se creó otra población para el mapeo fino en una fuente independiente a partir del cruzamiento de las lineas endocriadas PH9TJ y PH890. la población PH7WTxPH3DT consistió en 256 familias BCSF3, generadas mediante la autocruza y la fijación de plantas recombinantes BCS seleccionadas a partir de un total de 3000 plantas BCS, las cuales alojaban un fragmento 45 heterocigoto en la región entre 50 y 80 cM en el cromosoma 2. Esta estrategia permitió abarcar recombinantes de la región del QTl completa (Tablas 7 y 8, Y Figura 4A y Figura 48) . La población PH9TJxPH890 consistió en 245 familias BC3F3, generadas a) mediante el cruzamiento de plantas BC2F4 seleccionadas, homocigolas para el aTL de mayor importancia en los cromosomas 2 y 5, con PH890 (progenitor susceptible) ; b) produciendo dos generaciones de autocruza para lograr la fijación en las familias BC3F3. ES 2 498 440 A2 En la Tabla 21 se indica la cantidad de plantas recombinanles BC5F3 generadas a partir del cruzamiento PH30TxPH7WT. También se incluye ellamaño en Kb esperado para cada intervalo marcador. En la Tabla 22 se indica la cantidad de plantas recombinanles BC5F3 generadas a partir del cruzamiento PH3DTxPH7WT. Se incluye una comparación con la primera estimación de contenido del gen. Tabla 21 Marcador MZA625 MZAl6656 MZAl5451 MZAl5490 MZA2038 MZA11826 MZA9105-8-A MZA18224-801-A Mapa genético Pioneer* 64, 05 6599 65, 99 65, 99 6599 65, 99 6544 88, 80 Bandas de huellas dicitales cenéticas·· 152 --O 33 88 400 Tamal'lo estimado de cada inteNato (datos de secuenci~i-Mas de 100 Kb 10 Kb Menos de 100 Kb Menos de 20 Kb Más de 20 Kb Más de 50 Kb Más de 165 Kb Recombinantes lotates 76 -3 1 O O 51 BC5F3 59 -2 1 O O 44 - Marcadores ordenados de acuerdo con la secuenclaclón, la fíSica y la recomblnaClón. El mapa genético Ploneer solamente se Incluye a modo de referenCia. Cantidad de bandas de huellas digitales genéticas entre pares de marcadores. 5 8i , ....."" <-... IV ... 'C> ~ 00 t o 1:; PHO Cromosoma 2 Pos. En el mapa PHO 64, 05 UC7 pca ampliconesversus Myriad MZA625 Orden del locos loc_029 Identificador genético de trabajo de maíz AC191302_5part Resumen de la anotación Factor de transcripción Recombinantes 59 loc_028 AC191302_3 Proteína de unión a putrescina; proteína M otética loc_027 pc0600856 l-ascorbato ~rox¡dasa orobable loc_025 pco530474 Protelna de desarrollo de Rlástidos· DAG loc_024 loc 023 pco593067 AC191302 6 Proteína hipotética; Subunidad de la ATP sintelasa vacuolar? Proteina hipotética loc 022 loc 021 loc_016 Inferido en arroz y. sor O co641713 pc0591841 Proteína hipotética Protelna hi otética Factor regulador del crecimiento loc_Ol5 Genomic_PC0622600_PC0666161 Receptor unido a proteína G 89C " '" tT1 [Jl N ... '. () ... ... O ;J> N ES 2 498 440 A2 Se generaron líneas casi isogénicas (NIL) BC5F3 que presentaban variaciones alélicas en la región de los marcadores preferidos (MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105) por medio de una selección asistida por marcadores a partir del cruzamiento PH7WTxPH3DT. Las Nll se generaron introduciendo la región del OTL de PH7WT en PH3DT, depurando el antecedente genético y seleccionando recombinantes especificas en la región de los marcadores preferidos. Mediante la autocruza de plantas BC5F2 individuales que contenían un fragmento heterocigota en la región de los marcadores preferidos. se obtuvieron líneas casi isogenicas negativas y positivas, y el QTL se trató como un solo factor mendeliano. Cal"ficación fenotípica La calificación fenotípica de cada una de las familias BC5F3, provenientes del cruzamiento PH7WTxPH3DT, cada una de las 245 familias BC3F3, provenientes del cruzamiento PH9T JxPH890, y cada uno de los progenitores, se basó en conjuntos de datos fenotrpicos recolectados en el campo (experimentos de campo con infecciones naturales, provincia de Córdoba, Argentina) en una temporada de cultivo. Ademas de la calificación fenotípica, las isolíneas específicas en la región de los marcadores preferidos se caracterizaron con una prueba de ELlSA para determinar la presencia del virus en la provincia de Buenos Aires, Argentina Determinación del genotipo del maiz El genotipo de la progenie BC5F3, proveniente del cruzamiento PH7WTxPH3DT, y BC3F3, proveniente del cruzamiento PH9T JxPH890, usando SNP polimórficos en la región del QTl en el cromosoma 2 (vease el Ejemplo 2) . Además, se disei'laron dos marcadores CAPS y se los usó para determinar el genotipo de tas progenies BC5F3; estos dos marcadores CAPS se colocaron en el intervalo entre MZA9105 y MZA18224. En el caso del cruzamiento PH9T JxPH890, se colocaron marcadores adicionales en el QTl del cromosoma 5. las familias BC5F3, obtenidas a partir del cruzamiento PH7WTxPH3DT, se sometieron a una depuración de los antecedentes en la etapa BC3, especialmente en el QTl del cromosoma 5. las familias BC5F3, obtenidas a partir del cruzamiento PH9T JxPH890, se sometieron a una depuración de los antecedentes en la etapa BC2. Se usó Windows QTl Cartographer (la versión mas actualizada de este software a la fecha del mapeo de QTl) para el análisis de regresión de marcadores y el mapeo de intervalos de QTl. las calificaciones lOO (logaritmo de la relación de probabilidades) se estimaron para todo el genoma, de acuerdo con procedimientos de mapeo de QTl convencionales. Se usaron las calificaciones promedio en el mapeo de intervalos de QTl. El umbral lOO fue 2, 5. Se estimó un intervalo de confianza para cada QTl. luego se representaron las posiciones obtenidas como un histograma superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. Como estas poblaciones se generaron con una selección asistida por marcadores (eventos de recombinación no azarosos) , se consideró que el anátisis de regresión de marcadores seria tan poderoso como el análisis de mapeo de intervalos. Resultados Mapeo de InteNslos de QTL En este estudio se identificó un solo intervalo cromosómico que estuvo correlacionado con QTl asociados con la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV. Los QTl se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTl significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2, en la posición de los "marcadores preferidos' en las pOblaciones de mapeo de alta resolución obtenidas a partir de los cruzamientos PH7WTxPH3DT y PH9T JxPH890. El QTl adicional en el cromosoma 5, proveniente del cruzamiento PH9T JxPH890, no fue significativo en este análisis. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor, como se ilustra en las Tablas 23 y 24. los marcadores identificados en el análisis de regresión de marcadores presentan una posición genetica de alta resoludón para el QTl diana, la cual coincide con la posición de los marcadores preferidos. En la Tabla 23 puede observarse el análisis de regresión de marcadores (MRCVSC = calificación fenotipica del MRCV) , y en la Figura 5 puede observarse el mapeo de intervalos para el cruzamiento PH7WTxPH30T. En la Tabla 24 puede observarse el analisis de regresión de QTl marcadores para el cruzamiento PH9T JxPH890, con QTl especifICaS en los cromosomas 2 y 5 (MRCVSC = calificación fenotlpica del MRCV) , y en la Figura 6 puede observarse el mapeo ES 2 498 440 A2 de intervalos para el eRIzamiento PH7WTxPH3DT. Tabla 23 Uneas casi isoqénicas Las líneas casi isogénicas que presentaban variaciones alélicas en la región de los marcadores preferidos presentaron una diferencia significativa en su respuesta a la enfermedad en la provincia de Córdoba (Figura 7A y Figura 7B) . En la Tabla 25 se detalla el genotipo de los SNP en la región de 10$ marcadores preferidos para las líneas casi isogénicas (isolínea negativa = haplotipo susceptible; ¡solinea positiva =' haplotipo resistente) ; el fragmento introducido se representa con los SNP polimórficos de MZA 16656-19-A a MZA9105-8-A, al tiempo que los marcadores monomórficos circundantes MZA625-30-A y MZA18224-801-A representan el haplotipo susceptible en ambas líneas casi isogénicas. En la prueba de ELlSA para determinar la presencia de virus (muestras de la provincia de Buenos Aires) se observó 0% de plantas positivas para el virus en las isol1neas que contenfan el alelo resistente, mientras que 38% de plantas fueron positivas para el virus en las isolíneas que contenían el alelo de susceptibilidad. Tabla 25 Isolinea MZA6253O-A MZA1665619-A MZA15490801-A MZA15490137-A MZA203871-A MZA203876-A MZA11826-801A MZA11826803-A MZA91056-A MZA18224801-A 64 05 6599 6599 6599 6599 6599 6599 6599 6544 688 Ne ativa e A e A T e G T G A Positiva e G G e A T A e A A " '" m IV ... '" t o ~ ES 2 498 440 A2 Nota: La prueba de ELlSA no se realizó con materiales sembrados en la provincia de Córdoba (la presión de la enfermedad fue mayor que en la provincia de Buenos Aires) . Sin embargo, la presencia de enaciones (un síntoma especifico de los Fijivirus) en los materiales resistentes y susceptibles en la provincia de Córdoba indica la presencia del virus en las plantas Discusión/condusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromosómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para airas propósitos. la localización de los genes con alta resolución facilita la clonación del QTL diana. Ejemplo 8 Localización de genes, secuenciación y genes candidatos La información de secuenciación, genética y fisica de la región de los marcadores preferidos se integró para caracterizar la región diana. Se usó información de abordajes independientes (datos de recombinación, análisis de asociación y fragmentos conservativOS) para identificar un intervalo específico para generar datos de secuenciadOn adicionales. Líneas de maíz y calificación fenotípica A las lineas de maíz se les asignó una calificación fenotípica sobre la base de su grado de resistencia a las infecciones de MRCV (en contraste con la categorización simple de "tolerante" o ususceptible") . Las variedades de plantas usadas en los análisis provinieron de diversas fuentes, inCluyendo germoplasma elite, cultivares distribuidos en el ámbito comercial y otras variedades públicas. Las colecciones comprendieron 883 lineas de maiz. Las líneas usadas en el estudio tuvieron un amplio rango de madurez, que varió entre CRM (madurez relativa comparativa) 90 y CRM 140, lo que representa las lineas endocriadas más importantes de germoplasma Pioneer. El grado de resistencia de una planta a las infecciones de MRCV varió ampliamente, lo cual se midió usando una escala entre uno (muy susceptible) y nueve (muy resistente) . En general, se asignó una calificación de dos (2) a las cepas más susceptibles, se asignó una calificación de cuatro (4) como umbral para considerar una planta susceptible o resistente (menos de 4, susceptible: 4 o más, resistente) , y se asignó una calificación de siete (5-7) a las lineas más resistentes. Se reservaron los valores de resistencia de ocho (8) y nueve (9) para niveles de resistencia muy raros, generalmente no observados en el germoplasma existente. De no haber enfermedad presente en un sembradío, no se calificó la resistencia. Sin embargo, de apreciarse señales de enfermedad en una localización especifica en el campo, se evaluaron todas las lineas en dicha localización. Se acumularon calificaciones para las cepas de prueba en múltiples localizaciones y años, y finalmente se le asignó un valor promedio (por ejemplo, consenso) a cada linea. Se recolectaron calificaciones de resistencia para la colección de 883 colecciones de líneas endocriadas durante varias temporadas de cultivo (se evaluaron 394 lineas endocriadas al mismo tiempo en la temporada de cultivo) . La recolección de los datos típicamente se realizó en un procedímiento de calificación después del florecimiento. Determinación del genotipo de maíz Se analizó una colección de 883 líneas de malz realizando la secuenciación de AON de 4000-10000 genes (Ioci genéticos) . Se usó la variación de los SNP para generar los haplotipos especificos de las lineas endocriadas SS en cada lacus. Estos datos se usaron para identificar las asociaciones entre los alelas y la resistencia al MRCV a nivel del genoma. Pedigrí del maíz -fuentes de resistencia Se usó una base de datos de pedigrí Ploneer para comprender las relaciones entre las lineas endocriadas y los haplotipos. Esta base de datos contiene la relación de pedigri entre las lineas endocriadas desde 1919. En el caso de las lineas endocriadas públicas, se incorporó informaciOn pública sobre el pedigrí y los origenes para comprender la relación entre las lineas endocriadas y el haplotipo. Se creó una lista de fundadores dave, los cuales presentaron fuentes de resistencia y susceptibilidad al MRCV en germoplasma Pioneer (induyendo lineas públicas) usando datos de pedigrí, fenotípicos y genoUpicos. La mayoría de las lineas endocnadas susceptibles se remontan a un conjunto especíifico de haplotipos de germoplasma de los EEUU (lineas públicas tales como 837, 873, 814, OH07, C103, y lineas endocriadas Pioneer 165 y 938) ; una excepción es PH26N. que proviene de germoplasma tropical. ES 2 498 440 A2 Localización de los genes El intervalo entre los marcadores MZA15490 y MZA2038 (Figura 8) se consideró como región candidata para estudiar la diversidad alélica en la región del gen de resistencia. Esta región se seleccionó usando información 5 proveniente de las siguientes fuentes: al Recombinanles. la localización de las recombinantes se indicó en el Ejemplo 7. Los datos fenolipicos de dos recombinanles en el intervalo entre MZA16656 Y MZA15490, y una recombinanle en el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038 se usó para delimitar el lado izquierdo de la posición del gen. En la población de recombinación no hubo recombinantes disponibles en la región MZA2038MZA11826-MZA91Q5. b) Se usó información genotipica y fenotípica de líneas endocriadas SS de germoplasma Pioneer para detectar un fragmento conservativo para las líneas endocriadas resistentes/susceptibles. La detección de un fragmento conservativo se realizó dentro de pedigríes específicos y para varios fundadores independientes cuando hubo suficientes SNP conservativos disponibles para dichos fundadores independientes. Diversidad alélica natural y relación de los fundadores Se seleccionó el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038 para el análisis de diversidad alélica debido a la probabilidad elevada de que alojara un gen candidato, o debido al desequilibrio de ligamiento elevado con un gen candidato. Como la secuencia completa en el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038 se halla disponible para la línea 873 (873 = 274) , se usó un grupo de 13 fragmentos de secuencia pequei'ios como diana para la secuenciación en un conjunto de líneas de prueba. Las líneas de prueba (Tabla 26) incluyeron a) algunas de las lineas endocriadas y haplotipos resistentes y susceptibles clave; b) los progenitores resistentes y susceptibles de las poblaciones de mapeo PH7WTxPH3DT y PH9T JxPH890; c) recombinantes clave del conjunto de híbridos y la población de recombinación (pHG63 y una recombinante en el intervalo entre MZA15490 y MZA2038) . En la Tabla 26 se detalla una lista de lineas de prueba y se induyen calificaciones de resistencia y 30 susceptibilidad al MRCV en germoplasma Pioneer y una recombinante en el intervalo entre MZA15490 y MZA2038. ES 2 498 440 A2 En la Figura 9 se ilustra la posición de los fragmentos diana en el intervalo entre MZA15490 y MZA2038, Y la posición de los genes candidatos. Se obtuvieron resultados de secuenciación para las siguientes secuencias: MRQV_00005-1, MRQV_1318-1, MRQV_02352-1. MRQV_03828-1, MRQV_06374-1. MRQV_08351-1, MRQV _09551-1-1 , MRQV_10673-1 y MRQV_11074-1 . En la presente documentación se proveen las seOJencias en el grupo de líneas endocriadas de prueba para los segmentos MRQV_08351-1 y MRQV_10673-1, induyendo SNP polimórficos para caracterizar los haplotipos (véase la Figura 16) . En la Figura 9 se induye la posición de la secuencia en el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038. Los datos de las secuencias se usaron para identificar un homólogo probable para los segmentos de descendencia entre calificaciones independientes de resistencia o susceptibilidad. La región entre MRQV_OOOO51 y MRQV _08351-1 fue común para la mayorla de las fuentes de susceptibilidad independientes. Los datos para una recombinante clave (de la población de mapeo de alta resolución, susceptible a la enfermedad) permitieron comprobar que el punto de recombinación para este material genetieo está localizado dentro de un factor de transcripción Myb potencial (PC0644442) , y que la variación de secuencia que genera la resistencia deberia estar localizada entre la posición de este gen candidato y MZA2038. También hubo una relación IBO (identidad por descendencia) esperada entre fuentes independientes, en la región de PC0644442. o una región cercana a ella, como se indica a continuación: a) PHR33 Y PH467. b) PHR33, PH9T J, PHJ40 Y PHOG9. e) PHK09 presentó un haplotipo especifico. d) 630 presentó un haplotipo específico. Hubo un grupo de SNP diana en MRQV_08351-1, donde dichos SNP fueron muy especificas para las fuentes de resistencia. Sin embargo, los datos de la recombinación indican que la secuencia diana deberia estar localizada entre MRQV _08351 -1 (localizado en PC0644442) y MZA2038. Teniendo en cuenta la especificidad de los SNP diana en MRQV_08351-1, se secuenció este fragmento espeCifico en un total de 625 lineas endocriadas de germoplasma Pioneer. Se desarrolló una descripción genética con relación a la resistencia al MRCV de parte del germoplasma Pioneer. usando la información combinada de a) los marcadores circundantes de este intervalo (MZA15490 y MZA2038) , b) los datos de secuencia para las 625 lineas endocriadas y las lineas de prueba, c) la relación de pedigri entre las lineas endocriadas, y d) los datos fenotipicos para dichas líneas endocriadas. Se usó un grupo especifico de haplotipos en MRQV_08351-1, o combinados con la información de haplotipos para MRQV_10673-1 y MZA2038, para incrementar la información de caracterización e identidad por descendencia para las fuentes de resistencia de mayor importancia en el germoplasma Pioneer y considerar las variantes probables de la región diana. En la Tabla 27 se presenta una descripción de los haplotipos específicos y las respuestas observadas y esperadas a la enfermedad para los distintos materiales por haplotipo. Se incluyen las fuentes representativas a modo de referencia. Tabla 27 MRQV_08351-1 MRQV_10673-1 MZA2038 Fenotipo esperado MRCVSC n Fuente Datos seQreQación de 1 1, 2, 8, 9 4, 5, 9, 11 Susceptible 3, 02 247 PHFV5, 274, PHANO, 165, OH7, otros 1 3 5 Resistente 460 5 PHJ40 No 2 1 12 Resistente 4, 59 22 PH7WT, 173, 630, PHB04, PH14J PHAA4 PHG64 S; 3 6 1.1 4 Susce tibie 3, 21 19 C103, 157, olros 4 4 Susce tibie 331 13 216 otros 5 4 4, 1 1 Resistente 5, 00 3 PHR33, PH467, 501 LACAUNEOP No 7 3 10, 15 Resistente 5, 90 10 PHP51 , PHOG9, 546, lACAUNEOP S; 9 7 6 Resistente 500 2 PHK09, PH884, PHBD6, PHFCF SI '" '" C/) '" N .j>. 'D 00 i:: O " N ES 2 498 440 A2 Usando la información de MRQV_08351-1 , o en combinación con secuencias circundantes (MRQV_10673-1 y MZA2038) , los inventores infirieron lo siguiente: 5 1S al Fuente de resistencia 1. las fuentes PHR33 y PH467 pueden compartir un ancestro común en MRQV_08351-1 . las regiones compartidas con materiales europeos derivados de la variedad con polinización abierta LACAUNE apoyan la hipótesis de que hay un origen común probable a partir de una única región de haplotipo. b) Fuente de resistencia 2. las fuentes PHR33, PH9T J, PHJ40 Y PHOG9 pueden compartir un ancestro común en la región circundante de MRQV_08351+1. Ademas, PHP51 puede inferirse como parte de este grupo. las regiones compartidas con materiales europeos derivados de la variedad con polinización abierta LACAUNE apoyan la hipótesis de que hay un oñgen común probable a partir de una única región de haplotipo. c) Fuente de resistencia 3 PHK09 presentó un haplotipo compartido con PHBD6 en MRQV_083S1-1 , y podrían compartir un origen común en el germoplasma Tuxpen. d) Fuente de resistencia 4. 630 presentó un haplotipo específico, y no hay una relación de IBO confirmada con otras fuentes. A partir de los resullados en las poblaciones de mapeo, tos solicitantes demuestran que hay un OTL en la región de los marcadores preferidos en estas fuentes independientes: 630. PH9TJ. Aléticocon 630. PHP51. Alélico con 630. PHBD6. Atélico con 630. 25 La integración de los análisis de recombinación , secuencia y pedigri, y la inferencia de una relación de IBO esperada entre fuentes independientes motivó a los invenlores para que consideraran la posibilidad de usar los cuatro haplotipos más importantes en la región de dos de los marcadores preferidos (MZA15490 y MZA2038) para caracterizar la mayoría de las fuentes de resistencia en germoplasma Pioneer. Estos cuatro haplotipos de importancia podrlan agruparse como las siguientes fuentes de germoplasma: (a) Fuentes de resistencia 1 y 2. Germoplasma duro SWAN, que comparte una región de homología con materiales de la población europea con polinización abierta dura LACAUNE (b) Fuente de resistencia 3. Maleriales originados en TUXPEN. (c) Fuente de resistencia 4. Fuente especifica, 630 es la linea endocriada representativa. 35 El desarrollo de esta linea endocriada incluyó germoplasma TUXPEN y MEXICAN JUNE. una base genética amplia, la cual incluyó PC0644442 (Figura 8, un factor de Iranscripción Myb potencial) es un candidato probable para la resistencia a la enfermedad provocada por el MRCV. Las secuencias ligadas estrechamente con PC0644442 lambién deberlan considerarse como dianas para la clonación de genes, incluyendo las secuencias EPSIN1 probables y las secuencias circundantes del intervalo entre MZA 11826 Y MZA91 05. 45 Se caracterizó una solo recombinante entre MZA15490 y MZA2038, proveniente del cruzamiento entre PH30T y PH7WT, Y el punto de recombinación se localizó dentro de PC0644442. La región entre el intrón 3 de PC0644442 y las secuencias promotoras de PC0644442 se consideran dianas dave para la convalidación de los efectos sobre las variaciones en las respuestas de resistencia/susceptibilidad entre los genotipos. En la Figura 10 se ilustra la caracterización de la recombinante entre MZA15490 y MZA2038; se originó una quimera PC0644442 a partir de los genotipos PH30T y PH7WT. En la presente documentación se incluyen las secuencias en la región promotora de PC0644442 de PH30T (SEO ID Nº 195) Y PH7WT (SEO ID Nº 194) , donde se indican sitios polimórficos (véase el alineamiento de las secuencias en la Figura 15) . Ejemplo 9 55 MROV -Caracterización de híbridos principales Europa Se caracterizó un conjunto de materiales genéticos europeos en términos de fenotipo y genética para confirmar los loci marcadores genéticos de maiz asociados con la resistencia al MROV. Mediante la identificación de estos marcadores geneticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener malz con una resistencia mejorada al MROV. Hibridos de maiz y calificación de la resistencia 65 las variedades de plantas usadas en el análisis provinieron de diversas fuentes, induyendo germoplasma elite, cultivares disponibles comercialmente e hibridos pre-comerciales que representaban un amplio rango de germoplasma relacionado con un programa de desarrollo europeo. ES 2 498 440 A2 los grupos de hibridos de maíz se sembraron en un experimento de campo en España. Las clasificaciones de resistencia y susceptibilidad se basaron exclusivamente en observaciones de casos de enfermedad fortuitos, de ocurrencia natural, en pruebas de campo. El grado de resistencia de la planta a las infecciones de MRDV varió ampliamente, de acuerdo con las mediciones realizadas con una escala de incidencia de los síntomas del MRDV. La recolección de los datos típicamente se realizó en un periodo de calificación. Dicho periodo de calificación se estableció después del florecimiento. Para evaluar la relación entre los marcadores y la resistencia, se realizó una comparac1ón usando la información de IBO de las líneas progenitoras. El origen del alelo se verificó usando el abordaje de idenlidad por descendencia. Con este abordaje, se usaron aquellas líneas de maíz consideradas representativas de cualquiera de las clases genotipicas para evaluar la asociación y predecir el desempeño a nivel de los hibridos. Determinación del genotipo de maíz Se determinó el genotipo de cada Unea progenitora de estos híbridos, y se estimaron cálculos de la ISO para cada línea La lógica subyacente es que los marcadores con distribuciones de alelas significativamente diferentes entre los grupos resistente y susceptible (es decir, distribuciones no azarosas) podrian estar asociados con el carácter y podrían usarse para separarlos para realizar una selección asistida por marcadores de lineas de maíz con resistencia o susceptibilidad al MRCV previamente no caracterizadas o caracterizadas. En el presente análisis se examinó la información de IBO en la posición genética de la región de los marcadores preferidos y se determinó si la distribución de los alelas en el grupo resistente era significativamente diferente de la distribución de los alelas en el grupo susceptible. En este análisis se compara la calificación fenotipica de las plantas con los genotipos en los loci diana; los genotipos se predijeron por IBO. Resultados Con el objeto de evaluar el efecto de la variación alética en este QTL a nivel de los híbridos, se caracterizó un conjunto de 212 hibridos (antecedentes genéticos heterogéneos) de acuerdo con la presencia de uno (heterocigotos para el aTL) o dos alelas resistentes (homocigotos para el QTL) en las lineas progenitoras. Se observó un efecto positivo y aditivo del alelo resistente en el QTL de importancia en las combinaciones híbridas. En la Tabla 28 se detalla el desempeño en el campo de híbridos con distintos genotipos en el QTL de mayor importancia. El desempet'\o en el campo se caracterizó como calificación del MROV, protocolo similar al descripto con anterioridad. Tabla 28 Genotipo híbrido para el QTL más importante AA alelo susce tibie homoci oto Cantidad de hlbridos 163 Promedio de , . calificación del MRDV 425 Desv. est. 092 BA heteroci ata, alelo resistente femenino BB alelo resistente homocigoto 37 3 5, 45 6, 00 1, 01 0, 88 En la Figura 11 se ilustra el desempel"io de hibridos de maíz bajo una infección de MROV. El desempel"io en el campo se caracterizó como calificación del MROV. Djscusjónlconclusiones; En este ejemplo se han identificado intervalos cromosómicos que están correlacionados con la resistencia al MRDV. los marcadores que se hallan en estos intervalos son Otiles para la MAS, y también para otros propósitos. La predicción de la resistencia incrementada al MRDV usando los marcadores preferidos para la resistencia al MRCV indica que estos marcadores pueden usarse para la MAS con distintos Fijivirus. Por consiguiente, se espera un efecto positivo de los marcadores preferidos para la resislencia con otros Fijivirus, tales como el fijivirus del enanismo con pica negra del arroz. Ejemplo 10 Ensayo fenotlplco de la resistencia al MRCV Qué: Una calificación de 1 a 9 del virus del mal de Río Cuarto, donde 1 representa la ausencia de resistencia ES 2 498 440 A2 (achaparrado, acortamiento de los internados, ausencia de mazorcas) y 9 indica que el material genético es resistente a la enfermedad (ausencia de síntomas) . Cuando: Desde el florecimiento hasta la cosecha Se verifican las calificaciones de líneas susceptibles conocidas para determinar si sus calificaciones actuales coinciden con las calificaciones históricas. 1. Se comparan las calificaciones que serian el resultado de lineas susceptibles en la actualidad con sus calificaciones históricas para determinar si hay coincidencia. 2. Si las calificaciones son demasiado altas, luego no hay suficiente presión de la enfermedad para calificar esta localización. Sin embargo, se seriala cualquier parcela donde haya mayor presencia de la enfermedad que en una parcela susceptible. 3. Calificación en base a parcelas. las plantas en una parcela pueden tener síntomas variados debido al Uempo de infección, o atgunas plantas pueden escapar de la enfermedad (la infección natural depende de la población de vedores) . 4. Se considera la severidad de tos síntomas y la frecuencia de las plantas con síntomas. las calificaciones de 1 a 3 se hallan en la categoría susceptible: aquellas de 4 a 6 se hallan en la categoría resistente; aquellas de 7 a 9 se hallan en la categoría muy resistente. Descripción de las pruebas de campo: al Carficaciones 1-3. Categoría susceptible. los síntomas induyen enanismo severo, acortamiento severo de los internados, ausencia de mazorcas o desarrollo muy pobre de éstas, muerte prematura de las plantas. bl Calificaciones 4-6. Categoria resistente. Plantas con sintomas tales como enaciones y acortamiento de los internados blandos. Baja frecuencia de plantas con sintomas severos. el Calificaciones 7-9 Categoría muy resistente. Planta saludable. Presencia de enaciones o ausencia de sintomas. ES 2 498 440 A2
+ ES-2498440_A2 REFERENCIA A SOLICITUD RELACIONADA Esla solicilud reivindica el beneficio de la Solicilud Provisional de los Eslados Unidos NI) 61/001455, presenlada e11º de Noviembre de 2007, que se incorpora a modo de referencia en su totalidad. CAMPO DE LA INVENCiÓN la presente descripción se relaciona con composiciones y métodos útiles para crear o mejorar la resistencia de las plantas a Fijivirus, particularmente el virus dtll mal de Río Cuarto y/o el virus del enanismo rugoso del maíz. Adicionalmente, la invención se relaciona con plantas que han sido transformadas genéticamente con las composiciones de la invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN la enfermedad provocada por el virus del mal de Ftio Cuarto (MRCV) es una enfermedad del maíz de vllal importancia en la Argenllna, y da cuenta de pérdida:; de rendimiento de más de 70% en los años en los que ocurren brotes severos (Rodriguez PE et al. (1998) Plant Dis. 82:149-52) . la enfermedad es un miembro del serogrupo 2 de los Fijivirus, donde también se hallan otros virus, tales como el virus del enanismo rugoso del maiz, el virus del enanismo con pica negra del arroz, y el virus del achaparrado del pasto Pangola (Uyeda , & Milne RG (1995) Semin. Virol. 6:85-88) . El vector principal para el MRCV es Delphacodes kuscheli, pero se ha comprobado que otras especies de Delphacodes, tales como D. haywardi y D. tigrinus, y también Toya propinqua, son portadores del virus. El virus no pare, ce ser transmitido a la progenie a través de las semillas. Distéfano et al., Arch. Virol. 147:1699-1709 (2002) , analizaron la secuencia del MRCV y propusieron que se trata de una nueva especie de Fijivirus relacionada con el MRDV (virus del enanismo rugoso del maíz) . El MRDV se halla en varios países europeos (por ejemplo, la República Checa, Francia, Italia, Noruega, España, Suecia) y en China, mientras que el MRCV también ha sido detectado en Uruguay (Ornaghi J. A., Beviacqua J. E., Aguirrezabala O. A., March G. J. y lenardón S. l. 1999. Oetection of Mal de Río Cuarto virus in Uruguay. Fitopatologia Brasileira 24: 471 ) . la infección del MRCV provoca el desarrollo anormal del maíz y reduce significativamente el rendimiento de los cultivos. El fenotipo susceptible incluye achaparrado, acortamiento de los internodos, varias mazorcas con granos dispersos, espiguillas dispersas sin anteras, presencia de enaciones pequeñas en el dorso de las hojas, raíces reducidas, y hojas cortadas y reducidas. los sintomas de las plantas dependen del estado fenológico de la planta, el genotipo de la planta y el ambiente (lenardón et al., "Virus del Mal de Río Cuarto en maíz", en Proyecto de Investigaciones en Fitovirología (lenardón, editor) , 2:10 (1999) . los síntomas mas severos ocurren cuando la infección tiene lugar en el coleoptile -la etapa de la primera hoja. En el brote severo de MRCV de 1996-1997, se vie, ron afectadas mas de 300000 hectareas de maiz en la Argentina, y las pérdidas resultantes alcanzaron aproximadamente $120 millones. Las poblaCiones incrementadas de Delphacodes kuscheli en 2006 aparentemente resultaron en la recurrencia de la enfermedad viral en las plantas de malz de la Argentina, lo que afectó significativamente la cosecha de 2007. los genotipos susceptibles fueron afectados fuertemente por el MRCV en la región endémica (provincia de Córdoba) y afectaron moderadamente otras regiones de siembra de maíz. El desarrollo de marcadores genéticos moleculares ha facilitado el mapeo y la selección de caracteres de importancia agrícola en maíz. los marcadores ligados estrechamente con genes de resistencia a enfermedades son valiosos para identificar rápidamente lineas de maíz resistentes sobre la base de su genotipo, mediante el uso de selección asistida por marcadores (MAS) . La introducción de genes de resistencia a enfermedades en un cultivo deseado también se ve facilitada por el uso de marcadores de AON apropiados. Marcadores moleculares V selección asistida por nlarcadores Un mapa genético es una representación gráfica de un genoma (o una porción de un genoma, tal como un único cromosoma) , donde se miden las distancias entre puntos caracteristicos en el cromosoma a través de las frecuencias de recomb¡naciÓn entre los puntos característicos. Un punto característico genético puede ser cualquiera de una variedad de marcadores polimórficos conocidos, por ejemplo, sin limitaciones, marcadores moleculares tales como marcadores SSR, marcadores RFLP, marcadores FlP o marcadores SNP. Además, los marcadores SSP pueden derivar de ácidos nucleicos !~enómícos o expresados (por ejemplo, EST) . la naturaleza de estos puntos característicos y los métodos usados para detectarlos varían, pero todos estos marcadores pueden distinguirse frsicamente unos de otros (asi como de la pluralidad de alelos de cualquier marcador particular) sobre la base de la longitud y/o la secuencia de los polinucleótidos. Aunque las secuencias de ADN específicas que codifican proteínas generalmente estan bien cOnservadas en una especie, otras regiones de ADN (típicamente no codilicante) tienden a acumular polimoñismos, por lo que pueden variar entre los individuos de la misma espE~cie. Estas regiones proporcionan la base de numerosos marcadores genéticos moleculares. En general, cualquier caracter polimórfico heredado de forma diferencial (incluyendo el polimorfismo de ácidos nucleicos) que segrega entre la progenie es un marcador potencial. la variabilidad genómica puede ser de cualquier origâ¬in, por ejemplo, inserciones, supresiones, duplicaciones, elementos repetitivos, mutaciones puntuales, eventos de recombinación, o la presencia y la secuencia de elementos de transposición. En la técnica se conoce una gran cantidad de marcadores moleculares de maíz, y éstos están publicados o disponibles en varias fuentes, tales como el recurso de Internet MaizeGDB. De forma similar, también existen numerosos métodos bien establecidos para detectar marcadores moleculares. la motivación primaria para desarrollar tecnologías de marcadores moleculares desde el punto de vista de los encargados del cultivo de plantas ha sido la posibilidad de incrementar la eficiencia de los cruzamientos mediante la selección asistida por marcadores (MI~S) . Un alelo de un marcador molecular que presenta desequilibrio de ligamiento con un carácter fenotípico deseado (por ejemplo, un locus de un carácter cuantitativo o QTl, tal como la resistencia a una enfermedad particular) provee una herramienta útil para seleccionar un carácter deseado en una pOblación de planlas. los componentes clave de la implementación de este abordaje son: (i) la creación de un mapa genético denso de marcadores moleculares, (ii) la detección de QTl sobre la base de asociaciones estadisticas entre el marcador y la variabilidad fenotipica, ~ii) la definición de un conjunto de alelos marcadores deseables basada en los resultados del análisis de OTl, y (iv) el uso y/o la extrapolación de esta información para el conjunto actual de germoplasma de cultivo para permitir la toma de decisiones de selección basada en marcadores. La disponibilidad de mapas de ligamiento integrados del genoma del maíz que contienen densidades crecientes de marcadores de maiz públiCOS ha facilitado el mapeo genético del maiz y la MAS. Véase, por ejemplo, el recurso MaízeGDB en Intemet. Frecuentemente se usan dos tipos de marcadores en los protocolos de selección asistida por marcadores: se trata de los marcadores de repeticiones de secuencias simples (SSR, también conocidos como microsatélites) y los marcadores de polimoñismos de nucleótidos inc:lividuales (SNP) . El término SSR generalmente designa cualquier tipo de heterogeneidad molecular que resulte en variabilidad en longitud, y más típicamente es un segmento de ADN corto (de hasta varios cientos de pares de bases) que consiste en múltiples repeticiones en tandem de una secuencia de otros dos pares de basel;. Estas secuencias repetidas resultan en regiones de ADN altamente polimórficas de longitud variable debido a la baja fidelidad de replicación, por ejemplo, causadas por deslizamientos de la polimerasa. las SSR parecen estar dispersas al azar a través del genoma, y generalmente están rodeadas por regiones conservadas. l os marcadores SSR también pueden derivar de secuencias de ARN (bajo la forma de un ADNc, un ADNc parcial o una EST) , asi como de material genómico. las características de la heterogeneidad de las SSFt las hacen muy apropiadas para usar como marcadores genétiCOS moleculares; es decir, la variabilidad gen6rnica de las SSR es hereditaria, multialélica, codominanle y detectable en situaciones reproducibles. la proliferación de técnicas de detección basadas en amplificación (por ejemplo, basadas en PCR) cada vez más sofisticadas provee una variedad de métodos sensibles para reducir la heterogeneidad de las secuencias de nucleótidos. Se diseñan cebadores (u otros tipos de sondas) para que hibriden con las regiones conservadas que rodean el dominio SSR, lo que resulla en la amplificación de la región SSR variable. los amplicones de distinto tamaño generados a partir de una región SSR tienen tamaños característicos y reproducibles. los amplicones SSR de distinto tamaño observados en dos cromosomas homólogos en un individuo, o en distintos individuos en la población de plantas, generalmente se conocen como "alelos marcadores". Siempre que existan al menos dos alelos SSR que generen productos de PCR con al menos dos tamaños diferentes, podrán emplearse los SSR como marcadores. En la técnica también se conocen los marcadores de maíz que están basados en polimorfismos de nucleótidos individuales (SNP) . Se han desarrollado diversos prooedimientos para detectar SNP, incluyendo la hibridación de alelos especificos (ASH; véase, por ejemplo, Shattuck-Eidens et al. , (1991) "Rapid delection of maize DNA sequence varialion", Genet. Anal. Tech. Appl. 8:240-245) . También se usan ampliamente otros tipos de marcadores moleculares, incluyendo, sin limitaciones, las marcas de secuencia expresadas (EST) y los marcadores SSR derivados de secuencias EST, 108 polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFlP) , los polimorfismos de longitud de fragmentos élmplificados (AFlP) , el AON polimórfico amplificado al azar (RAPO) y los marcadores de isozimas. Un experto en la materia conoce un amplio rango de protocolos para detectar esta variabilidad, y estos protocolos frecuentemente son especificos para el tipo de pOlimorfismo que estan diseñados para detectar. Por ejemplo, amplificación por PCR, polimOrfismos de conformación de cadenas individuales (SSCP) y replicación autosostenida de :;ecuencias (3SR; véase Chan y Fox, "NASBA and other transcription-based amplification methods for research and diagnostic microbiology", Reviews in Medical Microbiology 10:185-196 (1999". También pueden generarse diversos tipos de marcadores FlP. Más comúnmente, los cebadores de amplificación se usan para generar polimomsmos de longilud de fragmentos. Estos marcadores FLP son similares en varios aspectos a los marcadores SSI~, excepto que la región amplificada por los cebadores tipicamente no es una región altamente repetitiva. Aún asi, la región amplificada, o el amplicón, tendrá una variabilidad suficiente entre los germoplasmas, comúnmente debido a inserciones o supresiones, de modo que será posible distinguir los fragmentos generados por I () s cebadores de amplificación entre individuos polimórficos, y se sabe que estos indels aparecen con frecuencia en maíz (Bhattramakki et al. (2002) Plant Mol Biol 48, 539547; Rafatski (2002) Plant Sci 162:329-333) . El término "indel" hace referencia a una inserción o una deteción, donde puede establecerse que una linea presenta un;a inserción respecto de una segunda linea, o donde puede establecerse que esta segunda línea presenta una deleción respecto de la primera. Los marcadores MZA descritos en la presente documentación son ejemplos de marcadores FLP amplificados que han sido seleccionados debido a que se hallan cerca del QTL del cromosoma mayor 2. El ligamiento entre un marcador molecular y otro marcador molecular se mide como una frecuencia de recombinación. En general, cuanto más cerca están dos bci (por ejemplo, dos marcadores SSR) en el mismo mapa genético, más cerca están uno de otro en el mapa fisico. Una distancia genética relativa (determinada mediante un cruzamiento sobre frecuencias, medida~; en centimorgans; cM) es generalmente proporcional a la distancia fisica (medida en pares de bases, por ejemplo, pares de kilobases (kb) o mega pares de bases (Mbp" que separa dos loo ligados en un cromosoma. La ausencia de proporcionalidad precisa entre los cM y la distancia física puede ser el resultado de la variación en las frecuencias de recombinación de distintas regiones cromosómicas, por ejemplo, algunas regiones cromosómicas son ·sitios calientes' de recombinación, mientras que otras regiones no presentan recombinación alquna, o solamente presentan eventos de recombinación escasos. En general, cuanto mas cerca está un marcador de otro, ya sea en términos de recombinación o de distancia fisica, más fuerte están ligados. En algunos aspectos, cuanlo mas cerca está un marcador molecular a un gen que codifica un polipéptido que imparte un fenotipo particular (resistencia a enfennedades) , medido en términos de recombinación o de distancia física, m¡~s útil es el marcador para marcar el carácter fenotípico deseado. También puede observarse la variabilidad del mapeo genético entre distintas poblaciones de la misma especie de cultivo, incluyendo el maíz. A pesar de esta variabilidad en el mapeo genético que puede ocurrir entre poblaciones, la información de los mapas genéticos y los marcadores derivados de una población aún es úti' en general para aplicarla a varias poblaciones, con el objeto identificar plantas con caracteres deseados, realizar una selección negativa de plantas con caracteres indeseables y guiar la MAS. Mapeo de QTL El objellvo del encargado del cultivo de plantas es seleccionar plantas y enriquecer la población de plantas en individuos con los caracteres deseados, por ejemplo, resistencia a patógenos, lo que conduce finalmente a una mayor productividad agrícola. Durante un cierto tiempo se ha reconocido que pueden mapearse loo cromosÓ01icos especificos (o intervalos) en el genoma de un organismo que estan correlacionados con fenotipos cuantitativos particulares. Estos loci se denominan loo de caracteres cuantitativos o QTL. El encargado del cultivo de plantas puede usar ventajosamente marcadores moleculares para identificar los individuos deseados al identificar aquellos alelos marcadores que presentan una probabilidad de significación estadlstica de casegregación con un fenotipo deseado (por ejemplo, resistencia a patógenos) , lo que se manifiesta como un desequilibriO de ligamiento. Al identificar un marcador molecular o grupos de marcadores moleculares que ca-segregan con un caracter cuantitativo, el encargado del cultivo de plantas esta identificando un QTL. Al identificar y seleccionar un alelo marcador (o alelas deseados pa.ra múltiples marcadores) ligado con el fenotipo deseado, el encargado del cultivo de plantas puede seleccionar ri¡pidamente un fenotipo deseado al seleccionar el alelo del marcador molecular apropiado (un proceso denominado selección asistida por marcadores o MAS) . Cuando más marcadores moleculares se colocan en el mapa genético, más potencialmente útil se torna este mapa para realizar MAS. Se han desarrollado varios paradigmas experimenUlles para identificar y analizar QTL (véase. por ejemplo. Jansen (1996) Trends Plant Sci 1:89) . La mayor parte de los informes publicados sobre el mapeo de QTL en especies de cultivo se han basado en el uso de cruzamientos bi-parentales (Lyndl y Watsh (1997) Genelics and AnalYl>il> o ( Quantilative Traill>, Sinauer Assodates, Sunderland) . Típicamente, estos parad igmas comprenden cruzar uno o más pares de progenitores, los cuales pueden ser, por ejemplo, un único par derivado de dos cepas endocriadas, o múltiples progenitores relacionados o no relacionados de distintas cepas o lineas endocriadas, que pueden presentar distintas características en lo referente al carácter fenotipico de interés. Tipicamente, este protocolo experimental comprende derivar entre 100 y 300 miembros de la progenie segregante a partir de un único cruzamiento de dos líneas endocriadas divergentes (por ejemplo. seleccion;:¡das para maximizar las diferencias en el fenotipo y los marcadores moleculares entre las lineas) . Se determina el genotipo de los progenitores y la progenie segregante para varios loci marcadores, y se evalúan uno o más caracteres cuantitativos (por ejemplO, resistencia a enfermedades) . Luego se identifican QTL como asociaciones de significación estadistica entre los valores genotípicos y la variabilidad genotípica entre la progenie segregante. La fuerza de este protocolo experimental proviene de la utilización de los cruzamientos entre lineas endocriadas, ya que los progenitores F1 resultantes tienen todos la misma fase de ligamiento. Por consiguiente, después de autocruzar las plantas F1, toda la progenie segregante (F2) es útil para fines infonnativos y se maximiza el desequilibrio de ligamiento, se conoce la fase de ligarniento, hay solamente dos alelos de OTl, y, excepto por la progenie del retrocruzamiento, la frecuencia de cada alelo QTl es de 0, 5, Un experto en la materia conoce numerosos métodos estadísticos para determinar si los marcadores están ligados genéticamente con un QTL (o con otro marcador) , incluyendo, por ejemplo, modelos lineales convencionales, tales como ANOVA o mapeo de regresión (Haley y Knott (1992) Heredity 69:315) , métodos de probabilidad máxima, tales como los algoritmos de expectación-maximización, (por ejemplo, lander y Botstein (1989) "Mapping Mendelian factors underlying quanti'lative traits using RFlP linkage maps", Genetics 121:185199; Jansen (1992) "A general mixture model for mapping quantitative trait loei by using molecular markers", Theor. Appl. Genet., 85:252-260; Jansen (1993) "Maximum likelihood in a generalized linear finite mixture model by using the EM algorithm", Biometrics 49:227-231 ; Jansen (1994) "Mapping of quantitative trait loo by using genetic markers: an overview de biomelrical models", en J.w. van Ooijen y J, Jansen (editores) , Biometrics in Plant breeding: applicalions o ( molecular markers, pp. 116-124, CPRO-OlO Méter1ands; Jansen (1996) "A general Monte Cario method for mapping multiple qualntitative trait loei", Genetics 142:305-311 ; y Jansen y Stam (1994) "High Resolution of quantitative trait into multiple loci via interval mapping", Genetics 136:1447-1455) . los ejemplos de métodos estadisticos incluyen el análisis de marcadores individuales puntuales, el mapeo de intervalos (Lander y Botstein (1989) Genetics 121:185) , el mapeo de intervalos compuestos, el análisis de regresión penalizada, el análisis de pedigri complejo, el análisis MCMC, el análisis MQM (Jansen (1994) Genetics 138:871) , el análisis HAPlO-IM+, el análisis HAPlO-MQM el análisis HAPlO-MQM+, el MCMC bayesiano, la regresión de bordes, el análisis de identidad por descendencia, la regresión de Haseman-Elston, cualquiera de los cuales son apropiados en el context:o de la presente invención. Además, se describen detalles adicionales sobre métodos estadísticos alternativos que pueden aplicarse a poblaciones de cultivo complejas, que pueden usarse para idenlificar y localizar QTL, en la Patente de los Estados Unidos Nº 6399855 Y WOQ149104. Cualquiera de estos abordajes demandan una gran cantidad de trabajo computacional y comúnmente se ponen en práctica con la ayuda de un sistema informático y software especializada. Existen conjuntos estadisticos apropiados disponibles en una variedad de fuentes públicas y comerciales, y son conoeidos por un experto en la materia. Sala et al., en la Solicitud de Patente Argentina Nº AFlP20030100125, describen una combinación de tres alelos QTL relacionados con la resistencia de las plantas, de maiz al MRCV. Los loo están ligados a alelos de resistencia favorables de los marcadores bnlg1017, bnlg2277, bnlg125, bnlg381 y bnlg180, donde se observa resistencia cuando todos los alelos que confieren dicha resistencia están presentes. Actualmente existe la necesidad de cepas de maíz rnejoradas que sean resistentes a fijivirus, particularmente MRCV y MRDV, Ysus agentes causales, por ejempto, la Infección de DelptJacodes kusctJeli. Actualmente eXiste la necesidad de métodos que permitan identificar plantas o poblaciones de maiz (germoptasma) que presenten resistencia a fijivirus. Por consiguiente, actualmentl;: existe la necesidad de disponer de la capacidad de identificar marcadores genéticos molecutares que estén ligados a loei de resistencia a fijivirus, con el fin de facilitar ta MAS, y también para facilitar el descubrimiento de genes y la clonación de alelos de genes que impartan resistencia a fijivirus. Estos marcadores pueden usarse para seleccionar plantas individuales y pOblaciones de plantas que presenten alelos marcadores favorables en poblaciones de maíz, y luego pueden emplearse para seleccionar el fenotipo resistente, o como alternativa, para realizar una selección negativa de aquellas ptantas o poblaciones de plantas que presen'ten un fenotipo de susceptibilidad a fijivirus. En la presente invención se proveen estas y otras ventajas. RESUMEN DE LA INVENCiÓN Se proveen composiciones y métodos para identificar plantas o gennoplasma de maíz con resistencia conferida recientemente o mejorada a fijivirus. También se proveen métodos para preparar plantas o germoplasma de malz que son resistentes a fijivirus, por ejemplo, mediante la introducción de los alelos marcadores de resistencia deseados y/o con métodos de producción transgénica, y también plantas y germoplasma preparados con estos métodos. Los sistemas y los conjuntos de elementos para seleccionar plantas y germoplasma resistentes también son una caracterrstica de la invención. En algunos aspectos, en la invención se proveen métodos para identificar una primera planta o gennoplasma de maiz (por ejemplo, una linea o una variedad) que tiene una resistencia conferida recientemente o mejorada, o susceptibilidad al MRCV. En los métodos, se detecta al menos un alelo de uno o más loo marcadores (por ejemplo, una pluralidad de loci marcadores) que e~;¡tá ligado con la resistencia conferida recientemente, la resistencia mejorada o la susceptibilidad en la primi::ra ptanta o germoplasma de maíz, los loci marcadores pueden seleccionarse entre los loei indicados en las Tabtas 1 y 2, incluyendo MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105, asi como cualquier otro marcador que esté ligado a estos QTL marcadores (por ejemplo, a aproximádamente 10 cM de estos loci) . En la Tabla 1 se describen marcadores de malz que presentan desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV, lo que se detennina mediante análisis de mapeo de ligamiento. identidad por descendencia y métodos de mapeo QTL. En la Tabla 2 se describen marcadores de maiz que presentan desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV, lo que se determina mediante métodos de mapeo de intervalos de QTL (incluyendo análisis de regresión de marcadores individuales) . En las tablas se indica también el marcador y su posición aproximada en el mapa genético respecto de otros marcadores conocidos, expresada en cM, donde la posición cero es el primer marcador (mas distal) en el cromosoma. También se indican las poblaciones de maiz usadas en el análisis y la probabilidad estadistica de segregación al azar dE!1 marcador y el fenotipo de resistencia/susceptibilidad, expresada como una probabilidad ajustada en función de la variabilidad y los falsos positivos en varias pruebas. También se indican los valores de probabilidad obtenidos en regresiones de marcadores individuales. En la invención también se proveen intervalos de QTl cromosómicos que están correlacionados con el MRCV. Estos intervalos están localizados en el grupo de ligamento 2. Cualquier marcador localizado en estos intervalos también puede usarse como marcador para la resistencia al MRCV y también es una característica de la invención. Estos intervalos incluyen los siguientes: (i) MZA8381 Y MZA18180; (ii) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA15490 Y MZA2038; (iv) bnlg1458b y umc1261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261 a; y (viii) bnlg1327 y umc1262a. Es posible seleccionar una pluralidad de loc; marcadores en la misma planta. No existen limitaciones respecto de cuáles marcadores QTl se seleccionan en combinación. Los marcadores QTL usados en las combinaciones pueden ser cualquiera de los marcadores indicados en las Tablas 1 y 2, cualquier otro marcador que esté ligado a los marcadores en las Tablas 1 y 2 (por ejemplo, los marcadores ligados determinados en el recurso MaizeGDB) , o cualquier marcador en los intervalos de QTL descritos en la presente documentación. Tabla 1 Probabilidad ajustada Asociación estructurada Asociación no estructurada Marcador Posición relativa en el mapa (c M) . PH D v 1, 4 Metodo de identificación Reserva genética analizada/Población de mapeo Análisis de asociación Myriad líneas endocriadas argentinas Anilisis de asociación I Myriad Lineas endocriadas SS Análisis de asociación " Myriad Lineas endocrladas SS Análisis de asociación lineas endocriadas del conjunto 1 (SS) Anilisls de asociación SNP en MRCV1 . líneas endocriadas argentinas MZA7588 63, 17 Aná!isis de asociación, identidad por descendencia Germoplasma Bread Pioneer 0, 12 0, 34 1 0, 742 0, 000676917 MZAB381 63, 47 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoptasma Broad Pioneer 0.002 0, 0037 0, 0044 0, 000198191 menos de 0, 001 MZA3105 63, 55 Análisis de asociación, identida:! por descendencia Germoptasma Bread Pianeer 0, 0412 0, 064 MZA482 63, 64 Análisis de asociación, identida:! por descendencia Germoptasma Broad Pianeer 0, 551 0, 0958 0, 197 0, 002172499 MZA 16531 63, 63 Análisis de asociación, identidad por descendencia Germoptasma Broad Pianeer 0, 174 0, 0282 0 , 055088894 MZA14553 64, 1 Análisis de asociación , identidad por descendencia Germoplasma Broad Pianeer MZA4305 64, 1 Análisis de asociación , identidad por descendencia Germoplasma Bread PIaneer 0, 644 0, 0394 0, 066 0, 331615457 MZA625 64, 1 Análisis de asociación, identidad p'"descendencia, maoeo de QTL Germoplasma Pioneer Brcad 0, 0476 0, 685 0, 74 0, 000136376 MZA625-30-A 64, 1 Identidad po' descendencia, mapeo de QTL Germoplasma Pioneer Broad menos de O, C) () 1 MZA625-29-A 64, 1 Identidad po, descendencia, maoeo de QTL Germoplasma Pioneer Bmad menos de 0, 001 MZA15451 65, 3 Análisis de asociación, identidad po, descendencia Germoplasma Pioneer Broad 0, 0105 0, 0438 0, 0612 0, 51165696 MZA91 OS 65, 4 Análisis de asociación, identidad po' descendencia Germoplasma Pioneer Broad 0, 0226 0, 436 0, 453 0, 003621576 MZA9105-8-A 65, 4 Identidad po, descendencia, maceo de QTL Germoplasma Pioneer Brcad menos de 0, 001 MZA9105-6-A 65, 4 Identidad po' descendencia, mapeode QTL Germoplasma Piooeer Broad 0, _ MZA11826 66, 0 Análisis de asociación, identidad po' descendencia, mapeode QTL Germoplasma Pioneer Broad 0, 0201 0, 16 0, 486 1, 79182E·06 MZA11826803-A 66, 0 Identidad po' descendencia, mapeode QTL Germoplasma Pioneer Broad 0, 014 MZA11826801 -A 66, 0 Identidad po' descendencia, mapeode OTL Germoplasma Pioneer Broad 0, 034 MZA11826-27A 66, 0 Identidad po, descendencia, maoeode OTL GermopJasma Pioneer Brcad 0, 04 MZA15490 66, 0 Análisis de asociación, Germoplasma Pioneer Brcad 0, 0079 0, 186 0, 523 0, 4067326 Tabla 2 Los marcadores que están ligados a los QTL marcadores de las Tablas 1 y 2 pueden estar ligados estrechamente, por ejemplo, a aproximádamente 10 cM de los QTl marcadores de las Tablas 1 y 2. En algunas realizaciones, el locus deseado presenta una distancia de recombinaciOn genética de 9 centiMorgans, 8, 7. 6, 5. 4, 3, 2, 1, 0, 75, 0, 5 O 0, 25, o menos, respecto del QTL marcador. En algunas realizaciones, los QTL marcadores preferidos se seleccionan entre MZA62S, MZA166S6, MZA154S1, MZA15490, MZA2038, MZA11826, Y MZA91 05. Se prefieren en mayor medida los QTl marcadores seleccionados entre MZA15490 y MZA2038. En algunas realizaciones, el germoplasma es de una línea o una variedad de maíz. En algunos aspectos, la resistencia conferida recientemente, resistencia mejorada o la susceptibilidad de una planta de maíz al MRCV puede cuantificarse usando cualqUier medio apropiadO, por ejemplo, una escala entre 1 y 9 (calificación del MRCV) , donde 1 representa un genotipo muy susceptible, 9 representa un genotipo completamente resistente y 4 representa un genotipo con el nivel de resistencia mínimo para generar un hibrido comercial. Una segunda manera para evaluar la resistencia al MRCV comprende evaluar el porcentaje de plantas muy susceptibles en un genotipo especifico. Por ejemplo, puede realizarse un experimento de campo donde los genotipos se disponen en un diseño de bloques completamente al azar y cada unidad experimental está representada por una hilera de 4 metros y aproximadamente 20 plantas. La resistencia mejorada al MRCV se evalúa observando cada unidad experimental y asignando una calificación de campo (escala de 1 a 9) . Al mismo tiempo, se evalúa el porcentaje de plantas muy su:sceptibles en cada unidad experimental. En la figura 3A pueden observarse ejemplos de malz con sintomas del MRCV, y en la figura 38 pueden observarse ejemplos de malz con susceptibilidad al MRCV. Puede usarse aJalquiera de una variedad de técnicas para identificar un alelo marcador. No se pretende limitar el método de detección de alelos de modo alguno. l os métodos para detectar alelos típicamente incluyen métodos de identificaciOn moleculares, tales como la amplificación y la detección del amplicón del marcador. Por ejemplo, puede detectarse una forma alélica de una repeticiOn de secuencia polimOrfica simple (SSR) , o de un polimorfismo de nucleótídos individuales (SNP) , por ejemplo, empleando una tecnologia basada en amplificación. En estos y otros métodos de detección basados en amplificaciOn, se amplifica elloaJs marcador, o una porción dellocus marcador (por ejemplo, por PCR, l CR o transcripciOn. usando un ácido nucleico aislado a partir de una planta de maíz de interés como molde) , y se detect:a el amplicón de marcador amplificado resultante. En un ejemplo de este abordaje, se mezcla un cebador de amplificaciOn o un par de cebadores de amplificación con un ácido nudeico genómico aislado de la primera planta o el primer germoplasma de malz, donde el cebador o el par de cebadores es complementario o parcialmente complementario con al menos una porción del locus marcador. y es capaz de iniciar la polimerización por una ADN polimerasa usando el ácidos nucleicos genómico de maíz como molde. El cebador o el par de cebadores (por ejemplo, un par de cebadores proporcionados en la Tabla 3) se extiende en una reacción de pOlimerización de AON que comprende una ADN polimerasa y un ácido nucleico genómico como molde, para generar al menos un amplicOn. Tabla 3 Nombre del marcador BNLG1327 BNLG1458B umc1261a umc1262a Secuencia del cebador izquierdo SEa ID Nº 45 SEa ID N'47 SEa ID NC'4g SEO ID N" 51 Secuencia del cebador derecho SEa ID Na 46 SEa ID N" 48 SEO ID N" 50 SEO ID NG 52 Repetición CT (25) - (TG) 8 (GTC) 4 También conocido como (AKA) bmc1327, A4615G09, p-bnlg1327 , A4615G10, 00191327, LGI456705 bnIg1458, p-bnlg1458, A4651C06, bmc1458, A4651C05 A1987278 Al987278 En la Tabla 3 se detallan marcadores genómicos ~, SSR, incluyendo aquellos marcadores que presentaron desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV (directamente o por extrapolación a partir det mapa genélico) . En la Tabla 3 se proveen las secuencias de los cebadores de PCR izquierdos y derechos usados en el analisis de determinación del genotipo dellocus marcador SSR. También se detalla la secuencia de cola enrollada (pigtaif) usada en el extremo 5' del cebador derecho, y la cantidad de nucleótidos en el elemento de repetición en tandem en el SSR. En cualquier caso, pueden transmitirse los datos que representan los alelas detectados (por ejemplo, por via electrónica, por rayos infrarrojos, medios inalambricos o transmisión óptica) a un ordenador o un medio que 10 puede ser leido por un ordenador para analizarlos o almacenarlos. En algunas realizaciones, el ARN vegetal es el molde de la reacción de amplificación. En algunas realizaciones, el ARN genómico vegetal es el molde de la reacción de amplificación. En algunas realizaciones, el QTl marcador es un marcador de tipo SNP, el alelo detectado es un alelo SNP (véase, por ejemplo, la Tabla 4 (donde se represenlan marcadores SNP en la posición del QTl y los haplotipos PH7WT (= 630 = F'H14J) Y PH9TJ especificos" . y el método de detección es una hibridación con especificidad por el alelo (ASH) . Tabla 4 --_ . OTL MRCV1 STARS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS Pos. ctg. 745 745 897 897 897 930 930 930 930 930 1018 1018 etg 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 PHO 64, 1 64, 1 66, 0 66 , 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 65, 4 65, 4 Cromosoma 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 ~ "•, E "•~ e D E o z ;¡; ~ N ~ , . <f o M , ;, N '" ;:\, . 'f :z ~ :g ~ , . ;¡;-¡g:g-;%, . 'f ~ M-, m ::1 ~ , . 'f ~ M-, m ::l-;%, . <f-o m ::l-;%, . 'f-'7 ~ M o N ;%, . 'f '"'7 ~ M o N ;%, . 'f-<;>-~ o 8 u ;! ~ N ~-~ , . 'f-o ~ '" N ~--;:; " ~ o ~ '" N ~--;:;, . i o-~ , . ;¡ <>o-~ , . PH7WT e T e G e G G A T P e A e G A PH9TJ e T T A A e e T e x T G T G A En algunas realizaciones, el alelo que se detecta es un alelo favorable que está correlacionado positivamente con la resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada. Como alternativa, el alelo que se detecla puede ser un alelo que está correlacionado con la susceptibilidad a una enfermedad o una resistencia reducida a una enfermedad, y dicho alelo se somete a una selección negativa. Por ejemplo, los alelos pueden someterse a una selección positiva (alelos favorables, por ejemplo, PH7WT y PH9T J (véase la Tabla 5) o negativa (alelos desfavorables, por ejemplo, PH30T, PH890 y PH6KW (véase la Tabla 5) . Tabla 5 aTL MRCV1 STARS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS PASS Pos, ctg, 745 745 897 897 897 930 930 930 930 930 1018 1018 el9 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 203 PHD 64, 1 64, 1 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 66, 0 65, 4 65, 4 Cromosoma 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 ~ •, E..•~ ~ D E o z ~ >Ã?o: " ; :;: N ~ " l' o :b N ~ " l' :z ~ :8 ~ " ; ~ :il :8 ~ " l' ~ M ~ g ;¡; ~ " l' ~ M ~ g ;¡; ~ " l' ~ o ~ g ;¡; ~ ;S " l' ~ ~ "' M o '" '"" ;¡; ~ "' M o ~ " l' ~ 9 ~ ~ 8 o (, ) ;¡;¡: N ~ ~ ~ ;S " l' ~ o :z N ~ ~ ~ " l' M o ~ <D N ~ ~ ~ ;S " <¡ "' '" o ~ ~ " ;¡; '" o ~ ~ " PH7WT Efecto positivo e T e G e G G A T P e A e G A PH9TJ Efecto posi1ivo e T T A A e e T e x T G T G A PH3DT Efecto negativo T e T A A e e T e x T G T A G G PH890 Efecto negativo T e e A A e e T e x T G T A PH6KW Efecto negativo T e T A A e e A T P e A e G A En el caso en que se selecciona más de un marcador, se selecciona un alelo para cada uno de los marcadores; por consiguiente, se seleccionan dos o más alelos, En algunas realizaciones, puede ser posible que un locus marcador tenga más de un alelo ventajoso, y en este caso podrá seleccionarse cualquier alelo_ Ha de apreciarse que la capacidad de identificar loci QTL marcadores que están correlacionados con la resistencia conferida recientemente, la resistencia mei, orada o la susceptibilidad a MRCV provee un método para seleccionar también plantas que tienen loei marcadores favorables. Es decir, puede seleccionarse cualquier planta identificada como poseedora de un locus marcador deseado (por ejemplo, un alelo marcador que está correlacionado positivamente con la resistencia) , al tiElmpo que pueden seleccionarse negativamente las plantas que carecen del loeus, o que tienen un loeus que E~stá correlacionado negativamente con la resistencia. Por consiguiente, en un método, después de la identificación de un loeus marcador, los métodos incluyen la selección (por ejemplo, el aislamiento) de la primera planta o el primer germoplasma de maiz, o la selección de una progenie de la primera planta o el primer germoplasma. En algunas realizaciones, puede cruzarse la primera planta o el primer germoplasma de mai z seleccionado con una segunda planta o un segundo germoplasma de maíz (por ejemplo, un maíz elite o exótíco, dependiendo de las caracteristicas deseadas en la progenie) . De manera similar, en otras realizaciones, si un alelo está correlacionado con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada al MRCV, el método puede incluir introducir el alelo en una segunda planta o germoplasma de malz para prOducir una planta o germoplasma de maíz con una introducción. En algunas realizaciones, la segunda planta o germoplasma de maíz tlpicamente presentara una resistencia reducida al MRCV, en comparación con la primera planta o germoplasma de malz, mientras que la planta o el germoplasma de maíz con la introducción presentarán una resistencia incrementada al MRCV, en comparación con la segunda planta o germoplasma de maíz. Una planta o un germoplasma de maiz con la introducción realizada de acuerdo con estos métodos también constituyen una caracteristica de la invención. (En algunas realizaciones, el alelo favorable introducido es PH7WT/PH9TJ, véase la Tabla 5) . En otros aspectos, se usan varias poblaciones dE~ mapeo para determinar los marcadores ligados de la invención. En una realización, la población de mapeo usada es la población derivada del cruzamiento PH7WTxPH30T o PH9T JxPH890, En otras realizaciones, pueden usarse otras poblaciones. En otros aspectos, se usan diversos tipos de software para determinar los loei marcadores ligados. Por ejempto, en la invención puede usarse TASSEL, MapManager-QTX y GeneFlow. En algunas realizaciones, tal como cuando se usa software en el análisis de ligamiento, la información sobre los alelos detectados (es decir, los datos) se transmite por medios eledrónicos o se almacena por medios electrónicos, por ejemplo, en un medio que puede ser leido por un ordenador. En otros aspectos, se usan varias poblaciones de mapeo para determinar los marcadores ligados que pueden usarse para construir la planta transgénica. En una realización, la pOblación de mapeo usada es la población derivada de los cruzamientos PH7WTxPH30T o PH9TJxPH890. En otras realizaciones, pueden usarse otras poblaciones. En otros aspectos, se usan diversos tipos de software para determinar los loo marcadores ligados. Por ejemplo, en la invención puede usarse TASSEL, MapManager-QTX y GeneFlow. Los sistemas para identificar una planta de maiz de la que se predice que presentara resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada al MRCV también son una caracteristica de la invención. Tlpicamente, los sistemas incluyen un conjunto de cebadores y/o sondas marcadoras configuradas para detectar al menos un alelo favorable de uno o más loo marcadores ligados con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada al MRCV, donde el locus o los loei marcadores se seleccionan entre MZA7588, MZA8381 , MZA3105, MZA482, MZA16531 , MZA14553, MZA4305, MZA625, MZA15451 , MZA9105, MZA11826, MZA15490, MZA16656, MZA2038, MZA2803, MZA18224, MZA2349, MZA564, MZA11066, MZA18180, MZA8442, MZA15563, MZA18036, MZA15264, MZA10384, MZA12874, MZA12454, MZA8926 Y MZA5057, as! como que esté ligado (o en algunas realizaciones, ligado estrechamente, por ejemplo, que no presente una frecuencia de recombinación de m~s de 10%) con estos QTL malrcadores; y además, cualquier locus marcador que esté localizado en los intervalos de QTl cromosómicos, incluyendo los siguientes: (i) MZA8381 Y MZA18180; (ii) MZA4305 V MZA2803; (iii) MZA 15490 Y MZA2038; (iv) bnlg1458b y umc1 261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261a; y (viii) bnlg1327 y umc1262a. En algunas realizaciones, los QTL marcadores preferidos a usar se seleccionan entre MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826y MZAB105. Cuando se desea un sistema que efectúe la detección o la correlación de marcadores, el sistema también podrá incluir un detector configurado para detectar una o más señales de salida del conjunto de sondas o cebadores marcadores, o un amplir:ón de éstos, de modo de ideotificar la presencia o la ausencia del alelo; y/o instrucciones de sistema que correlacionan la presencia la o ausencia del alelo favorable con la resistencia predicha. la configuración precisa del delector dependerá del tipo de marca usada para detectar el alelo marcador. l as realizaciones típicas incluyen detectores lumlnicos, deteclores de radiaclividad y semejanles. la detección de emisiones luminosas o de otras marcas de sondas indica la presencia o la ausencia de un alelo marcador. De forma similar, la forma precisa de las instrucciones puede variar dependiendo de los componentes del sistema, por ejemplo, pueden estar presentes como software del sistema en una o más unidades integradas del sistema, o pueden estar presentes en uno o más ordenadores o medios que pueden ser leidos por ordenadores conectados operativamente con el detector. En una realización tipica, las instrucciones del sistema incluyen al menos una tabla de referencia que incluye una correlación entre la presencia o la ausencia del alelo favorable y la resistencia conferida recientemente, la resistencia mejorada o la susceptibilidad predicha. En algunas realizaciones, el sistema puede estar compuesto por elementos separados, o puede estar integrado en una única unidad para facilitar la detecciÓn de los alelas marcadores y realizar las correlaciones entre los marcadores y los caracteres de resistencia. En algunas realizaciones, el sistema también puede incluir una muestra, por ejemplo, ADN genómico, ADN genómico amplificado, AONc, AONc amplificado, ARN, o ARN amplificado de maíz o de un tejido vegetal seleccionado de maiz. los conjuntos de elementos también son una característica de la invenciÓn. Por ejemplo, un conjunto de elementos puede incluir cebadores o sondas apropiados para detectar loci marcadores ligados COn la resistencia e instrucciones para usar los cebadores o las sonda!> para detectar los loci marcadores y correlacionar los loci con la resistencia al MRCV prediCha. Además, los conjuntos de elementos pueden incluir materiales de envasado para alOjar las sondas, los cebadores o las instrucciones, controles, tales como reacciones de amplificación de control , que incluyen sondas, cebadores o ácidos nudeicos molde para realizar las amplifICaciones, marcadores de tamaño molecular, o semejantes. Definiciones Antes de describir la presente invención en detalle, ha de comprenderse que esta invención no se limita a realizaciones particulares, sino que, por supuesto, puede variar. También ha de comprenderse que la terminologfa usada en la presente documentación tiene el objeto de describir realizaciones particulares solamente, y no ha de interpretarse como limitativa de la invención. Como se las usa en esta memoria descriptiva yen las reivindicaciones adjuntas, los términos en sin!Jular y las formas en singular #un", #uno" y "el", por ejemplo, incluyen las referencias en plural, a menos que el contenido indique claramente lo contrario. Por consiguiente, por ejemplo, una referencia a #planta', "la planta" o ·una planta' también incluye una pluralidad de plantas; también, dependiendo del contexto, el uso del término ·planta" también puede incluir la progenie de la planta, similar o idéntica desde el punto de vista genético; el uso del término "un acido nucleico" opcionalmente incluye, en términos prácticos, mucilas copias de la molécula de ácido nucleico; de forma similar, el término ·sonda" Opcionalmente (y lipicamente) abarca mucilas moléculas de sonda similares o idénticas. A menos que se indique lo contrario, los ácidos nudeicos se escriben de izquierda a derecha en la orientación 5' a 3'. los rangos numéricos mencionados en la memoria descriptiva induyen los números que definen el rango, e incluyen cada número entero o cualquier fracción no e, ntera dentro del rango definido. A menos que se los defina de otro modo, todos los términos técnicos y cientlficos usados en la presente documentación tienen el mismo significado que le daun experto en la materia al qUH concierne la invención. Aunque puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a aquellos d~;$critos en la presente documentaciÓn en la practica para evaluar la presente invenciÓn, los materiales y los rnétodos preferidos son aquellos descritos en la presente documentación. Al describir y reivindicar la presente invención, se usará la terminologia que se indicará a continuación, de acuerdo con las definiciones correspondientes. Una ·planta" puede ser una planta completa, OJalquiE~r parte de ésta, o un cultivo de células o tejidos derivados de una planta. Por consiguiente, el término ·planta" puede designar cualquiera de los siguientes elementos: plantas completas, componentes u órganos de plantas (por ejemplo, hojas, tallos, raíces, etcétera) , tejidos vegetales, semillas, células vegetales y/o progenie de éstas. Una célula vegetal es una célula de una planta, tomada de una planta o derivada a través del cultivo de una célula tomada de una planta. Por consiguiente, el término ' planta de maíz" induye plantas de maíz completas, células vegetales de maiz, protoplastos de plantas de maiz, Células vegetales de maíz o cultivos de tejidOS de maíz a partir de los cuales pueden regenerarse plantas de maíz, callos de plantas de maíz, cúmulos de plantas de maiz y células vegetales de maíz que están intactas en las plantas de maíz o en partes de las plantas de maiz, tales como semillas de maiz, vainas de maíz, flores de maíz, cotiledones de maiz, hojas de maíz, tallos de malz, retoños de maíz, rajces de maíz, ápices de raices de maíz y semejantes. El "germoplasma~ designa el material genético de un individuo (por ejemplo, una planta) , de un grupo de individuos (por ejemplo, una línea vegetal, una variedad o una familia) o de un don derivado de una línea, una variedad, una especie o un cultivo. El germoplasma p\Jede ser parte de un organismo o una célula, o puede estar separado del organismo o la célula. En general, el ge, rmoplasma provee material genético con una composidón molecular específica que provee una base fisica para algunas o todas las cualidades hereditarias de un organismo o un cultivo celular. Como se usa en la presente documentación, el germoplasma incluye células, semillas o tejidos a partir de los cuales pueden desmrollarse nuevas plantas, o partes de plantas, tales como hojas, tallos, polen o células, que pueden cultivarse pl1ra obtener una planta completa. El término "alelo" designa una de dos o más secuencias de nucleótidos diferentes halladas en un locus específico. Por ejemplo, puede haber un primer alelo en un cromosoma, al tiempo que hay un segundo alelo en un segundo cromosoma homólogo, por ejemplo, como es el caso para los distintos cromosomas de un individuo heteocigoto, o entre distintos individuos homocigotos o heterocigotos en una población. Una -alelo favorable" es el alelo en un locus particular que confiere o contribu~fe a un fenotipo deseable desde el punto de vista agrícola, por ejemplo, resistencia al MRCV, o como alternativa, es un alelo que permite la identificación de plantas susceptibles que pueden ser eliminadas de un programa de cultivo o siembra. Un alelo favorable de un marcador es un alelo marcador que segrega con el fenotipo fal/orable, o como alternativa. segrega con el fenotipo de las plantas susceptibles, por lo que proporciona el benefido de permitir la identificación de plantas susceptibles a la enfermedad. Una forma alélica favorable de un se!) mento cromosOmico es un segmento cromosómico que incluye una secuencia de nucleótidos que contribuye ni desempel'lo agricola superior en uno o más loci genéticos localizados fisicamente en el segmento cromosómieo. La "frecuencia de un alelo" designa la frecuencia (la proporción o el porcentaje) con que está presente ni alelo en un locus en un individuo, en una linea o una población de lineas. Por ejemplo, para un alelo "A", los individuos diploides de genotipo "AA", "Aa", o "aa" tienen frecuencias de alelos de 1, 0. 0, 5 ó 0, 0, respectivamente. Es posible estimar la frecuencia del alelo en una linea promediando las frecuencias de los alelos de una rnuestra de individuos de dima linea. De forma similar, es posible calcular la frecuencia del alelo dentro de UM población de lineas promediando las frecuencias de los alelos de las lineas que componen la población. P~lra una poblaCión con una cantidad finita de individuos o lineas, puede expresarse la frecuencia de un alelo como un conteo de individuos o lineas (o cualquier otra agrupación específica) que contienen el alelo. Un alelo presenta una correlación "positiva" con un carácter cuando esta ligado a él, y cuando la presencia del alelo es un indicador de que el caracter o la fornla del carader deseado se hallarán en una planta que comprenda el alelo. Un alelo presenta una correlación negativa con un carácter cuando esta ligado a él, y cuando la presencia del alelo es un indicador de que el carácter o la forma del carácter deseado no se hallarán en una planta que comprenda el alelo. Un individuo es "homocigoto' si el individuo tiene solamente un tipo de alelo en un locus dado (por ejemplo, un individuo diploide tiene una copia del mismo alelo en un locus de cada uno de los dos cromosomas homólogos) . Un individuo es "heterocigoto' si hay más de un tipo de alelo presente en un locus dado (por ejemplo, un individuo diploide con una copia de cada uno de los dos alelos diferentes) . El término "l1ºmogeneidad" indica que los miembros de un grupo tienen el mismo genotipo en uno o más loei especificos. En contraste, se usa el término "l1eterogeneidad" para indicar que los individlJos en el grupo tienen genotipos diferentes en uno o más loci específicos. Un "Iocus' es una región cromosómica en la que sn halla un ácido nucleico polimórfico, un determinante de carácter, un gen o un marcador. Por consiguientEt, por ejemplo, un "Iocus genético' es una localización cromosómica especifica en el genoma de una especie puede hallarse un gen especifico. EL término "Iocus de caracter cuantitativo" o "QTL' hace referencia a un locus genético polimOrfico con al menos un alelo que está correlacionado con la expresión diferencial de un carácter fenotipico en al menos un antecedente genético, por ejemplo. en al menos una población de cultivo o progenie. Un QTL puede actuar a través de un único mecanismo genético o a través de IJn mecanismo poligénico. Los términos "marcador". "marcador molecular". "áCido rucleico marcador" y "Iocus marcador" designan una secuencia de nucleótidos, o el producto cocliflcado por ella (por ejemplo. una protelna) , usada como punto de referencia para identificar un locus ligado. Un marcador puede derivar de una secuencia de nucleótidos genómica o de secuencias de nucleótidos expresada$ (por ejemplo. de un ARN separado o un ADNc) . o de un polipéptido codificado. El término también hace referencia a secuencias de ácidos nucleicos complementarias o adyacentes a las secuencias marcadoras. tales corno los ácidos nucleicos usados como sondas o pares de cebadores capaces de amplificar la secuenCia marcadora. Una ·sonda marcadora" es una secuencia o una molécula de ácido nucleico que puede usarse para identificar la presencia de un locus marcador. por ejemplo. un ácido nucleico sonda que es complementario con 1<1 secuencia de un locus marcador. Como alternativa, en algunos aspectos. una sonda marcadora designa una sonda de cualquier tipo que es capaz de distinguir (es decir, a nivel del genotipo) el alelo particular presente en un locus marcador. Los ácidos nudeicos son -complementarios~ cuando hibridan específicamente en soludón, por ejemplo, de acuerdo con las reglas de apareamiento de bases de Watson-Crick. Un "Iocus marcador" es un locus que puede usarse para rastrear la presencia de un segundo locus ligado, por ejemplo, un locus ligado que codifica o contribuye a la expresión de un caráder fenotipico. Por ejemplo, puede usarse un locus marcador para monilorear la segregadón de alelos en un locus, tal como un QTL, ligados genética o fisicamente al locus marcador. Por consiguiente, un "alelo marcador", como alternativa un "alelo de un locus marcador", es uno de una pluralidad de secuendas de nucleótidos polimórficas halladas en un tocus marcador en una población que presenta polimorfismo en ellocus marcador. En algunos aspectos, en la presente invención se proveen loci marcadores que están correlacionados con la resistencia al MRCV en maíz. Se espera que cl:lda uno de los marcadores identificados esté en proximidad física y genética cercana (lo que resulta en una asad ación fisica y/o genética) con un elemento genético, por ejemplo, un QTl, que contribuye a la resistencia. los "marcadores genéticos~ son ácidos nucleicos que presentan polimomsmo en una población, donde los alelas de dichos marcadores pueden detectarse y distinguirse empleando uno o más métodos analíticos, por ejemplo, RFlP, AFlP, isozimas, SNP, SSR. y semejantes. El término también hace referencia a secuencias de ácidos nucleicos complementarias con las secuencias genómicas, tales como los ácidos nucleicos usados como sondas. los marcadores que corresponden a polimorfismos genéticos entre los miembros de una población pueden detectarse utilizando métodos bien establecidos en la técnica. Éstos incluyen, por ejemplo, los métodos de amplificación especifica de secuencias basados en PCR, la detección de polimomsmos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) , la detección de marcadores de isozimas, la detección de polimorfismos de polinucleótidos por hibridación específica de alelos (ASH) , la detección de secuencias amplificadas variables en el genoma de la planta, la detección de la replicación autosostenida de secuencias, la detección de repeticiones de secuencias simples (SSR) , la detección de pOlimorfismos de nudeótidos individuales (SNP) , o la detección de polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFlP) . También se conocen métodos bien establecidos para detectar marcas de secuencias expresadas (EST) y marcadores SSR derivados de secuencias EST y AON polimórfico amplificado al azar (RAPO) . Un "mapa genético' es una descripción de las rel~lciones de ligamiento genético entre loci en uno o más cromosomas (o grupos de ligamiento) en una especie dada, generalmente ilustrada en una forma diagramática o tabular. El "mapeo genético~ es el proceso que comprende definir las relaciones de ligamiento entre los loci mediante el uso de marcadores genéticos, poblaciones que segregan los marcadores y principios de frecuencia de recombinación convencionales. Una "localización en un mapa genético' es una localización en un mapa genético respecto de los marcadores genéticos circundantes, en el mismo grupo de ligamiento en el que puede hallarse un marcador específico para una especie dada. En contraste, un "mapa físico' del genoma hace referencia a las distancias absolutas (por ejemplo, medidas en pares de bases o fragmentos genéticos aislados y superpuestos contiguos, por ejemplo, contigs) . Un ma¡pa físico del genoma no tiene en cuenta el comportamiento genético (por ejemplo, las frecuencias de recombinaci (~n) entre distintos puntos en el mapa físico. Una "frecuencia de recombinación genética" es la frecuencia de un evento de cruzamiento (recombinación) entre dos loci genéticos. Puede observarse la frecuencia de recombinación siguiendo la segregación de marcadores y/o caracteres después de la meiosis. Una frecU (~cia de recombinación genética puede expresarse en centimorgans (cM) , donde un cM es la distancia entre dos marcadores genéticos que presentan una frecuenCia de recombinación de 1% (es decir, ocurre un evento de cruzamiento entre estos dos marcadores una vez cada 100 divisiones celulares) . Como se usa en la presente documentación, el término "ligamiento" describe el grado con el que un locus marcador está "ligado' con otro locus marcador o con :algún otro locus (por ejemplo, un locus de resistencia) . Como se usa en la presente documentación, el "equilibrio de ligamiento' describe una situación en la que dos marcadores segregan en forma independiente, es decir, se separan al azar entre la progenie. Los marcadores que presentan equilibrio de ligamiento se consideran no ligamiento (estén o no en el mismo cromosoma) . Como se usa en la presente documentación, el "desequilibrio de ligamiento-describe una situación en la que dos marcadores segregan de una forma no azarosa, es decir, tienen una frecuencia de recombinación menor que 50% (y por definición. están separados por menos de 50 cM en el mismo grupo de aSociación) . los marcadores que presentan desequilibrio de ligamiento se consideran ligados. Este ligamiento ocurre cuando el locus marcador y un locus asociado se hallan juntos en la progenie de las plantas con mayor frecuencia que aquella con que se los halla separados. Como se usa en la p, resente documentación, el ligamiento puede ser entre dos marcadores, o como alternativa, entre un marcador y un fenotipo. Un locus marcador puede estar asociado (ligado) a un carácter, por ejemplo, un locus marcador puede estar asociado con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada a un patógeno de plantas cuando el locus marcador se halla en desequilibriO de ligamiento con el carácter de resistencia. El grado de ligamiento entre un marcador molecular y un carácter fenotlpico se mide, por ejemplo, como una probabilidad estadística de ca-segregación de dicho marcador molecular con el fenotipo. Como se usa en la presente documentación, la relacilM1 de ligamiento entre un marcador molecular y un fenotipo se proporciona como una "probabilidad" o una "probabilidad ajustada~. El valor de probabilidad es la probabilidad estadística de que la combinación particular de un feinotipo y la presencia o la ausencia de un alelo marcador particular se dé por azar. Por consiguiente. cuanto menor es el valor de probabilidad, mayor es la probabilidad de que un fenotipo y un marcador particular co-segreguen. En algunos aspectos, el valor de probabilidad se considera "significativo' o "no significativo~. En algun~ls realizaciones, un valor de probabilidad 0, 05 (p = 0, 05, o un 5% de probabilidad) de apareamiento al azar se considera una indicación significativa de co-segregación. Sin embargo, la presente invención no se limita a esta referencia en particular, y una probabilidad aceptable puede ser rualquier probabilidad menor que 50% (p = 0, 5) . Por ejemplo, una probabilidad significativa puede ser menor que 0, 25, menor que 0, 20, menor que 0, 15 o menor que 0, 1 . El término "ligados físicamente" se usa algunas veces para indicar que dos loci, por ejemplo, dos loo marcadores, están físicamente presentes en el mismo cromosoma. Ventajosamente, los dos loci están ligados en proximidad cercana, de modo que la recombinación entre los pares de cromosomas homólogos no afecta los dos loci durante la meiosis con gran frecuencia. por ejemplo. de modo que los loci asociados co-segregan al menos aproximadamente 90% de las veces, por ejemplo, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99, 5%, 99, 75% o más de las veces. En esta solicitud, la frase "ligado estrechamente" denota que la recombinación entre dos loei asoeiados ocurre con una frecuencia igualo menor que aproximadame, nte 10"A. (es decir, están separados en un mapa genétioo por no más de 10 cM) . En otros términos, los loo ligados estrechamente co-segregan al menos 90% de las veces. Los loo marcadores son especialmente útiles en la presente invención cuando demuestran una probabilidad de co-segregación (ligamiento) significativa con un carácter deseado (por ejemplo, resistencia a patógenos) . Por ejemplo, en algunos aspedos, estos marcadores pueden denominarse marcadores QTL ligados. En otros aspectos, los marcadores moleculares espeCialmente útiles son aquellos marcadores ligados o ligados estrechamente. En algunos aspectos, el ligamiento puede expresarse como ruatquier límite o rango deseado. Por ejemplo, en algunas realizaciones, dos loo ligados son dos loci que están separados por menos de 50 cM de unidades de mapa. En otras realizaciones, los loo ligados son dos loei que están separados por menos de 40 cM. En otras realizaciones, dos loo ligados son dos loei que están separados por menos de 30 cM. En otras realizaciones, dos loo ligados son dos loo que están separados por menos de 25 cM. En otras realizaciones, dos loo ligados son dos loei que están separados por menos de 20 cM. En otras realizaciones, dos loo ligados son dos loei que están separados por menos de 15 cM. En algunos aspectos, es ventajoso definir un rango de ligamiento fijo, por ejemplo, entre 10 Y 20 cM, o entre 10 y 30 cM, o entre 10 Y 40 cM. Cuanto más estrechamente está ligado un marcador con un segundo locus, se convierte en un mejor indicador para dicho segundo lorus. Por consiguiente, en una realización, los loci ligados estrechamente, tales como un locus marcador y un segundo locus presentan una ·frecuencia de recombinación entre loci de 10% o menor, preferiblemente aproximadamente 9% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 8% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 7% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 6% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 5% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 4% o menor, aún más preferiblemente aproximadamente 3% o menor, y aún más preferiblemente aproximadamente 2% o menor. En realizaciones muy preferidas, los loci relevantes presentan una frecuencia de recombinación de aproximadamente 1% o menor, por ejemplo. aproximadamente 0, 75% o menor, más preferiblemente aproximadamente 0, 5% o menor, o aún más preferiblE, menle aproximadamente 0, 25% o menor. Se dice que dos loo localizados en el mismo cromosoma, a una distancia que permite la recombinación entre ambos a una frecuencia menor que 10% (por ejemplo, aproximad:amente 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0, 75%, 0, 5%, 0, 25% o menor) , también están "próximos" uno del otro. En algunos casos, dos marcadores diferentes pueden tener las mismas coordenadas en un mapa !}enético. En este caso, los dos marcadores estan en una proximidad tan cercana uno con otro que la recombin:::Ición entre ambos ocurre con una frecuencia tan baja que no puede detectarse. Cuando se hace referencia a la relación entre dos elementos genéticos, tal como un elemento genético que contribuye a la resistencia y un marcador proximal, el ligamiento de "acoplamiento' de fase indica el estado en que el alelo "favorable" en ellocus de resistencia está ligado fisicamente a la misma cadena cromosómica que el alelo "favorable" del locus marcador asociado respectivo. En el acoplamiento de fases, ambos alelas favorables se heredan juntos en la progenie que hereda la caden;a cromosómica. En el ligamiento de fases de "repulsión", el alelo "favorable" en ellocus de interés (por ejemplo, un QTL de resistencia) está asociado físicamente a un alelo "desfavorable" en el locus marcador proximal, y los dos alelas "favorables" no se heredan juntos (es decir, los dos loa están "fuera de fase" uno de otro) . Como se los usa en la presente documentación, los términos "intervalo cromosómico" o "segmento cromosómico· designan una extensión lineal contigua de ADN genómico que reside in planta en un único cromosoma. Los elementos genéticos o los genes localizados en un mismo intervalo cromosómico están asociados físicamente. El tamai'lo de un intervalo crornosómíco no está particularmente limitado. En algunos aspectos, por ejemplo, en el contexto de la presente invención, generalmente los elementos genéticos localizados en un mismo intervalo cromosórnico también están ligados genéticamente, típicamente con una distancia de recombinación genética, por ejemplo, menor o igual que 20 cM, o como alternativa, menor o igual que 10 cM . Es decir, dos elementos genéticos en un mismo intervalo cromosómico se recombinan con una freruencia menor o igual que 20% o 10%. En un aspecto, cualquier marcador de la invención está ligado (genética o físicamente) con cualquier otro marcador que esta a una distancia de 50 cM o menor. En otro aspecto, cualquier marcador de la invención está ligado estrechamente (genética o físicamente) con cualquier otro marcador que esta en proximidad cercana, PO ( ejemplo, a una distancia de 10 cM o menor. Dos marcadores ligados estrechamente en el mismo cromosoma pueden estar localizados a una distancia de 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0, 75, 0, 5 ó 0, 25 cM, o menor. La frase "enfermedad causada por el virus del mal de Rio Cuarto" o "enfermedad causada por el MRCV" hace referencia a una enfermedad causada en una planta por una infección de MRCV. La "resistencia conferida recientemente" o la "resistencia mejorada" al MRCV en una planta de maíz es una indicación de que la planta de maíz se ve menos afe·Clada en su rendimiento, su capacidad de supervivencia u airas caracleristicas agríCOlas relevantes cuando se introducen los agentes causales de la enfermedad. la resistencia es un término relativo e indica que la planta infectada produce un menor rendimiento de malz que otra planta mas susceptible tratada de manera similar. Vale decir, las condiciones causan una disminución atenuada en la supervivencia y/o el rendimiento de la planta en una planta de maiz resistente, en comparación con una planta de malz susceptible. Un experto en la materia ha de apreciar que la resistencia de una planta de maíz al MRCV varía ampliamente, puede represenlar un espectro de fenotipos mas resis·lentes o menos resistentes, y puede variar dependiendo de la severidad de la infección. Sin embargo, mediante lel observación simple, un experto en la materia ha de poder determinar la resistencia o la susceptibilidad relativa de distintas plantas, lineas de plantas o familias de plantas al MRCV, y ademas, también han de poder reconocer las graduaciones fenotlpicas de la "resistencia" (se presenta un ejemplo de un sistema de calificaCión en el Ejemplo 7 más adelante) . Como se usa en la lécnica, la "resistencia" algunas veces se denomina "resistencia general", "resistencia que disminuye la tasa" o "resistencia parcial". El termino "cruzado" O "cruzamiento", en el contexto de esta invención, designa la fusión de gametos por polinización para producir progenie (por ejemplo, células, semillas o plantas) . El lermino comprende cruzamientos sexuales (la polinización de una planta por otra) y autocruzamientos (auto-polinización. por ejemplo, cuando el polen y el óvulo pertenecen a la misma planta) . El término "introducción" designa la transmisión de un alelo deseado de un locus genético de un antecedente genético a otro. Por ejemplo, la introducción de un alelo deseado en un locus especifico puede transmitirse a al menos una progenie mediante el cruzamiento sexual entre dos progenitores de la misma espeCie, donde al menos uno de los progenitores tiene el alelo deseado en su genoma. Como alternativa, por ejemplo, puede darse la transmisión de un alelo mediante la recombinación entre dos genomas donantes, por ejemplo, en un protoplasto fusionado, donde al menos uno de los protoplastos donantes liene el alelo deseado en su genoma. El alelo deseado puede ser, por ejemplo, un alelo ~;eleccionado de un marcador, un Oll, un transgen, o semejantes. En cualquier caso, la descendencia que comprende el alelo deseado puede retrocruzarse repetidamente con una línea que tiene un fondo gene'tico deseado. y puede seleccionarse el alelo deseado para obtener la fijación del alelo en un fondo genético seleccionado. Una "linea" o una "cepa" es un grupo de individuos con progenitores idénticos que generalmente se endocrian en algún grado, y que generalmente son homocigotos y homogéneos en la mayor parte de sus loci (isogénicos o casi isogénicos) . Una "sublinea" designa un subconjunto endocriado de descendientes que son genéticamente distintos de otros subconjuntos endocriados de forma similar que descienden del mismo progenitor. Una "línea ancestral" es una línea progenitora usada como fuente de genes, por ejemplo, para el desarrollo de lineas elite. Una ' población ancestral" es un grupo de ancestros que han contribuido a la mayor parte de la variación genélica usada para desarrollar lineas elite. los "descendientes" son la progenie de los ancestros, y pueden estar separados de sus ancestros por muchas generaciones de cruzamiento. Por ejemplo, las lineas elite son los descendientes de sus ancestros. Una "estructura de pedigri" define la relación entre un descendiente y cada ancestro que da lugar a dicho descendiente. Una estructura de pedigri puede abarcar una o mas generaciones, y describe las relaciones entre el df:scendiente y sus padres, sus abuelos, sus bisabuelos, etcétera. Una "linea elite" o una "cepa elite" es una linea superior desde el punto de vista agr¡cola, que es el resultado de muchos ciclos de cruzamiento y selección de desempei'lo agrícola superior. Hay numerosas Irneas elite disponibles y conoCidas por aquellos expertos en la materia del cultivo de maíz. Una "población elite" es un Conjunto de individuos º lineas elite que puede usarse para representar el estado de la tecnica en términos de genotipos superiores desde el punto de vista agrícola de una especie de cultivo dada, tal como el maíz. De forma similar, un "germoplasma elite" o una cepa elite de germoplasma es un germoplasma superior desde el punto de vista agricola, tipícamente derivado y/o capaz de dar lugar a una planta con un desempeño agrlcola superior, tal como una línea elite de maiz existente o recién desarrollada. En contraste, una "cepa de maíz exótica" o un "germoplasma de maíz exótico" es una cepa o un germoplasma derivado de un maiz Que no pertenece a una linea o una cepa de gemoplasma elite de maíz. En el cootexto de un cruzamiento entre dos plantas o cepas de germoplasma de maiz, un germoplasma exótico no está relacionado estrechamente con la descendencia del g4~rmoplasma elite con el Que se cruza. Más comunmente, el germoplasma exótico no deriva de ninguna linea elit, e de maiz, sino Que se selecCiona para introducir nuevos elementos genéticos (típicamente nuevos alelos) en un programa de desarrollo. El término "amplificar", en el contexto de la amplificadón de áddos nudeicos, comprende cualquier proceso en el que se producen copias adicionales de un ácido nuc~eico selecdonado (o una forma transcripta de éste) . los métodos de amplificación típicos incluyen varios mét, :xlos de replicación basados en polimerasa, incluyendo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , métodos mediados por ligasa, tales como la reacción en cadena de la ligasa (LCR) , y métodos de amplificación basada en ARN polimerasa (por ejemplo, por transcripción) . Un ~amplicón' es un ácido nucleico amplificado, por ejemplo, un acido nucleico producido mediante la amplificación de un ácido nucleico molde por un método de amplificación disponible (por ejemplo, PCR, lCR, transcripción o semejantes) . Un "aCido nudeico genómico' es un acido nucleico QU4~ corresponde en secuencia a un ácido nudeico hereditario en una célula. Los ejemplos comunes incluyen ADN genómico nuclear y amplicones de este. En algunos casos, un ácido nucleico genómico es diferente de un ARN que ha sufrido "splicing", o un ADNc correspondiente, debido a Que el ARN Que ha sufrido ' splicing" o el ADNc han sido procesados, por ejemplo, por la maquInaria de ~splicing", para retirar los intrones. Los aados nudeícos genómicos opcionalmente comprenden secuencias no transcritas (por ejemplo, secuencias estructurales crornosómicas, regiones promotoras o regiones potenciadoras) y/o no traducidas (por ejemplo, intrones) , mientraB que el ARN separado/ADNc típicamente no contiene secuencias no transcritas o ¡ntrones. Un 'ácido nudeico molde" es un ácido nudeico que sirve como molde en una reacción de amplificación (por ejemplo, una rea.::ción de amplificación basada en polimerasa, tal como la PCR, una reacción de amplificación basada en ligasa, tal oomo la LCR, una reacción de transcripción, o semejantes) . Un ácido nudeico molde puede ser d, ~ origen genómico, o como alternativa puede derivar de secuencias expresadas, por ejemplo, un ADNc o una EST. Un "acido nucleico exógeno' es un ácido nucleico que no es nativo de un sistema especifico (por ejemplo, un germoplasma, una planta o una variedad) , respedo de su secuencia, su posición genómica o ambos. Como se los usa en la presente documentación, los términos "exógenos" o "heterólogos' , aplicados a polinucleótidos o polipéptidos, típicamente hacen referencia a moléculas Que han sido introducidas artificialmente en un sistema biológico (por ejemplo, una célula vegetal, un gen vegetal, una especie o una variedad vegetal particular, o un aomosoma vegetal estudiado) , que no son nativas respecto del sistema biológico particular. Los términos pueden indicar que el material relevante está originado en una fuente distinta de una fuente de ocurrencia natural, o puede designar moléculas que tienen una configuración, una localización genética o una disposición de partes no natural. En contraste, por ejemplo, un gen "nativo" o "endógeno" es un gen que no contiene elementos de ácidos nudeicos codificados por fuentes distintas del aomosoma o de otro elemento genetico con el cual se halla normalmente en la naturaleza. Un gen, un transcrit, :) o un polipéptido endógeno es codificado por su locus cromosómico natural, y no se introduce artificialmente en la célula. El término "recombinante", en referencia a un acido nucleico o un polipéptido, indica que el material (por ejemplo, un áddo nudeico recombinante, un gen, un polinudeólido o un polipéptido) ha sido alterado por la ¡ntervendón humana. Generalmente, la disposiCión de las partes de una molécula recombinante no es una configuración nativa, o la secuencia primaria del polinude6tido o el polipéptido recombinante ha sido manipulada de algun modo. La alteración para proporcionar el material recombinante puede efectuarse sobre el material dentro o fuera de su ambiente o estado natural. Por ejemplo, un ácido nudeioo de ocurrenda natural se convierte en un ácido nucleico recombinanle si es alterado, o si se transcriboe a partir de un ADN Que ha sido alterado, por medio de la intervención humana sobre la célula en la que se origina. Un marco abierto de lectura de la secuencia de un gen es recombinante si dicha secuencia de nudeólidos ha sido elrtraida de su contexto natural y clonada en cualquier tipo de vector de ácido nucleico artificial. Los protocolos y los reactivos para producir moléculas recombinantes, especialmente ácidos nudeicos recombinantes, son comunes y de rutina en la técnica. En una realización, puede crearse un cromosoma artificial para insertarlo en plantas de maíz de acuerdo con cualqUier método conocido en la técnica (por ejemplo, procesos de transferencia directa, tales como, por ejemplo, captación de ADN inducida por PEG, fusión de protoplastos, microinyeCCión, eleclroporación y bombardeo con microproyectiles) . Un cromosoma artificial es un trozo de ADN que puede replicarse de manera estable y segregar junto con los cromosomas endógenos. Tiene la capacidad de alojar y expresar genes heterólogos insertados en él. La integración del ADN heterólogo en la megarregión de replicación (sitio de inicio de la replicación primario de los centró meros) o cerca de el inicia una amplificación a gran escala de segmentos cromosómioos con un tamal"io del orden de las megabases, lo que resulta en la formación de cromosomas de novo. Véase, por ejemplo, la Patente de los EEUU Nº 6077697, incorporada en la presente documentación a modo de referencia. El término recomblnante también puede hacer referencia él un organismo que alojél material recombinante, por ejemplo, una planta que comprende un ácido nucleic.::. recombinante se considera una planta recombinante. En algunas realizaciones, un organismo recombinante es un organismo transgénico. El término "introducido", en referencia a la translocalción de un ácido nucleico heterólogo o exógeno en una célula, hace referencia a la incorporación del ácido nucleico en la célula usando cualquier metodología. El término comprende métodos de introducción de ácidos nudeicos tales como "transfección", "transformación" y "transducción~. Como se usa en la presente documentación, el término "vedor" hace referencia a polinudeótidos u otras moléculas que transfieren segmentos de ácidos nucleicos a una célula. Algunas veces se usa el término "vehlculo" indistintamente con "vector". Un vedar opcionalmente comprende partes que median en el mantenimiento del vector y permiten el uso que se pretende de él (por ejemplo, secuencias necesarias para la replicación, genes que imparten resistencia a drogas o antibióticos, un sitio de donación múltiple o elementos promotoreslpotenciadores unidos operativamente que permiten la expresión de un gen d onado) . los vectores comúnmente derivan de plásmidos, bacteri6fagos o virus vegetales o animales. Un 'vector de donación". un "vedor de transporte" o un "vector de subclonación" contienen partes unidas operativamente que facilitan los pasos de subclonación (por ejemplo, un sitio de donación múltiple que contiene múltiples sitios de restricción con endonudeasas) . El término "vector de expresión", como se usa en la presente documentación, hace referencia a un vector que comprende secuencias polinucleotrdicas unidas operativa mente que facilitan la expresión de una secuencia codificante en un organismo huésped particular (por ejemplo, un vector de expresión en bacterias o un vector de expresión en plantas) . Las secuencias polinuCleoUdicas que facilitan la expresión en procariotas tlpicamente incluyen, por ejemplo, un promotor, un operador (opcional) y un sitio de unión a ribosomas, comúnmente con olras secuencias. las células eucariotas pueden U!>ar promotores, potenciadores, sei'\ales de terminación y poliadenilación, y otras secuencias generalmente diferentes de aquellas usadas por los procariotas. El término "planta transgénica" hace referencia a una planta que comprende en sus células un polinudeótido heterOlogo. En general, el polinudeótido heterólogo se integra en forma estable en el genoma, de modo que el polinucteótido pasa a las generaciones sucesivas. El polinUCleótido heterólogo puede estar integrado en el genoma solo o como parte de un cassette de expresión recombinante. "Transgénico" se usa en la presente documentación para designar cualquier célula, linea celular, callo, tejido, parte de planta o planta cuyo genotipo ha sido alterado por la presencia de un ácido nucleico heterólogo, induyendo aquellos organismos o células transgénicas alteradas inicialmente de este modo, élSi como aquellas creadas por medio de cruzamientos o propagación asexual a partir del organismo o la célula transgénica inicial. El término "transgénico", como se usa en la presente documentación, no comprende la alteración del genoma (cromosómico o extra-cromosómico) medi;:¡nte el uso de métodos de cultivo de plantas c::onvencionales (por ejemplo, cruzamientos) o sucesos de ocurrencia natural, tales como fertilización cruzada al azar, infección por virus no recombinantes, transformación por bacterias no recombinantes, transposición no recombinante o mutación espontánea. la ~donación posicional" es un procedimiento de clonación en el que se identifica y aIsla un ácido nucleico diana sobre la base de su proximidad genómica con un á (~do nudeico marcador. Por ejemplo, un clan de un ácido nucleico genómico puede incluir una parte o la totalid::1Id de dos o más regiones cromosómicas próximas una de otra. Si puede usarse un marcador para identificar el don de ácido nucleico genómico a partir de una biblioteca genómica, pueden usarse métodos convencionales, tatles como subclonación o secuenciación para identificar y/o aislar subsecuencias del don localizadas cerca del ma.rcador. Un áddo nucleico especIfico "deriva de" un ácido nudeico dado cuando se construye usando la secuencia del ácido nudeico dado, o cuando el ácido nudeico especifico se construye usando el áddo nudeico dado. Por ejemplo, un AONc o una EST deriva de un ARNm expresado. El término "elemento genético" o "gen" hace referencia a una secuencia de AON hereditaria, es decir, una secuencia genómica, con significadón funcional. El término "gen" también puede usarse, por ejemplo, para designar un AONc y/o un ARNm codificado por una secuencia genómica, asi como la secuencia genómica en sI. El término "genotipo" designa la constitución genética de un individuo (o un grupo de individuos) en uno o más loci genéticos, en oposición al carácter observable (el fenotipo) . El genotipo se define a través de los alelas de uno o más loci que ha heredado el individuo de sus progenitores. El término genotipo puede usarse para hacer referencia a la constitución genética de un individuo en un único lacus, en múltiples lod, o más generalmente, puede usarse el término genotipo para hacer referencia a la composición genética de un individuo en todos los genes de su genoma. Un "haplotipo" es el genotipo de un individuo en una pluralidad de loci genéticos. Típicamente, los loci genéticos descritos por un haplotipo están asociados física y genélicamente, es decir, estan en el mismo segmento cromosómico. los términos "fenotipo", o "carácter fenotipico· o ·carácter" hacen referencia a uno o más caracteres de un organismo. El fenotipo puede observarse a simple vista o con cualquier otro medio de evaluación conocido en la tecnica, por ejemplo, microscopia, análisis bioquímicos o un ensayo para determinar la resistencia a una enfermedad particular. En algunos casos, el fenotipo es controlado directamente por un solo gen o locus genético, es decir, un "carácter de un solo gen~. En otros casos, el fenotipo es el resultado de varios genes. Un "fenotipo molecular· es un fenotipo que puede d, etectarse en el ámbito de una población de (una o más) moléculas. Estas moléculas pueden ser ácidos nucleicos, tales como AON genómico o ARN, proteinas o metabolitos. Por ejemplo, un fenotipo molecular puede ser un perfil de expresión de uno o más productos génicos, por ejemplo, en una etapa especifica del desarrollo de la planta, en respuesta a una condición ambiental o estrés, etcétera. Los perfiles de expresión típicamente se evalúan a nivel del ARN o las proteínas, por ejemplo, en un conjunto de ácidos nucleicos o "Chip·, o usando anticuerpos u otras proteinas de unión. El término "rendimiento" hace referencia a la productividad por unidad de área de un producto vegetal particular de valor comercial. Por ejemplo, el rendimiento del maiz comúnmente se mide en fanegas de semillas por acre o en toneladas métricas de semillas por hectárea por temporada. El rendimiento es afectado por factores genéticos y ambientales. "Agrlcola', "caracteres agricolas', y "desempeño agricola" hacen referencia a los caraderes (y los elementos genéticos subyacentes) de una variedad v, egetal dada que contribuyen al rendimiento en el curso de una temporada de cultivo. Los caracteres agrícolas individuales incluyen el vigor de emergencia, el vigor vegetativo, la tolerancia al estrés, la resistencia o la tolerancia a enfermedades, la resistencia a herbicidas, la ramificación, el florecimiento, la producción de semilla, s, el tamaño de las semillas, la densidad de las semillas, la a~ura, el rendimiento en la cosecha y semejantes. Por consiguiente, el rendimiento es la culminación final de todos los caracteres agrícolas. Un "conjunto' de marcadores o sondas hace referencia a una colección o un grupo de marcadores o sondas, o los datos derivados de éstos, usados para un propósito común, por ejemplo, para identificar plantas de maiz con un carácter deseado (por ejemplo, resistencia al MF:CV) . Frecuentemente, los datos que corresponden a los marcadores o las sondas, o los datos derivados de su uso, se almacenan en un medio electrónico. Si bien cada uno de los miembros de un conjunto posee utilidad para un propósito específico, los marcadores individuales seleccionados entre el conjunto, asi como los subconjuntos que incluyen algunos, pero no todos los marcadores, también son efectivos para lograr el propóSito especifico. Una "tabla de búsqueda" es una tabla donde se correlaciona una forma de datos con otra, o una o mas formas de datos con un resultado predicho relevante para los datos. Por ejemplo, una tabla de búsqueda puede incluir una correlación entre datos de alelas y un carácter pr, edicho que puede presentar una planta que comprende un alelo dado. Estas tablas pueden ser multidimensionales, y comúnmente lo son, por ejemplo, tienen en cuenta varios alelas en forma simultánea, y opcionalmente tienen en cuenta también otros factores, tales como el trasfondo genético, por ejemplo, para predecir un carácter. Un "medio que puede ser leido por un ordenador" es un medio de almacenamiento de información al que puede accederse con un ordenador, usando una interfase disponible o modificada. Los ejemplos inctuyen memoria (por ejemplo, ROM, RAM o memoria instantanea) , medios de almacenamiento óptico (por ejemplo, CD-ROM) , medios de almacenamiento magnético (discos duros de ordenador, discos extraíbles, etcétera) , tarjetas perforadas, y muchos otros medios disponibles comercialmente. Puede transmitirse la información entre un sistema de interés y el ordenador, o hacia o desde el ordenador y el medio que puede ser leido por un ordenador, para almacenarla o acceder a información almacenada. Esta transmisión puede ser una transmisión eléctrica, o puede efectuarse a través de otros métodos disponibles, tales como un enlace IR, una conexión inalambrica o semejantes. Las "instrucciones del sistema" son conjuntos de instrucciones que pueden se ejecutadas parcial o completamente por el sistema. Tlpicamente. los conjuntos de instrucciones estan presentes como software de sistema. DESCRIPCiÓN BREVE DE LAS FIGURAS Y LAS SECUENCIAS En la Figura lA se ilustra un analisis de asociación estructurada para un grupo argentlno. Nota: región Significativa (valor de p: menos de 0, 00005) entre las posiciones 65, 99 y 85, 84. Eje X: Distancia expresada en cM desde el extremo del cromosoma 2. Eje Y: Valor d, e probabilidad. En la Figura 18 se ilustra un análisis de asociación estructurada para un grupo SS. Nota: marcador significativo principal en MRCV1. MZA1525 en la poSición 54, 62 y MZAl1826 en la posición 65, 99. Eje X: Distancia expresada en cM desde el extremo del cromosoma 2. Eje Y: Valor de probabilidad. En la Figura l C se ilustra un analisis de asociación estructurada para otro grupo SS. Nota: El marcador más asociado en el brazo corto del cromosoma 2 fue MZA12899 en la posición 53, 83 (p = 0, 000298) . Eje X: Distancia expresada en cM desde el extremo del cromosoma 2. Eje Y: Valor de probabilidad. En la Figura 2 se ilustra un mapeo de intervalos para el cruzamiento PH3DTxPH7WT. Cromosoma 2, Máximo de la calificación LOO: pOSición 65, 89, 46% de la variación fenotípica. En la Figura 3A se presentan fotografías de maíz con slntomas de MRCV. En la Figura 38 se presentan fotografias de maiz con susceptibilidad al MRCV. En la Figura 4A se ilustra un gráfico de genotipos en la región del OTl y fenotipos promediados (MRCVSC) para un grupo de recombinantes de la población de mapeo de atta resolución 8C5F3, obtenida del cruzamiento PH30T) (PH7WT, Se itustra el trozo del progenitor ;resistente en el antecedente susceptible y la región de recombinación. la región incluye los recombinantes localizados entre MZA1525-98-A y MZA10094-9-A. En la Figura 48 se ilustra un gráfico de genotipos en la refliÓn del OTl y fenotipos promediados (MRCVSC) para un grupo de recombinantes de la población de mape'o de alta resolución BC5F3, obtenida del cruzamiento PH30T) (PH7WT. Se ilustra el trozo del progenitor resistente en el antecedente susceptible y la región de recombinación. La región incluye los recombinantes localizados entre MZA15490 y MZA18224. También se incluyen tres recombinantes en el intervalo entre MZA 11826 Y MZA91 05, Y Su caracterización genética. El fenotipo se indica con círculos a la derecha del gráfico (circulos negros: susceptible; clrculos blancos: resistente; círculos con líneas diagonales: mezcla de resistente y susceptible; círculos grises: desconocido) . En la Figura 5 se ilustra un mapeo de intervalos para I!I cruzamiento PH30T) (PH7WT. Cromosoma 2, Má) (imo de la calificación lOO: posición 65, 99 (MZA2038) . No se incluyó MZA 11826 o MZA9105 en el análisis debido a que no eran recombinantes respecto de MZA2038 en esta población específica. Nota: el mapa genético fue adaptado para permitir el mapeo de intervalos en la posición 6, 5, 99; los marcadores MZA16656, MZA15490 Y MZA2038 están muy ligados, a menos de 0, 5 cM, pero se colocaron artificialmente a distancias de 0, 5 cM para este análisis especifico. En la Figura 6 se ilustra un análisis de mapeo de intervalos para el cruzamiento PH9T J) (PH890 en regiones de OTL especificas en el cromosoma 2 y el cromosoma 5. Cromosoma 2, Má) (imo de la calificación LOO: posición 65, 99-68, 8. No hubo recombinantes entre los marcadores preferidos y los marcadores en la posición 68, 8; por lo que solamente se incluyó MZA91 05 como representante de los marcadores preferidOS para este análisis. En la Figura 7 se presenta una fotografia de una planta afectada severamente por el MRCV; corresponde a una isollnea para marcadores preferidos que contiene el haplotipo susceptible del cruzamiento PH30T) (PH7WT. En la Figura 78 se presenta una fotografía de dos hileras sembradas lado a lado en la región endémica de Río Cuarto, Argentina, donde la hilera a la izquierda corresponde a la isolínea que contiene el haplotipo susceptible y la hilera a la derecha corresponde a la isolínea que contiene el alelo resistente para los marcadores preferidos. Estas isollneas se obtuvieron de una sola planta BC5F2 heterocigota para marcadores preferidos del cruzamiento PH30T) (PH7WT. En la Figura 8 se ilustra la región del OTl del cromosoma 2 entre los marcadores MZA15490 y MZA2038. En la FigurR 9 ~e iluslrR un grl:lfic-.Q de la región del intervalo entre MZA15490 y MZA2038 donde se indica la posición de los fragmentos secuenciados especlficos en un grupo de lineas endocriadas susceptibles y resistentes representativas. En la Figura 10 se ilustra una descripción gráfica de un individuo recombinante en ef intervalo entre MZA15490 y MZA2038. El punto de recombinación estuvo localizado dentro de PC0644442, para generar un gen quimérico entre progenitores resistentes (PH7WT) y susceptibles; (PH30D. La pOSición de los SNP y los indels se indica en la región secuenciada. En la Figura 11 se ilustra el desempeño (calificación del MRoV) de hibridos de maiz bajo una infección de MRoV entre clases genolípicas para la región de marcadores preferidos. En el eje X, "-2", '0' Y "2" (clase genotípica) representan las clases genotipicas del haplOlipo susceptible, et haplolipo heterocigoto y el haplotipo resistente homocigoto, respectivamente. La Figura 12 es un mapa de intervalos de las califica.:;iones fenotípicas promedia en tres temporadas de cultivo para la población de mapeo PH7WT) (PH30T. Vale destacar que el má) (imo de la calificación lOO es cercano a umc1756. la Figura 13 es un mapa de intervalos compuesto de las califICaciones fenotipicas promedio en tres temporadas de cultivo para la población de mapeo PH7WT) (PH3DT mapeo. Vale destacar que el má) (imo de la calificación LOO es cercano al intervalo umc1756-umc1518. La Figura 14 es un mapa de intervalos compuesto dI! la población de mapeo PH9TJ) (PH890. El má) (imo de la calificación lOO para el OTL MRCV1 estuvo localizado en la posición 65, 99-68, 8. La Figura 15 es un alineamiento ClustalW entre SEO ID Nº 194 (promotor pco644442 de PH7WT) y SEO ID N" 195 (promotor pc0644442 de PH30T) . la Figura 16 es un alineamiento ClustalW entre SEQ ID Nº 196-219. En las siguientes descripciones de secuencias se resume el listado de Secuencias adjunto. El listado de Secuencias contiene los códigos de una letra para los caracteres de las secuencias de nucleótido y los códigos de tres letras para los aminoácidos, como se define e:n los alineamientos de la IUPAC-IU8 descritos en Nucleic Acids Research 13:3021-3030 (1985) y 8iochemical Journal 219 (2) :345-373 (1984) . SEQ 10 Nº 1-5, 8-11, 13, 14, 16, 19, 21, 25, 26, 213, 30-33, 35, Y 38-44 son secuencias consenso para los marcadores MZA hallados en la Tabla 6. SEQ ID Nº 6, 7, 12, 15, 17, 18, 20, 22-24, 27, 2fl, 34, 36, Y 37 son secuencias SNP consenso para los marcadores SNP hallados en la Tabla 7. SEQ 10 Nº 45-52 son las secuencias de los cebadores izquierdo y derecho para los marcadores públicos hallados en la Tabla 3. SEQ 10 Nº 53-168 son los cebadores extemo directo, . intemo directo, inverso interno e inverso externo para los marcadores MZA hallados en la Tabla 6. SEQ ID N" 169-193 son los cebadores directos e inversos para los marcadores SNP hallados en la Tabla 7. SEQ 10 Nº 194 es la región promotora PC0644442 de la linea endocriada de maíz PH7WT. SEQ ID Nº 195 es la región promotora PC0644442 de la linea endocriada de maiz PH30T. SEQ 10 Nº 196 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PH3ºT. SEQ 10 Nº 197 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz AP19506160. SEQ 10 Nº 198 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de malz AP19506157. SEQ 10 Nº 199 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de ma[z AP19506156. SEQ 10 Nº 200 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de maíz PH7WT. SEQ ID Nº 201 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 630. SEQ 10 Nº 202 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHG63. SEQ 10 N" 203 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHK09. SEQ 10 NI' 204 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de malz PHR33. SEQ ID Nº 205 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de talinea endocriada de maíz 501. SEQ ID Nº 206 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 157. SEQ ID Nº 207 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de malz PHK56. SEQ 10 Nº 208 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 661 . SEQ 10 Nº 209 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocríada de maíz PHR03. SEQ 10 Nº 210 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz 1047. SEQ 10 Nº 211 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maíz PHJ40_ SEO 10 Nº 212 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz 274. SEO 10 Nº 213 es la región de secuencia que incluye MROV8381 y MROV10673 de la linea endocriada de maíz 165. SEQ 10 Nº 214 es la región de secuencia que induye MRQV8381 y MRQV10673 de la línea endocriada de maiz 873. SEO 10 Nº 215 es la región de secuencia que induye MROV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz PHN47. SEQ 10 Nº 216 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz PH26N. SEQ 10 Nº 217 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MRQV10673 de la Unea endocriada de maíz PHoG9. SEQ 10 Nº 218 es la región de secuencia que incluye MRQV8381 y MROV10673 de la linea endocriada de maiz ST10H60. SEQ 10 Nº 219 es la región de secuencia que induye MRQV8381 y MRQV10673 de la linea endocriada de maiz PHKP5. DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN La identificación y la selección de planlas de maíz que presentan resistencia al MRCV usando MAS puede proveer un abordaje efectivo e inocuo para el ambiente al superar las pérdidas causadas por esta enfermedad. En la presente invención se proveen loci marcadores de maiz que presentan una co-segregación de significación estad ística con la resistencia al MRCV. La detección de estos loci o de loci ligados adicionales puede usarse en programas de desarrollo de maíz asistidos por marcadores para producir plantas resistentes o plantas con resistencia mejorada al MRCV o a fijivirus relacionados. Los marcadores SSR, MZA y SNP ligados identificados en ta presente documentación se proveen en las Tablas 1 y 2. Estos marcadores induyen MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA 15490, MZA2038, MZA11826 Y MZAB105. Cada uno de los marcadores de tipo SSR presenta una pluratidad de alelas que pueden visualizarse como amplicones de PCR de distintos tamaños. Los cebadores de PCR que se usan para generar los amplicones de marcadores SSR se proveen en la Tabla 3. Los alelm. de los marcadores de tipo SNP se determinan usando un protocolo de hibridación con especificidad por los alelos, como es conocido en la técnica. Los cebadores de PCR usados para amplificar el dominio SNP y las sondels especificas para los alelos usadas para determinar el genotipo dellocus se proveen en las Tablas 6 y 7. Tabla 6 Cebadores MZA Marcador MZA Directo/externo Directo/interno InversoJintemo Inverso/externo MZA consenso MZA7588 SEa ID N" 53 SEa ID Nº 54 SEa ID N" 55 SEa ID Nº 56 SEa ID Nº 1 MZA8381 SEa ID Nº 57 SEa ID N" 58 SEa ID N" 59 SEa ID N" 60 SEa ID Nº 2 MZA31 05 SEa ID N" 61 SEa ID Nº 62 SEa ID Nº 63 SEa ID Nº 64 SEa ID N" 3 MZA482 SEa ID N" 65 SEa ID N" 66 SEa ID N" 67 SEa ID N" 68 SEa ID Nº 4 MZA16531 SEa ID N" 69 SEa ID Nº 70 SEa ID Nº 71 SEa 10 Nº 72 SEa 10 N"5 MZA625 SEa ID N" 73 SEa ID Nº 74 SEa IDN"75 SEa 10 Nº 76 SEa ID Nº 8 MZA4305 SEa ID N" 77 SEa ID N" 78 SEa IDN"79 SEa 10 N" 80 SEa JO Nº 9 MZA14553 SEa ID Nº 81 SEa ID Nº 82 SEa JO N" 83 SEa ID Nº 84 SEa ID Nº 10 MZAl5451 SEa JO N" 85 SEa ID Nº 86 SEa ID N" 87 SEa 10 Nº 88 SEa ID Nº 11 U7 ... n11\O: IYILJ"'\;;r IV'"' SEa iD Nº 89 SEa lD Ne 90 SEa iD Nº 91 sea iD Ne 92 sea iD Ne 13 MZA2803 SEa JO N" 93 SEa ID Nº 94 SEa ID N" 95 SEa 10 Nº 96 SEa JO Nº 14 MZA2038 SEa 10 Nº 97 SEa 10 Nº 98 SEa ID Nº 99 SEa 10 Nº 100 SEa ID Nº 16 MZA16656 SEa JO N" 101 SEa ID Nº 102 SEa ID Nº 103 SEa ID Nº 104 SEa ID Nº 19 MZAl5490 SEa ID Nº 105 SEa ID N" 106 SEa ID Nº 107 SEa 10 Nº 108 SEa ID Nº 21 MZA11826 SEa 10 N" 109 SEa ID Nº 110 SEa JO N"111 SEa 10 Nº 112 SEa JO Nº 25 MZA564 SEa ID Nº 113 SEa 10 Nº 114 SEa 10 N"115 SEa 10 Nº 116 SEa ID Nº 26 MZA2349 SEa 10 Nº 117 SEa ID Nº 118 SEa ID Nº 119 SEa ID Nº 120 SEa JO Nº 28 MZA18224 SEa 10 Nº 121 SEa ID Nº 122 SEa JO Nº 123 SEa 10 Nº 124 SEa ID Nº 30 MZAll066 SEa ID Nº 125 SEa ID Nº 126 SEa 10 N"127 SEa ID Nº 128 SEa ID Nº 31 MZA18180 SEa ID Nº 129 SEa ID Nº 130 SEa 10 Nº 131 SEa ID Nº 132 SEa ID Nº 32 MZA8442 SEa 10 Nº 133 SEa ID Nº 134 SEa ID Nº 135 SEa ID Nº 136 SEa ID Nº 33 MZA15563 SEa ID Nº 137 SEa ID Nº 138 SEa ID Nº 139 SEa ID Nº 140 SEa ID NG35 MZA18036 SEa 10 Nº 141 SEa ID NG 142 SEa ID Nº 143 SEa ID NG144 SEa ID Nº 38 MZA15264 SEa ID Nº 145 SEa 10 Nº 146 SEa ID Nº 147 SEa ID Nº 148 SEa 10 Nº 39 MZA10384 SEa ID Nº 149 SEa ID Nº 150 SEa JO Nº 151 SEa ID Nº 152 SEa 10 Nº 40 MZA12874 SEa ID N" 153 SEa ID Nº 154 SEa ID Nº 155 SEa ID NG156 SEa ID Nº 41 MZA12454 SEa ID N" 157 SEa ID N" 158 SEa 10 Nº 159 SEa ID Nº 160 SEa ID Nº 42 MZA8926 SEO ID Nº 161 SEO ID Nº 162 SEO ID Nº 163 SEO ID Nº 164 SEO ID Nº 43 MZA5057 SEO ID Nº 165 SEO ID Nº 166 SEO ID Nº 167 SEO ID Nº 168 SEO ID Nº 44 ~;3 ~~ , ~ ~w o~ ~w ~:;: En las Tablas 6 y 7 se delallan los marcadores SNP que presentaron desequilibrio de ligamiento con el fenotipo de resistencia al MRCV. En estas tablas se proveen las secuencias de los cebadOres de PCR usados para generar un amplicón que contenia el SNP, y de las sondas específicas para los alelos que se usaron para identificar el alelo del SNP en un ensayo de hibridación con especificidad por dicho alelo (ensayo ASH) . Segun se reconoce en la técnica, cualquier otro mareador que está asociado a un QTL marcador (por ejemplo, un marcador de resistencia a una enfermedad) también puede usarse con este fin . En la presente documentación se proveen ejemplOS de marcadores adicionales que están asociados a los marcadores de resistencia a enfermedades mencionadOs. Por ejemplo, un marcador ligado puede determinarse a partir de los marcadores ligados estredlamente indicados en la Tabla 8. Sin embargo, no se pretende limitar los marcadores ligados que pueden usarse con la invención a aquellos 15 mencionados en la Tabla 8. En la invención también se proveen intervalos de QTL cromosOmicos que estan correlacionados COn la resistencia al MRCV. Estos intervalos estan localiz:ados en el grupo de ligamiento 2. Cualquier marcador localizado en estos intervalos puede usarse como marcador para la resistencia al MRCV. Estos intervalos incluyen los siguientes: (i) MZA8381 Y MZA18180: (ii) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA15490 Y MZA2038; 25 (iv) bnlg1458b y umc1261a; (v) bnlg1458b y umc1262a: (vi) OOlg1327 y umc1261a: y (viii) bnlg1327 y umcl262a. Los métodos para la identificación de las plantas o el germoplasma de maiz que contienen los alelos preferidos de los loci marcadores de resistencia son una car.acteristica de la invención. En estos métodos se utiliza cualquiera de una variedad de protocolos de detección de marcadores para identificar Ioci marcadores, dependiendo del tipo de loei marcador. Los métodos típicos para la detecciOn de marcadores incluyen la amplificación y la detección de los marcadores amplil¡cadOS resuHantes, por ejemplo, mediante los métodos de amplificación basadOs en la transcripción, PCR, LCR, '0 semejantes. t.stos incluyen la ASH. la detección de SSR, el análisis de RFLP, Y muchos otros. A pesar de que algunos alelos particulares de un marcador pueden presentar co-segregaciOn con el fenotipo de resistencia o susceptibilidad a una enfermedad, es importante hacer notar que el locus marcador no es 40 neces3ri3mente parte del locus del QTL responS3ble de 13 resistenci3 o susccptibilid3d. Por ejemplo, no es un requerimiento que la secuencia polinuleolidica del ma.rcador forme parte de un gen que imparta resistencia a la enfermedad (por ejemplo, que sea parte del marco abierto de lectura del gen) . La asociación entre un alelo espeCifico del marcador con el fenotipo de resistencia o susceptibilidad se debe al ligamiento del "acoplamiento' de fase original entre el alelo del marcador y el alelo QTL de resistencia o susceptibilidad en la linea de maiz 45 original a partir de la cual se originó el alelo de resistencia o susceptibilidad. Eventualmente, con recombinaciones repetidas, los eventos de cruzamiento entre el marcador y el locus del QTL pueden cambiar esta orientación. Por esta razOn, el alelo del marcador favorable puede cambiar dependiendo de la fase de ligamiento que exista en el progenitor resistente usado para crear las poblaciones segregantes. Esto no cambia el hecho de que el marcador genétiCO pueda ser usado para monitorear la segregación del fenotipo. Sólo cambia 50 cuál alelo marcador es considerado favorable en una población segregante dada. La identificación de plantas o germoplasma de maíz que incluyen un locus marcador o loo marcadOres asociados a uno o más caracteres de resistencia provee una base para llevar a cabo una selección de maíz asistida por marcadores. Se seleccionan a favor plantas de maíz que comprenden marcadores favorables o 55 alelas favorables, mientras que las plantas de maiz que comprenden marcadores o alelos que están correladonados negativamente con la resistencia pueden ser sometida~ a una selección negativa. Los marcadores y/o los alelas deseados pueden introducirse en un maiz que tenga los antecedentes genéticos deseado (por ejemplo, elite o exótico) para producir una planta o un germoplasma de maíz modificado resistente. En algunos aspectos, se contempla la posibilidad de seleccionar y/o introducir de manera simultánea o consecutiva una pluralidad de marcadores de resistencia. las combinaciones de marcadores de resistencia seleccionados para una planta individual no se halla limitada, y puede incluir cualquier combinación de los marcadores indicados en las Tablas 1 y 2, cualquier marcador ligado a los marcadores indicados en las Tablas 1 y 2, o cualquier marcador localizado en los intervalos de aTl definidos en la presente documentación. Como una alternativa a los métodos de cultivo convencionales para introducir caracteres de interés en maíz (por ejemplo, introducción) , también pueden usarse abordajes lransgénicos. En estos métodos, se introducen ácidos nucleicos exógenos que codifican caracteres ligados a marcadores en plantas o germoplasma diana. Por ejemplo, se clona un ácido nucleico que codifica un carácter de resistencia, por ejemplo, a través de la clonación posicional, y se lo introduce en una planta o germoplasma diana. La verificación de la resistencia puede realizarse con los protocolos de resistencia disponibles (véase, por ejemplo, el Ejemplo 10) . los ensayos de resistencia son utiles para verificar que el carácter de resistencia aun segrega con el marcador en cualquier planta o población particular, y por supuesto, para medir el grado de mejoramiento en la resistencia logrado mediante la introducción o la introducción recombinante del caracter en un fondo deseado. los sistemas, incluyendo los sistemas automatizados para seleccionar plantas que comprenden un marcador de interés, y/o para correlacionar la presencia del marcador con la resistencia , también son características de la invención. Estos sistemas también pueden incluir sondas relevantes para la detección del locus marcador, detectores para detectar marcas sobre las sondas, elementos de manejo de fluidos apropiados y controladores de temperatura Que mezclan sondas y moldes y/o amplifican moldes, e instrucciones de sistemas que correlacionan la detección de la marca con la presencia de un locus marcador o alelo particular. los conjuntos de elementos también son una car~lcterlstica de la invención. Por ejemplo, un conjunto de elementos puede incluir cebadores o sondas apropiadas para detectar loci marcadores asociados con la resistencia, e instrucciones para usar los cebadores o las sondas para detectar los loo marcadores y correlacionar los loci con la resistencia al MRCV predicha. Además, los conjuntos de elementos pueden incluir materiales de envasado para alojar las sondas, 1 (ls cebadores o las instrucciones, controles, tales como reacciones de amplificación de control, que incluyen sondas, cebadores o ácidos nucleícos molde para realizar las amplificaciones, marcadores de tamaño molecular, o semejantes. Marcadores de resistencia y alelas favorables En el análisis de ligamiento tradicional no se requiere un conocimiento directo de la relaciÓn flsica de los genes sobre un cromosoma. la primera ley de Mendel es que los factores de pares de caracteres son segregados, significando que los alelas de un carácter diploide se separan en dos gametos y luego en diferentes descendientes. El análisis de ligamiento dasico puede ser concebido como una descripción estadística de las frecuencias relativas de co-segregación de caracteres diferentes. El análisis de ligamiento es el marco de trabajo descriptivo bien caracterizado de cómo los caractem!s están agrupados en base a la frecuencia con la cual segregan juntos. Vale decir, si dos caracteres no alélicos se heredan juntos con una frecuencia mayor que la determinada por el azar, se dice que están ·ligados~. La frecuencia con la cual lOS caracteres son heredados en conjunto es la medida primaria de cuán estrechamente ligados están los caracteres, es decir, los caracteres Que son heredados en conjunto con una frecuencia mayor están ligados más estrechamente Que los caracteres que son heredados en conjunto con una menor frecuencia (pero aún por encima del azar) . los caracteres están ligados porque los genes donde subyacen los caracteres residen en el mismo cromosoma. Cuanto más apartados residen los genes en un cromosoma, menos probable es que segreguen juntos. debido a Que los cromosomas homólogos recombinan durante la meiosis. Por lo tanto, cuanto mas apartados residen los genes en un cromosoma, más probable es que exista un ev, ento de cruzamiento durante la meiosis que resulte en dos genes segregando de forma separada en la progenie. Una medida común del ligamiento es la frecuencia con la cual los caracteres co-segregan. ¡;:sta puede ser expresada como un porcentaje de la co-segregación (frecuencia de recombinaCión) , o también comúnmente, en centiMorgans (cM) . El cM es nombrado en honor al gtenetista pionero Thomas Hunt Margan, y es una unidad de medida de la frecuencia de recombinación genética. Un cM es igual a una probabilidad del 1% de que un carácter que se encuentra en un locus genético sea separada de un carácter que se encuentra en otro locus genético debido al cruzamiento en una única generación (significando Que los caracteres segregan juntos el 99% del tiempo) . Debido a que la distancia cromosómica es aproximadamente proporcional a la frecuenci~ de los eventos de cruzamiento entre caracteres, hay una distancia fisica aproximada Que correlaciona con la frecuencia de recombinación. Por ejemplo, en el maíz, 1 cM está correlacionado, en promedio, con aproximadamente 2140000 pares de bases (2, 14 Mbp) . Los loo marcadores son caracteres en sí mismos y pueden ser determinados de acuerdo con un análisis de ligamiento convencional, rastreando los loo marcadorElS durante la segregación. Por lo tanto, en el contexto de la presente invención, un cM es igual a una probabilidad de 1 % de que un locus marcador sea separado de otro locus (el cual puede ser cualquier otro caracter, por ejnmplo, otro locus marcador, u otro locus de un caracter que codifique un QTL) , debido al cruzamiento en una única generación. En la presente documentación, se ha establecido que los marcadores descritos en las Tatllas 1 y 2, por ejemplo, MZA625, MZAl6656, MZAl5451 , MZA15490, MZA2038, MZA 11826 Y MZA9105, así corno cualquiera de los siguientes íntervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (iii) MZA15490 Y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261a y (viii) bnlg1327 y umc1262a, estan correlacionados con la resistencia conferida recientemente, la resistencia mejorada o la susceptibilidad al MRCV en maíz. Esto significa que los marcadores est!!!n lo suficientemente próximos a un caracter de resistencia para poder usarios con el fin de predecir el carácter de resistencia. Esto es extremadamente útil en el contexto de la selección asistida por marcadores (MAS) , que se describirá en detalle más adelante. En resumen, es posible realizar una selección en plantas o germoplasma de maíz para marcadores o alelas marcadores que presentan una correlación positiva con la resistencia, sin que sea necesario cultivar maiz y medir la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada (o E, n el caso contrario, las plantas de maíz pueden someterse a una selección negativa si poseen los marcadores que estan correlacionados negativamente con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada) . La MAS es un atajo poderoso para realizar una selección a favor de los fenotipos deseados e introducir los caracteres deseados en cultivares de maíz (por ejemplo, introducir los caracteres deseados en lineas elite) . La MAS está fácilmente adaptada a métodos de analisis molecular de alto desempei'lo que permiten analizar rápidamente una gran cantidad de material genético de plantas o germoplasma en busca de los marcadores de interes, y tiene una relación mucho mejor entre costo y efectividad que el cultivo y la observación de plantas en busca de caracteres visibles. En algunas realizaciones, los QTL marcadores mas preferidos son un subconjunto de los marcadores provistos en las Tablas 1 y 2. Por ejemplo, los marcadores más preferidos son MZA 15490 Y MZA2038. Cuando se hace referencia a la relación entre dos j~lementos geneticos, tal como un elemento genetico que contribuye a la resistencia y un marcador proximal, el ligamiento de "acoplamiento" de fase indica el estado en que el alelo "favorable" en ellocus de resistencia esta ~gado fisicamente a la misma cadena cromosómica que el alelo "favorable" dellocus marcador asociado respectivo. En el acoplamiento de fases, ambos alelos favorables se heredan juntos en la progenie que hereda la cadena cromosómica En el ligamiento de fases de "repulsión", el alelo "favorable" en ellocus de interés (por ejemplo, un QTL de resistencia) esta asociado físicamente a un alelo "desfavorable" en el locus marcador proximal, y los elos alelos "favorables" no se heredan juntos (es decir, los dos loci estan "fuera de fase" uno de otro) . Un alelo favorable de un marcador es aquél alelo del marcador es el que co-segrega con un fenotipo deseado (por ejemplo, resistencia a la enfermedad) . Como se lo utiliza en la presente documentación, un QTL marcador tiene un mlnimo de un alelo favorable, a pesar de que es posible que el marcador pueda tener dos o más alelas favorables encontrados en la población. cualquier alelo favorable de ese marcador puede ser utilizado de forma ventajosa para la identificación y la construcción de lineas de maíz resistentes. Opcionalmente, uno, dos, tres o más alelo (s) favorables de diferentes marcadores son identificados o introducidos en una planta, y pueden ser sometidos a una selección positiva o negativa durant, e la MAS. En terminas deseables, se identifican plantas o germoplasma que tienen al menos uno de estos aleles favorables que están correlacionados positivamente con la re$i$tencia conferida recientemente o mejorada. Como alternativa, en la presente invención también puede usarse un alelo de un marcador que co-segrega con la susceptibilidad a la enfermedad, ya que ese alelo puede ser utilizado para identificar y realizar una selección negativa de las plantas susceptibles a la enfermedad. Dicho alelo puede usarse para propósitos de exclusión durante el cultivo, con el fin de identificar alelas correlacionados negativamente con la resistencia, y para eliminar plantas o germoplasma susceptibles de los cruzamientos subsiguientes. En algunas realizaciones de la invención, se selecciona a favor una pluralidad de alelas del marcador de manera simultanea en una única planta o una población de plantas. En estos metodos, se seleccionan plantas que contienen alelas favorables de más de un marcador de resistencia, o como alternativa, se introducen alelas favorables de más de un marcador de resistencia en un germoplasma deseado de marzo Aquellos expertos en la materia han de reconocer que es probable que la selección simultanea de alelas favorables de mas de un marcador de resistencia a la enfermedad en la misma planta resulte en un efecto protector aditivo (o aún sinérgico) para la planta. Aquellos expertos en la materia han de reconocer que la identificación de alelas favorables de marcadores es específica para el germoplasma. La determinación de cuáles alelos del marcador se correlacionan con la resistencia (o la susceptibilidad) se determina para el germoplasma particular estudiado. Aquellos expertos en la materia han de reconocer que los métodOs para identificar los alelos favorables son de rutina y bien conocidos, y aún más, que la identificación y el uso de dichos <3llelos favorables se encuentran dentro del alcance de la invención. Más aún, la identificación de los alelos favorables de los marcadores en poblaciones de maíz diferentes a las poblaciones usadas o descriptas en la presente se encuenlra dentro del alcance de la invención. los cebadores de amplificación para amplificar loo marcadores de tipo SSR son una característica de la invención. Otra característica de la invención comprende cebadores específICos para la amplificación de dominios SNP (marcadores SNP) , y las sondas que se usan para determinar el genotipo de las seruencias de lOs SNP. En las Tablas 6 y 7 se proveen cebadores especificos para la amplificación de loci marcadores y sondas para detectar los loci marcadores amplificados. Sin embargo, aquellos expertos en la materia han de reconocer de inmediato que es posible usar otras secuencias a cualquiera de ambos lados de los cebadores dados en lugar de los cebadores dados, siempre y t:uando los cebadores permitan amplificar una región que incluya el alelo a detectar. Además, ha de apreciarse que la sonda precisa a utilizar para la detección puede variar, por ejemplo, cualquier sonda que permita iden'tificar la región de un amplicón marcador a detectar puede ser sustituida por aquellOs ejemplos provistos en la presente documentación. Más aÚn, la configuración de los cebadores de amplificación y las sondas de detección obviamente puede variar. Por lo tanto, la invención no está limitada a los cebadores y sondas mencionados espec:ificamente en la presente documentación. En algunos aspectos, en los métodos de la invención iie utiliza un paso de amplificación para detectar/determinar el genotipo de un locus marcador. Sin embargo, ha de apreciarse que la amplificación no es un requerimiento para la detección del marcador -por ejemplo, es posible detectar directamente el AON genómico no amplificado simplemente mediante la realización de una transferEincia Southern sobre una muestra de AON genámico. Los procedimientos para realizar una transferencia Southern, una amplificación (PCR, l CR, o semejantes) y muchos otros métodos de detección de ácidos nucleicos están bien establecidos y se describen, por ejemplo, en Sambrook et al., Molecular Cloning -A Laboratorv Manual (3-edición) , Vol. 1-3, Cold Spring Harbar Laborator y , Cold Spring Harbar, Nueva York, 2000 ("Sambrook") ; :Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., editores, Current Protocols, una empresa conjunta entre Greene Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, lne., (presentado a lo largo de 2002) ("Ausubel"" y PCR Protocols A Guide to Methods and Applications (Innis el al. editores) Academic Press Inc. San Diego, CA (1990) (Innís) . También pueden encontrarse detalles adicionales relacionados con la detección de ácido:s nucleicos en plantas, por ejemplo, en Plant Molecular ~ (1993) Croy (editor) BIOS Scientific Publishers, InC. eCroy") . También pueden omitirse las sondas de detección separadas en los métodos de amplificación/detección, por ejemplo, a través de la realización de una reacción de amplificación en tiempo real que permita detectar ta formación det producto mediante la modificación del cebador de amplificación relevante durante la incorporadón en un producto, la incorporación de nudeótidOs marcados en un amplicón, o mediante el monitoreo de cambios en las propiedades de rotación molecular de los amplicones en comparadón con los precursores na amplificados (por ejemplo, por polarización de Huorescenda) . Tlpicamente, los marcadores moleculares son detectados con cualquier método establecido disponible en la técnica, incluyendo, sin limitaciones, la hibridación especifica COn especificidad por los alelos (ASH) u otros métodos para detectar polimorfismos de nudeótidos individuales (SNP) , ta detección de polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFlP) , la detección de secuencias variables amplificadas, la detección de AON polimórfico amplificado al azar (RAPO) , la detección de pOlimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFlP) , la detección de la replicación autosostenida de secuencias, la detección de repeticiones de secuencias individuales (SSR) , la detección de polimorfismos de conformación de cadenas individuales (SSCP) , la detección de marcadores de isoenzimas, o semejantes. Si bien los ejemplos de marcadores provistos en las figuras y las tablas de la presente documentaciÓn son marcadores SSR o SNP (ASH) , puede emplearse cualquiera de los tipos marcadores mencionados con anterioridad en el contexto de la invención para identificar aquellos segmentos de los cromosomas que comprenden elementos genéticos que contribuyen al desempeño agrícola superior (por ejemplo, resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) . Intervalos cromosómicos de QTl En algunos aspectos, en la invención se proveen intervalos cromOsómicos de QTl, donde en dichos intervalos hay un QTl (o un QTl múltiple) que segrega con la resistencia al MRCV. Hay una variedad de métodos bien conocidos en la técnica disponibles para identificar intervalos cromosómicos (como lambién se describe en detalle en los Ejemplos 1 y 2) . los limites de dichos intervalos cromosómicos están disel"iados para rodear los marcadores que se encontrarón osociados a uno o más QTl. En otras palabras, el intervalo cromosómico lOe diseña de modo tal que cualquier marcador que e~;té dentro de dicho intervalo (inctuyendo los marcadores terminales que definen los límites del intervalO) pueda ser usado como marcador para la resistencia a la enfermedad. Cada intervalo comprende al menos un QTl, y de hecho, puede comprender más de un QTL. La proximidad cercana de múhiples QTl en el mismo intervalo puede anular la correlación de un marcador particular con un QTL particular, ya que un marcador puede pre:ientar correlación con más de un QTL. Por el contrario, por ejemplo, si dos marcadores próximos presentan co-segregación con el carácter fenotlpico deseado, a veces no queda daro si cada uno de aquellos marcadore!s identifica al mismo QTL o a dos QTl diferentes. Independientemente de esto, el conocimiento de cuántos QTl están presentes en un intervalo particular no es necesario para realizar o poner en practica la invención. En la presente invención se proveen intervalos cromosómicos de maiz, donde los marcadores en dicho intervalo presentan co-segregación con la resistencia al MRCV. Por consiguiente, cada uno de estos intervalos comprende al menos un QTL de resistencia al MRCV, como se ilustra en la Tabla 9. Cada uno de los intervalos descritos con anterioridad presenta un agrupamiento de marcadores que co-segregan con la con resistencia al MRCV. Este agrupamiento de marcadores ocurre en dominios relativamente pequeños de los grupos de asociación, lo que indican la presencia de uno o más QTl en aquellas regiones cromosómicas. los intervalos de QTl fueron diseñados para rodear los marcadores que co-segregan con la resistencia. Los intervalos están definidos por los marcadores en sus extremos, donde el intervalo rodea a todos los marcadores que están localizados dentro del intervalo, y también los marcadores que definen las terminales. En algunos casos. puede diseñarse un intervalo que esté definido por el ligamiento con un marcador preferido. Por ejemplo, se define un intervalo en el cromosoma:~ donde cualquier marcador ligado con el MZA16656 es un miembro de dicho intervalo. Por ejemplo, como se lo usa en la presente documentación, el ligamiento se define como cualquier marcador que se halla a 25 cM de M.ZA16656. Este intervalo en el cromosoma 2 se ilustra con mayor detalle en la Tabla 8. Los marcadores que están ligados a MZA16656 (por ejemplo, a 5 cM de MZA16656) pueden determinarse con cualquier mapa de ligamiento genético apropiado (por ejemplo, el mapa 18M2 2005 Neighbors Frame 2 hallado en el sitio MaizeGDB) . Estos marcadores se indican en el orden genético. Cada uno de los marcadores indicados, incluyendo los marcadores terminales pcoOO1820a y sog57580, son miembros del intervalo. Los marcadores pco061820a y sog57580 son conocidos en la técnica. Como se describió con anterioridad, no es necesario que un intervalo (por ejemplo, un intervalo cromosómico o un intervalo de QTL) dependa en una medida absoluta del tamaño del intervalo como un valor en centimorgans. Un intervalo puede describirse en función de los marcadores terminales que definen los extremos del intervalo, y tipicamente, el intervalo incluirá los marcadores terminales que definen la extensión del intervalo. Un intervalo puede incluir cualquier marcador localizado dentro de dicho dominio cromosómico, ya sea que estos marcadores sean conocidos en la actualidad o desconocidos. En la invención se provee una variedad de medios para definir un intervalo cromosómico, por ejemplo, en las listas de marcadores ligados de la Tabla 8 y las referencias citadas en la presente documentadÓn. Mapas genéticos Como han de reconocer los expertos en la materia, las frecuencias de recombinación (y como resultado, las posiciones en el mapa genético) en cualquier población particular no son estáticas. las distancias genéticas que separan dos marcadores (o un marcador y un QTL) pueden variar dependiendo de cómo se determinan las posiciones en el mapa. Por ejemplo, las variables, talE!s como las poblaciones progenitoras de mapeo usadas. el software usado en el mapeo del marcador o en el mapeo del QTl Ylos parámetros ingresados por el usuario del software de mapeo pueden contribuir a las relaciones de mapa genético de QrUmarcador. Sin embargo, no ha de interpretarse que la invención se halla limitada a una población de mapeo particular, el uso de un software particular o un conjunto de parámetros de software particular para determinar el ligamiento de un marcador o un intervalo cromosómico particular con el fenotipo de re:sistencia al MRCV. Aquellos expertos en la materia han de poder extrapolar las características novedosas descritas en la presente a cualquier conjunto de genes o 50 población de maíz de interés, y han de poder usar cualquier software y parámetros de software partiCUlares . En efecto, las observaciones relacionadas con los marcadores de resistencia y los intervalos cromosómicos en poblaciones distintas de las descritas en la presente documentación pueden realizarse fáCilmente haciendo uso de las enseñanzas en la presente documentación. Software de mapeo Se encuentra disponible una variedad de software comercial para estudios de mapeo genético y de asociación de marcadores (por ejemplo, mapeo de QTL) . Este software incluye, sin limitaciones, aquellos indicados en la Tabla 10. Tabla 10 Oeseri eión/Refereneias iV'Vindows QT ¡Software Wang S., C. J. Basten, y Z. B. Zeng (2007) . Windows QTL Cartographer 2, 5. Cartographer, versión 2.5 Department of Statistics, North Carolina State University, Raleigh, NC. VanOoiJen. y Voorrips (200 1) -JOinMap 3.0 software for the calculation o genetic linkage maps', Plont Research International, Wageningen, Paise oinMap® Bajos; y Stam ~Construction of integrated genetic linkage maps by means o a new computer oackâ¬l.9~: Join~·. The Plant Journal 3.@.t739-744 (199]) . J.w. vanOoijen, "SoftwarE~ for the mapping de quantitative trait loci iMapQTL® exoerimenta¡"ooDulations", 'Kvazma S.V., Waaeninaen Néterlands Manly y Olson, "Overview of QTL mapping software and introduction to MaMapManager QT Manager Qr Mamm. GenoQme 10:327-334 (19mi") Manly, Cudmore y Meer, "MapManager QTX, cross-platform software fOl MapManager QTX genetic mapping" Mamm. Genome 12:930-932 (2001) ~neFlow® GENEFLOW, Inc. (Alexandria, VA) QTlocateTlol (Trait Analysis byaSSocialion, Evolulion, and linkage) por Edward Buckler puede hallarse información sobre este programa en la página de Internet d ASSEL Buckler Lab, en el Instituto de Diversidad Genómica de la Universidad· ~ Cornell. Mapas genéticos unificados Se han creado mapas genéticos ·unificados", "consenso' o "inlegrados' que incorporan los datos de mapeo de dos o más fuentes, incluyendo fuentes que usaron diferentes poblaciones de mapeo y diferentes modos de análisis estadislico. La combinación entre la información de los mapas genéticos aumenta la densidad de marcadores en el mapa al mismo tiempo que mejora I¡~ resolución del mapa. Eslos mapas mejorados pueden ser usados de forma ventajosa en la selección asistida por marcadores. en la donación basada en mapas, para proveer un marco de trabajo mejorado para el posicionamiento de marcadores molecular recientemente identificados y ayudar en la identificación de intervalos cromosómicos de QTL y grupos marcadores asociados de forma ventajosa. En algunos aspectos, se obtiene un mapa consenso :simplemente mediante la superposición de un mapa sobre olro. En otros aspectos, pueden usarse varios algoritmos, por ejemplo, el análisis JoinMap"', para la combinación de los datos del mapeo genético provenientes de múltiples fuentes la conciliación de las discrepancias entre los datos de mapeo provenientes de las fuentes originales. Véase, Van Ooijen y Voorrips (2001) • JoinMap 3, 0 software for the calculation of genetic linkage maps", Plant Research Intemational, Wageningen, Paises Bajos; Stam (1993) "Construction of integrated genetic linkagle maps by means de a new computer package: JoinMap", The Plant JoumaI3 (5) :739-744. Marcadores ligados A partir de la presente descripción y el conocimiento técnico. está daro que puede usarse cualquier marcador genético que tenga una probabilidad significativa de co-segregación con un carácter fenotipico de interés (por ejemplo, en este caso, un carácter de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) como marcador para dicho carácter. En las Tablas 1 y 2 se provee una lista de los QTl marcadores útiles provistos por la presente invención. Además de los QTL marcadores mencionados en las Tablas 1 y 2, también pueden usarse otros marcadores ligados (en desequilibrio de ligamiento) a los QTL marcadores para predecir un carácter de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada en ulla planta de maiz. En otras palabras, cualquier otro marcador que presente una frecuencia de recombinación menor qUE~ 50% (separado por una distancia genética menor que 50 cM) con un QTl marcador de la invención (por ejemplo, los marcadores provistos en las Tablas 1 y 2) también será una característica de la invención. Cualquier marcador que está asociado a Ull QTL marcador también puede usarse de manera ventajosa en una selección elsistida por marcadores a favor del carácter particular. Los marcadores genéticos que estan ligados a QTL marcadores (por ejemplo, los QTL marcadores provistos en las Tablas 1 y 2) son particularmente útiles cuando se hallan suficientemente próximos (por ejemplo, asociados cercanamente) a un QTL marcador dado, de modo tal que el marcador genético y el QTL marcador presentan 45 una frecuencia de recombinación baja. En la presente invención, los marcadores ligados estrechamente de tal modo son una característica de la invención. Como SH los define en la presente documentación, los marcadores ligados estrechamente presentan una frecuencia df! recombinación de aproximadamente 10% o menos (el marcador dado se encuentra a aproximadamente 10 cM del QTL) . Dicho de otro modo, estos loci ligados estrechamente co-segregan al menos 90% del tiempo" Efectivamente, cuanto mas cerca se halla un marcador de un OTL marcador, el marcador se torna cada vez mas efectivo y ventajoso como indicador para el carácter deseado. Por lo tanto, en otras realizaciones, los loci ligados estrechamente, tales como ellocus de un QTL marcador y un segunda locus, presentan una frecuencia de cruzamiento entre locus de aproximadamente 10% o menos, preferiblemente, aproximadamente 9% o menos, aun más preferiblemente, aproximadamente 6% o menos, aun mas preferiblemente, aproximadamente 7'% o menos, aun más preferiblemente, aproximadamente 6% o menos, aún más preferiblemente, aproximadamente 5% o menos, aun más preferiblemente, aproximadamente 4% o menos aun más preferiblemente, aproximadamente 3'% o menos, y aun más preferiblemente, aproximadamente 2% o menos. En las realizaciones más preferidas, los loci relevantes (por ejemplo, un locus marcador y un locus diana, tal como un OTL) presentan una frecuencia de recombinación de aproximadamente 1 % o menos, por ejemplo, aproximadamente 0, 75% o menos, más pmferiblemente, aproximadamente 0, 5% o menos, aun más preferiblemente, aproximadamente 0, 25'% o menos. Por lo tanto, los loci estan separados aproximadamente 10 cM, 9 cM, 8 cM, 7 cM, 6 cM, 5 cM, 4 cM, 3 cM, 2cM, lcM, 0, 75 cM, 0, 5 cM o 0, 25 cM, o menos. Dicho de otro modo, se dice que dos loci que están localizados en el mismo cromosoma, y que se hallan separados por una distancia tal que la recombinación entre los dos loci ocurre en una frecuencia menor que 10% (por ejemplo, de aproximadamente 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0, 75%, 0, 5%, 0, 25%, o menos) , se hallan ·próximos· uno del otro. En algunos aspectos, los marcadores ligados (incluyendo los marcadores ligados estrechamente) de la invención se determinan revisando un mapa genético, por ejemplo, los mapas genéticos integrados hallados en el sitio de Internet de MaizeGDB. Por ejemplo, en la presente documentación se demuestra que los marcadores del grupo de ligamiento 2 MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2036, MZA11826 Y MZA9105 están correlacionados con al menos un QTL de resistencia al MRCV. Los marcadores que están ligados a MZA625, MZA16656, MZAl5451 , MZA15490, MZA2038, MZA11626 Y MZA9105 pueden determinarse a partir de la lista provista en la Tabla 6 (vease también la Tabla 11 , donde se presentan identificadores geneticos de loci de trabajo de arroz y maiz para marcadores genéticos entre MZA625 y MZA91 05) . laOla -11 Posición UC7 PCO PHO Cromosoma en mapa PHO el versus amplicíones M~áiad Orden del loeus l oeus de arroz Identificador genético de trabajo de maíz Resumen de la anotación 2 64 05 MZA625 Loe 029 l OC Os04 51320 AC191302 5 art Factor de transcri ción l oc 028 loe Os04g51310 AC191302 3 Proteína de unión a putrescina; proteína hipotética Loc 027 l OC Os04g51300 pc0600856 l-ascorbato eroxidasa robable loc 025 lOC 0s04 51280 co530474 Proteína de desarrollo de lástidos: DAG loe_024 lOC_Os04g51270 pC0593067 Proteína hipotética; Subunidad de la ATP sintetasa vacuolar? loe 023 lOC Os04Q51260 AC191302 6 Proteína hipotética loc 022 lOC Os04g51250 Inferido en arro~ '1 sorgo Proteína hi otética Loe 021 lOC Os04 51240 0641713 Proteína hi tética Loe 016 loc 015 loe Os04g51190 lOC Os04 51180 pco591841 Genomic PC0622600 PC0666161 Factor regulador del crecimiento Rece lor unido a roteína G 89C Hemo sa iens) 2 65, 99 MZA166656 loe_014 lOC_Os04g51172 pco638426 Proteina RAD!X 1 inlrlnseca mayor: NIP: similar a BREV1S loe 013 lOC Os04951166 c051 4627 Proteína hi otética 2 65, 30 MZA15451 loc_012 lOC_Os04g51160 lOC Os04051150 pC0588936 Oxidasa AOX3 alternativa Loe 010 loc_009 lOC 0s04g51140 lOC_Os04g51130 Inferido en arroz y sorgo pc0644442 Proteina hipotética Similar a Myb: componente respuesta 2 del regulador de la 2 65, 99 tAZA2038 loe_008 lOC_Os04g51 120 pco641455 Factor de interacción hipotética con clatrina: Epsina; Proteina loe 007 lOC OS04 51110 co640541 Proteína re tiliva CDC20 WD Loc 006 lOC 0504 51100 co651091 Proteína de la síntesis de cobalamina Loe 005 l OC 0504951090 pc0571541 Proteína hipotética loc 004 l oe 003 lOC Os04951080 lOC 0504 51070 pco525409 c0553755 Scramblasa Proteína hi otética 2 6544 rAZA91 05 Loe 002 Loe 00' lOC 0504051060 loe 0504951050 pc0644099 pco588179 Proteina hipotética Protein uinasa rece tora Por ejemplo, los marcadores en el grupo de ligamiento 2 que estan ligados a MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105 incluyen los indicados en la Tabla 12. Tabla 12 De manera similar, los marcadores asociados (incluyendo los marcadores ligados estrechamente) de la invención pueden determinarse analizando cualquier mapa genético apropiado de malz. Por ejemplo, pueden hallarse mapas genéticos integrados en el recurso de lnternet de MaizeGDB. No se pretende limitar la determinación de los marcad':lres asociados o ligados estrechamente al uso de un mapa genético de maíz particular. En efecto, hay una gran cantidad de mapas genéticos de maíz disponibles que son bien conocidos por aquellos expertos en la materia. Como alternativa, la deteoninación de los marcadores ligados y ligados estrechamente puede realizarse generando un conjunto de datos experimental y realizando un análisis de ligamiento. Tampoco se pretende limitar la identificación de los marcadores que están ligados (por ejemplo, a aproximadamente 50 cM o aproximadamente 10 cM) n los QTL marcadores de resistencia al MRCV identificados en la presente documentación a un mapa o una o metodología particular. Los mapas genéticos integrados provistos en el sitio de Internet de MaizeGDB sirven solamente a modo de ejemplo para identificar marcadores ligados. En efecto, los marcadores ligados, tal corno se los define en la presente documentación, pueden determinarse a partir de cualquier mapa genético conocido en la tecnica (un mapa experimental o un mapa integrado) , o como alternativa, pueden determinarse a partir de cualquier conjunto nuevo de datos de mapeo. Vale destacar que las listas de marcadores ligados y ligados estrechamente pueden variar para distintos mapas y metodologias debido a diversos factores. Primero, los marcadores que son colocados en cualquiera de los dos mapas pueden no ser idénticos, y además, algunos mapas pueden tener una mayor densidad de marcadores que otros mapas. También, las poblaciones de mapea, las metodologías y los algoritmos usados para construir los mapas genéticos pueden diferir. Aquellos expertm; en la materia han de reconocer que un mapa genético no es necesariamente más o menos preciso que otro, y además, han de reconocer que cualquier mapa genético de maíz puede utilizarse para deteoninar marcadores que están ligados y ligados estrechamente a los QTL marcadores de la presente invención. Técnicas para detectar marcadores En la invención se proveen marcadores moleculares que tienen una probabilidad significativa de ca-segregación con QTL que imparten un fenotipo de resistencia al MRCV. Estos QTL marcadores pueden usarse en la selección asistida por marcadores para caracteres seleccionados (resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) , y también tienen otros usos. No se pretende limitar la invención a un método particular para la detección de estos marcadores. Los marcadores que corresponden a polimorfismos genéticos entre miembros de una población pueden detectarse mediante numerosos métodos bien establecidos en la técnica (por ejemplo, amplificación de secuencias espec1ficas basada en la peR, polimorfismos de la longitud de fragmentos de restricción (RFlPs) , marcadores de isozimas, hibridación especifica para alelos (ASH) , secuencias variables amplificadas del genoma vegetal, replicación de secuencias autosostenida, repeticiones de secuencias individuales (SSR) , polimorfismos de nucleótidos individuales (SNP) , ADN polimÓrfico amplificado al azar ("RAPO') o polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFlP) ) . En una realización adicional, la presencia o la ausencia de un marcador molecular es deteoninada simplemente a través de la secuenciación de nudeótidos de la región marcadora polimórfica. Este método puede adaptarse fácilmente para el análisis de alto desempeño, al igual que los otros métodos mencionados con anterioridad, por ejemplo, usando mélodos de secuenciación de alto desempeño disponibles, tales como la secuenciación por hibridación. En general, la mayoría de los marcadores genéticos s·e basan en una o más propiedades de los ácidos nudeicos para su detección. Por ejemplo, en algunas tecnicas para la detección de marcadores genéticos se utiliza la hibridación de una sonda de ácidos nucleicos con ácidos nucleicos que corresponden al marcador genético (por ejemplo, ácidos nudeicos amplificados producidos usando el AON genómico de maiz como molde) . los foonatos de hibridación, que induyen, sin limitaciones, los ens.ayos de hibridación en fase de solución, fase sólida, fase mixta o in situ son útiles para la detección de alelos. Puede hallarse una gura extensa para la hibridación de écidos nucldcos en Tijssen (1993) Laborator y Techniques in Biochemistr y and Molecular Biotogy -Hybridization with Nudeic Acid Probes Elsevier, Nueva York, así como en Sambrook y Ausubel (en la presente dorumentación) : y Berger y Kimmel, Guide to Molerular Clonina Technigues, Methods in Enzymology, volumen 152 Academic Press, Inc" San Diego, CA ("Berger") , Por ejemplo, los marcadores que comprenden polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) se detectan, por ejemplO, a través de la hibridación de una sonda que típicamente es un subfragmento (o un oligonudeótido sintético que corresponde a un subfraumento) del ácido nucleico a detectar mediante la digestión de restricción de AoN genómico, La enzima de restricción se selecciona para proveer fragmentos de restricción de al menos dos longitudes alternativas (o polimórfico, s) en individuos o poblaciones diferentes, La delerminación de una o más enzimas de restricción que producen fragmentos informativos para cada cruzamiento es un procedimiento simple, bien conocido en la técnica, Después de la separación por tamaño en una matriz apropiada (por ejemplo, agarosa o poliacrilamida) y la transferencia a una membrana (por ejemplo, nitrocelulosa, nylon, etcétera) , la sonda marcada se hace hibridar b;ajo condiciones que resultan en la unión de equilibrio de la sonda al diana, a to que sigue la remodón del exceso de sonda por lavado, Las sondas de acidos nucleicos contra los loci marcadores pueden ser clonadas y/o sintetizadas, Puede emplearse cualquier marca apropiada con una sonda de la invención, Las marcas detectables apropiadas para el uso con sondas de ácidos nudeicos incluyen, por ejemplo, cualquier composición detectable por medios espectroscópicos, radioisotópicos, fotoquimicos, bioquímicos, inmunoquimicos, eléctricos, ópticos o químicos, Las marcas útiles incluyen biotina, para realizar una coloración con un conjugado de estreptavidina marcada, esferas magnéticas, fluorocromos, radiomarcas, enzimas y marcas colorimétricas, Otras marcas incluyen ligandos que se unen a anticuerpos marcados con fluoróforos, agentes quimioluminiscentes y enzimas. Una sonda también puede prepararse con cebadores de PCR radiomarcados que son utilizados para generar un amplicón radiomarcado, Pueden hallarse estrategias de marcado para el marcado de ácidos nUcleicos, y las estrategias de detección correspondientes, por ejemplo, en Haugland (1996) Handbook of Fluorescent Probes aM Research Chemicals, sexta edición, por Molecular Probes. Inc. (Eugene OR) ; o en Haugland (2001) Handbook of Fluorescent Probes and Research Chernicals, octava edición, por Molecular Probes, Inc. (Eugene OR) (disponible en CD ROM) . Métodos de detección basados en amplificación La PCR, RT-PCR Y LCR tienen un uso particularmente amplio como métodos de amplificación y amplificacióndetección para amplificar los acidos nudeicos dE! interés (por ejemplo, aquellos que comprenden loo marcadores) , lo que facilita la delección de los marcadores. Pueden hallarse detalles relacionados con el uso de estos y otros métodos de amplificación en cualquiera: de una variedad de textos convencionales, que incluyen, por ejemplo, Sambrook, Ausubel, Berger y Croy, en la presente documentación. En diversos textos de biologia disponibles también pueden hallarse discusiones exte'nsas acerca de la PCR y de los métodos de amplificación relacionados. Aquellos expertos en la materia han de apreciar que esencialmente cualquier ARN puede ser convertido en un ADN de cadena doble apropiado para la digestión por restricción, expansión por PCR y secuenciación usando la transcritasa inversa y una polimerasa ("PCR de transcripción inversa", o "RT-PCR") . Véase también Ausubel, Sambrook y Berger, supra. Métodos de amplificaciónl detección en tiempo real En un aspecto, la PCR o la LCR en tiempo real se fl:!alizan sobre las mezclas de amplificación descritas en la presente documentación, por ejemplo, usando SenalE!S moleculareS o sondas TaqManTt, j. Una senal molecular (MB) es un oligonudeótido o un PNA que, bajo condiciones de hibridación apropiadas, autohibrida para formar una estructura de tallo-Iazo. La MB tiene un fluorocromo y un componente quencher en las terminales del oligonucleólido o el PNA; por lo tanlo. bajo condiciones Que permiten una hibridación intramolecular, el fluorocromo tipicamente es absorbido (o al menos alterado en su fluorescencia) por el componente quencher. Bajo condiciones donde la MB no presenta una hibridación inlramolecular (por ejemplo, cuando está unida a un ácido nucleico diana, por ejemplo, a una región de un amplicón durante la amplificación) , el fluorocromo MB no es absorbido. Los detalles relacionados con los metodos convencionales para hacer y usar MB están bien establecidos en la literatura, y los MB eslán disponibles a partir de una cantidad de fuentes de reactivos comerciales. Véanse también, por ejemplo, Leone el al. (1995) -Molecular beacon probes combined wilh amplificalion by NASBA enable homogenous real-tin1e deteclion of RNN, Nudeic Acids Res. 26:2150-21 55; Tyagi y Kramer (1996) "Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization" Nature Biotechnology 14:303-308: Blok y Kramer (1997) "Amplifiable hybridization probes containing a molecular switch" Mol Cell Probes 11 :187-194; Hsuih et al. (1997) "Novel, ligalion-dependent PCR assay for detection of hepatitis C in serum" J Clin Microbiol 34:501_507; Kostrikis et al. (1998) HMolecular beacons: spectral genotyping of human alleles" Science 279:1228-1229; Sokol et al. (1998) "Real lime delection de DNA: RNA hybridization in living cells" Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:11538-11543; Tyagi et al. (1998) "Multicolor molecular beacons for allele discrimination~ Nature Biolechnoloay 16:4953; Bonnet el al. (1999) ~Thermodynamic basis of Ihe chemical specificity ofslruclured DNA probes" Proc. Natl. Acad. Sc!. U.SA 96:6171-6176; Fang et al. (1999) "Designing a novel molecular beacon for surface-immobilized DNA hybridization studies" J, Am. Chem, Soco 121 :2921-2922; Marras et al. (1999) "Multiplex detection of single-nucleolide variation using molecular beacons" Gene" Anal. Biomol. Eng. 14:151-156; y Vet et al. (1999) "Multiplex detection of four pathogenic retroviruses using molecular beacons' Proc. Natl. Acad. Se¡ U.SA 96:6394-6399. Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con la construcción de MB y su uso en la literatura de patentes, por ejemplo, en las Patentes de los EEUU Nº 5925517, 6150097 Y 6037130. La detección y la cuantificación de la PCR usando sondas de oligonucleótidos f1uorogénicas marcadas de forma dual, conocidas comúnmente como sondas ~TaqMan TM ", también puede realizarse de acuerdo con la presente invención. Estas sondas están compuestas por oligodesoxinucleótidos cortos (por ejemplo, 20-25 bases) que están marcados con dos fluorocromos diferentes. En el extremo 5' de cada sonda se encuentra un fluorocromo reporter, yen el extremo 3' de cada sonda se encuentra un fluorocromo ~quencher". La secuencia de la sonda oligonucleotidica es complementaria con una secuencia diana intema presente en un amplicón de PCR. Cuando la sonda está inlacta, ocurre una transferencia de enE!rgía entre los dos f1uoróforos y la emisión del "reporter" es absorbida por el "quencher" mediante FRET. Durante la fase de extensión de la PCR, la sonda es escindida por una actividad 5' nucleasa de la polimerasa usada en la reacción, con lo que se libera el ~reporter" del ~quencher" y se produce un incremento en la intensidad de etmisión del ~reporter". De acuerdo con esto, las sondas TaqMan™ son oligonucleótidos están marcados presentando también un ~quencher", donde el marcaje es liberado durante la amplificación merced a la acción exonucleasa de la polimerasa usada en la amplificación. Esto provee una medida en tiempo real de la amplificación durante la síntesis. Una variedad de reactivos TaqMan tM se hallan disponibles comercialmente, por ejemplo, en Applied Biosystems (Cuarteles Generales de la División en la Ciudad de Foster, CA) , también en una variedad de proveedores de especialidades, lales como Biosearch Technologies (por ejemplo, sondas "black hole quencher") . Detalles adicionales relacionados con las secuencias variables amplificadas, SSR. AFLP ASH , SNP y marcadores de isoenzimas Las secuencias variables amplificadas son las secuencias amplificadas del geooma de la planta que presentan una variabilidad elevada en los residuos de los ácidos nucleicos enlre miembros de la misma especie. Todos los organismos tienen secuencias genómicas variables, y cada organismo (con la excepción de un clon) tiene un con junio diferente de secuencias variables. Una vez identificada, la presencia de secuencias especificas variables puede ser usada para predecir caracteres fenotipicos. Es preferible que el ADN de la planta sirva como molde para la amplificación con cebadores que rodean una secuencia de ADN variable. La secuencia variable es amplificada y luego secuenciada. Como alternativa, la replicación autososlenida de la secuencia puede utilizarse para identificar marcadores genéticos. La replicación autosostenida de la secuenda hace referencia a un método de amplificación de ácidos nucleicos donde se utilizan secuencias de ácidos nucleicos diana que se replican exponencialmente in vitre bajo condiciones sustancialmente isotérmicas, haciendo uso de tres actividades enzimáticas relacionadas con la replicación retroviral: (1) Transcriptasa reversa, (2) AHNasa H, y (3) una ARN pOlimerasa dependiente de ADN (Guatelli et al. (1990) Proc Natl Acad Sci USA 87:1874) . Al imitar una estrategia retroviral para la replicaCión del ARN a través de intermediarios de ADNc, esta reacción permite acumular copias de ADNc y ARN de la diana original. También pueden utilizarse como marcadores genéticos los polimorfismos de longitud de fragmentos amplificados (AFLP) (Vos el al. (1995) Nucleic Acids Res 23:4407) . La frase ' polimorfismo de longitud de fragmentos amplificados" hace referencia a los fragmentos de restricción seleccionados que son amplificados antes o después de la escisión por una endonucleasa de restricción. El paso de amplificación permite una detección más fácil de los fragmentos de restricción especificas. los AFLP permiten detectar una gran cantidad de marcadores pOlimórficos, y han sido utilizados para el mapeo g, anético de plantas (Becker et al. (1995) Mol Gen Genet 249:65; y Meksern et al. (1995) Mol Gen Genet 249:741 La hibridación especifica para alelos (ASH) puede utilizarse para identificar los marcadores genéticos de la invención. La tecnologia ASH se basa en el apareamienlo estable de una sonda corta de cadena simple de oligonucleótidos con un ácido nucleico diana de cadena simple completamente complementario. La detección se realiza a través de una marca isotópica o no isotópica adosada a la sonda. Para cada pOlimorfismo, se diseñan dos o más sondas de ASH diferentes que poseen secuencias de ADN idénticas, excepto los nudeótidos polimórficos. Cada sonda poseerá una homologia exacta con una secuencia alélica, de tal forma que el conjunto de sondas pennita distinguir todas las secuencias alélicas alternativas conocidas. Se hace hibridar cada sonda con el ADN diana, Con las condiciones de hibridación y el disei'io de sondas apropiados, una diferencia de una sola base entre la sonda y el ADN diana impedirá la hibridación. De esta forma, solamente una de las sondas alternativas hibridará con una muestra diana que es homocigota u homogénea para un alelo. las muestras que son helerocigotas o heterogéneas para dos alelos hibridarán con dos sondas alternativas. Los marcadores de ASH se utilizan como marcadores dominantes, donde la presencia o la ausencia de sólo un alelo se determina a partir de la hibridación o la falta ¡:le hibridación de solamente una sonda. El alelo alternativo puede inferirse a partir de la falta de hibridación. Las sondas de ASH y las moléculas diana opcionalmente son ARN o ADN; las moléculas diana tienen cualquier kmgitud de nucleótidos, más allá de la secuencia que es complementaria a la sonda; la sonda se diseria para que hibride con cualquiera de las cadenas del ADN diana; la sonda tiene un tamario variable para adaptarla a condiciones de rigurosidad variable, etcétera. La PCR permite amplificar la secuencia diana para la ASH a partir de concentraciones bajas de ácidos nucleicos en volúmenes relativamente pequenos. Por otro lado, la secuencia diana proveniente del ADN genómico se digiere con una endonucleasa de restricción y se separa mediante una electroforesis en gel. La hibridación tlpicamente se realiza con la secuencia diana unida a la superficie de una membrana, o tal como se describe en la Patente de los EEUU Nº 5468613, la secuencia de la sonda de ASH puede unirse a una membrana. En una realizacjón, los datos de la ASH típicamente se obtienen amplificando fragmentos de ácidos nucleicos (amplicones) a partir de ADN genómico utilizando una PCR, transfiriendo el ADN diana del amplicón a una membrana en un formato de transferencia puntual (dol-blof) , haciendo hibridar un oligonucleótido sonda marcado con el amplicón diana, y observando los puntos de hibridación mediante una autorradiografia. Los polimorfismos de nucleótidos individuales (StJP) son marcadores que consisten en una secuencia compartida que se diferencia en un solo nudeótido. Tipicamente, esta distinción se detecta por el patrón de migración diferencial de un amplicón que contiene el SNP, por ejemplo, en un gel de acrilamida. Sin embargo, también son apropiados métodos otros de detección, tales como la hibridación, por ejemplo, la ASH, o el análisis de RFLP. Como marcadores genélicos pueden emplearse 10~i marcadores de isoenzimas, por ejemplo, para raslrear marcadores distintos de los marcadores de resistencia mencionados en la presente documentación, o para rastrear marcadores de isoenzima asociados a los marcadores descritos en la presente documenlación. Las isoenzimas son múltiples formas de enzimas que difieren unas de otras en su secuencia de aminoácidos, y por lo tanto, en sus secuencias de ácidos nucleicos. Algunas isoenzimas son enzimas multiméricas que contienen subunidades ligeramente diferentes. Otras isoenzimas son tanto multiméricas como monoméricas, pero deben ser escindidas desde la proenzima en distintos sitios de su secuencia de aminoácidos. Las isoenzimas pueden caracterizarse y analizarse a nivel proteico, o como alternativa, pueden determinarse isoenzimas que difieren a nivel de los ácidos nudeicos. En estos casos, puede utilizarse cualquiera de los métodos basados en ácidos nudeicos descritos aquí para analizar marcadores de isoenzima. Detalles adicionales relacionados con la amplificadón de ácidos nucleícos Como se ha mencionado, los procedimientos de amplificación de ácidos nudeicos, tales como la PCR y LCR, son bien conocidos en la técnica y pueden aplicarsl! a la presente invención para amplificar y/o detectar los ácidos nucleicos de interés, tales como los ácidos nucleicos que comprendan loci marcadores. Aquellos expertos en la materia han de poder hallar ejemplos de procedimientos apropiados de métodos in vitro en las referencias mencionadas con anterioridad, por ejemplo, Innis, Sambrook, Ausubel, Berger y Croy, donde dichos métodos incluyen la reacción en cadena de la pOlimerasa (PC R) , la reacción en cadena de la ligasa (LCR) , la amplificación de la QI3Jl-replicasa y otros procedimient'Js mediados por la ARN polimerasa (por ejemplo, NASBA) . 45 Pueden hallarse detalles adicionales en Mullis et al. (1987) Patente de los EEUU Nº 4683202; Amheim & Levinson po de Octubre, 1990) C&EN 36-47; The Jouma' of NIH Research (1991) 3, 81-94; (Kwoh el al. (1989) PrQC. Nat!. Acad. Sci. USA 86, 1173; Guate1li et al. (1990) Proc. Natl. Acad. So. USA 87, 1874; Lomell el al. (1989) J. crn. Chem 35:1826; Landegren el al. (1988) Science 241 :1077-1080; Van Brunt (1990) Biotechnology 8:291-294; Wu y Wallace (1989) Gene 4: 560; Barringer el al. (1990) Gene 89:117; y Sooknanan y Malek (1995) Biolechnology 13:563-564. Los métodos mejorados para amplificar grandes ácidos nucleicos por PCR que son útiles en el contexto de la d onación posicional se resumen adicionalmente en Cheng et al. (1994) Nature 369:684, y las referencias ciladas en dicha publicación, y con ellos pueden generarse amplicones de PCR de hasta 40 kb. Detección de marcadores para clonación posiciom!! En algunas realizaciones, se utiliza una sonda de ácido nucleico para detectar un ácido nucleico que posee una secuencia marcadora. Estas sondas pueden utilizarse, por ejemplo, en la clonación posicional, para aislar secuencias de nudeótidos ligadas a la secuencia de nucleótidos marcadora. No se pretende limita las sondas a sondas de un tamano en particular. En algunas realizaciones, la sonda de ácido nuclcico tiene al menos 20 nudeótidos de longitud, o como allemativa, al menos 50 nucleótidos de longitud, o como alternativa, al menos 100 nucleótidos de longitud. o como alternativa, al menos 200 nudeótídos de longitud. Una sonda hibridada se detecta utilizando autorradiO!}rafia, nuorografia u olras técnicas de detección similares, 65 dependiendo de la marca a detectar. Los ejemplos de protocolos de hibridación espeCíficos se encuentran ampliamente disponibles en la técnica; véase, por ejemplo, Berger, Sambrook, y Ausubel, todos en la presente documentación. Métodos de siotesis de sondasfcebadores En general, los métodos de síntesis para fabricar oIigonucleótidos, incluyendo sondas, cebadores, set\ales moleculares, PNA, LNA (ácidos nucleicos cerrados) , etcétera, son bien conocidos. Por ejemplo, los oligonudeótidos pueden ser sometidos a una sinte~:is quimica de aOJerdo con el método de fase sólida de triéster de fosforamidita, descripto por Beaucage y Caruthers (1981) , Tetrahedron Letts. 22 (20) :1859-1862, por ejemplo, usando un sintetizador automatizado disponible comercialmente, por ejemplo, como se describe en Needham-VanDevanter et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12:6159-6168. Aquellos expertos en la materia también pueden ordenar los oligonudeótidos, incluyendo los oligonucleótidos modificados, en una variedad de fuentes comercial. Existen muchos proveedores comerciales de servicios de oIigo síntesis, y por lo tanto, se trata de una tecnologfa ampliamente accesible. Cualquier ácido nucleico puede ser ordenado a medida a cualquiera de una variedad de fuentes comerciales, tales como The Midland Certified Reagent Company, The Great American Gene Company, ExpressGen Inc., Operan Technologies Inc. (Alameda, CA) , y muchos otros. De forma similar, los PNA pueden ser ordenados a medida a cualquiera de una variedad de fuentes, tales como PeptidoGenic, HTI Bio-ProdUctos, Inc., BMA Biomedicals Ud (Reino Unido) , Bio·Synthesis, Inc., y muchos otros. Detección de marcadores io silico En realizaciones alternativas, los métodos in si/ica pueden ser usados para detectar loci marcadores de interés. Por ejemplo, la secuencia de un ácido nucleico que comprende el locus marcador de interés puede ser almacenada en un ordenador. La secuencia del locus marcador deseado o su homóloga puede ser identificada usando un algoritmo de busqueda de ácidos nucle:icos apropiado, tal como los provistos, por ejemplo, en programas filcilmente disponibles, tales como BLAST, o aun en procesadores de texto simples. Cebadores de amplificación para detectar marcadclres En algunas realizaciones preferidas, los marcadores rnoleculares de la invención se detectan usando un método de detección basado en PCR apropiado, donde el tamaño o la secuencia del amplicón de PCR son indicativos de la ausencia o la presencia del marcador (por ejemplo, un alelo marcador en particular) . En dichos tipos de métodos, los cebadores de PCR hibridan con las n~giones conservadas que rodean la región del marcador polimórfico. Según se acostumbra en la técnica, los cebadores de PCR que se utilizan para amplificar un marcador molecular se denominan a veces ·marcadoro~s de PCR" o simplemente "marcadores." Ha de apreciarse que, aunque en la presente doo.Jmentación se proveen muchos ejemplos especificos de cebadores (véase la Tabla 3) , es posible diseñar cebadores apropiados para utilizar con la invención usando cualquier método apropiado. No se pretende limitar la invención a un cebador o un par de cebadores en particular. Por ejemplo, los cebadores pueden diseñarse usando cua lquier programa de software apropiado, tal COmo LASERGENE"". En algunas realizaciones, los cebadores de la invendón son radiomarcados, o se marcan mediante cualquier medio apropiado (por ejemplo, usando un marcador fluorescente no radiactivo) , para permitir una visualización rápida de los amplicones de distinto tamaño después de la reacción de amplificación, sin un paso de marcado o un paso de visualización adicional. En algunas realizaciones, los cebadores no son marcados, y los amplicones se visualizan después de su resolución en función de su tamaño, por ejemplo, después de una electroforesis en gel de agarosa. En algunas realizaciones, la coloración de los amplicones de PCR con bromuro de etidio después de la resolución en función del tamaño permit:e la visualización de los amplicones de distintos tamai'ios. Los cebadores de la invención no se limitan a la generación de un amplicón de un tamaño en particular. Por ejemplo, los cebadores que se utilizan en la invención para amplificar los locus y los alelas del marcador no se limítan a amplificar la región completa dellocus relevante. Los cebadores pueden permitir generar un amplicán de cualquier longitud apropiada. En algunas realizaciones, la amplificación del marcador produce un amplicón de al menos 20 nucleótidos de longitud, o como altemativa, al menos 50 nudeótidos de longitud, o como alternativa, al menos 100 nucleótidos de longitud, o como alternativa, al menos 200 nucleótidos de longitud. Selección y desarrollo de plantas asistidos por marcadores Una motivación primaria para el desarrollo de marcadores molecutares en especies de cultivo es la posibilidad de incrementar la eficiencia en el cruzamiento de plantas a través de selección asistida por marcadores (MAS) . Los marcadores genéticos se utilizan para Identificar las plantas que contienen un genotipo deseado en uno o más lacus, de las que se espera que transfieran el genotipo deseado a su progenie, junto con un fenotipo deseado. Pueden utilizarse marcadores genéticos para identific;ar las plantas que contienen un genotipo deseado en un locus, o en varios locus no ligados o ligados (por ejemplo, un haplotipo) , de las que podria esperarse que transfirieran el genotipo deseado a la progenie, junto con un fenotipo deseado. En la presente invención se provee el medio para identificar plantas, particularrnente plantas de maiz, que tienen resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada, o que son susceptibles al MRCV, por medio de la identificación de aquellas plantas que tienen un alelo especifico en uno de diversos loci, por ejemplo, MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826 o MZA9105. En una realización, las plantas resistentes identificadas tienen el siguiente haplotipo: C en MROV_08351-173, A en MROV_08351-262, G en MROV_08351-280, G en MROV_08351-323, C en MROV_08351-369, C en MROV_08351-372. De manera similar, al identificar plantas que carecen del locus marcador deseado, pueden identificarse las plantas susceptibles o menos resistentes, y por ejem plo, pueden eliminarse de los cruzamientos subsiguientes. De manera similar, dichos loci marcadores pueden introducirse en cualquier antecedente genómico, germoplasma, planta, línea o variedad deseada, etcétera, como parte de un programa de desarrollo general MAS diseñado para mejorar el rendimiento del maíz. En una realización, las plantas susceptibles identificadas tienen el siguiente haplotipo: T en MRQV_08351-173, T en MRQV_08351-262, A en MRQV_08351-280, C en MRQV_08351-323, T en MRQV_08351-369, T en MR () V _08351 -372. En la invención también se proveen intervalos de QTl cromosómicos que también pueden usarse en la MAS para seleccionar aquellas plantas que presentan resistencia conferida recientemente o mejorada al MRCV. De manera similar, los intervalos de QTL también pueden usarse para realizar una selección negativa de aquellas plantas que son susceptibles o tienen una resistenc:ia reducida al MRCV. Con la invención puede emplearse cualquier marcador localizado dentro del intervalo de QTL (incluyendo los extremos de los intervalos) . Estos intervalos están definidos por los siguientes pares de marcadores: (i) MZA8381 Y MZA18180: (ji) MZA4305 Y MZA2803; (iii) MZA 15490 Y MZA2038; (iv) bnlg1458b y umc1261a; (v) bnlg1458b y umc1262a; (vi) bnlg1327 y umc1261a; y (viii) bnlg1327 y umc1262a. En general, en la MAS se utilizan marcadores polimórficos en los que se ha identificado una probabilidad de cosegregación significativa con un carácter de resistencia. Se supone que dichos marcadores están localizados cerca de uno o más genes que le confieren a la plant.a su fenotipo de resistencia, se consideran indicadores del carácter deseado. y se denominan marcadores QTl. En las plantas se busca la presencia de un alelo de!;eado en el marcador QTL. los marcadores (o los alelos marcadores) más preferidos son aquellos que tienen la asociación más fuerte con el carácter de resistencia. Se utiliza un análisis de unión para determinar cuál alelo marcador polimórfico presenta una probabilidad estadística de co-segregación con el fenolipo de resistencia (por lo tanto, se trata del ~alelo marcador de resistencia") . Después de la identificación merced a la co-segregación de un alelo marcador con el fenotipo de resistencia, es posible utilizar este marcador para una detección rápida y precisa del alelo de resistencia en lineas de plantas, sin la necesidad de cultivar las plantas a traves de su ciclo vital y esperar evaluaciones fenotípicas. y además, permite la detección genétic:a del alelo de resistencia en particular, aún cuando la identidad molecular del QTl de resistencia real sea desconocida. Pueden tomarse muestras de tejido, por ejemplo, desde la primera hoja de la planta, y puede analizárselas con el marcador molecular apropiado. para determinar rápidamente cuál progenie avanzará. los marcadores ligados también permiten eliminar la influencia de factores ambientales que frecuentemente pueden influir en la expresión fenotipica. Puede utilizarse un locus marcador QTL polimórfico para seleccionar aquellas plantas que contienen el alelo (o los alelas) marcador que está correlacionado con el fenotipo de resistencia deseado, lo que tipicamente se denomina selección asistida por marcadores (MAS) . En resumen , se detecta un ilcido nucleico correspondiente al ácido nudeico del alelo marcador en una muestra biológica proveniente de una planta a seleccionar. Esta detección puede tomar la forma de la hibridación de un ácido nucleieo sonda con un alelo marcador o un amplicón de éste, por ejemplo, usando una hibridación con especificidad por alelos, un análisis Southern, un análisis Northern, una hibridación in situ, una hibridación de cebadores seguida por una amplificaCión por PCR de una región del marcador, o semejantes. En la presente documentación se describe una variedad de procedimientos para detectar marcadores, por ejemplo, en la sección intitulada "Técnicas para detectar marcadores". Después de verificar la presencia (o la ;ausencia) de un alelo marcador en particular en la muestra biológica, la planta se selecciona, (por ejemplo, se utiliza para desarrollar progenie por medio de un cruzamiento selectivo) . los encargados del cultivo de plantas de maíz desean combinaciones de locus de resistencia con genes de alto rendimiento y olros caracteres deseables para desarrollar variedades de maíz mejoradas. El análisis de grandes cantidades de muestras mediante métodos no moleculares (por ejemplo, evaluación de caracteres en plantas de maíz) puede ser costoso, demorar mucho tiempo y re$ultar poco confiable. El uso de los marcadores polimórficos que se describen en la presente documentación, cuando están ligados genéticamente a un locus de resistencia, provee un método efectivo para seleccionar variedades resistentes en programas de desarrollo. Por ejemplo, una ventaja de la selección asistida por marcadores con relación a las evatuaciones de resistencia en el campo es que la MAS puede realizarse en cualquier momento del año, independientemente de la lemporada de cullivo. Además, en su mayor parte, lOs efectos ambientales son irrelevantes para la selección asistida por marcadores. Cuando segregan varios locus que afectan uno o varios caracteres en una población, por ejemplo, varios locus asociados con la resistencia, o varios locus asociados cada uno con la resistencia a diferentes enfermedades, la eficiencia de la MAS en comparación con el análisis fenotlpico se toma aun mayor. ya que tOdos los locus pueden evaluarse juntos en el laboratorio a partir de una única muestra de ADN. En este caso, pueden evaluarse los marcadores MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA11826 y MZA9105, así como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (iii) MZA15490 y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261a, y (viii) bntg1327 y umc1262a, de manera simultánea o consecutiva, a partir de una sola muestra o una población de muestras. otro uso de la MAS en el cruzamien10 de plantas consiste en asistir en la recuperación del genotipo progenitor recurrente por retro cruzamiento. El retrocruzamiento es un proceso que comprende volver a cruzar una progenie con uno de sus progenitores o líneas progenitoras. El retrocruzamiento comunmente se realiza con el propósito de intrOducir un locus o unos pocos loci desde un pro~lenitor donante (por ejemplo, un progenitor que comprende loci marcadores de resistencia deseables) en un fondo genético que es deseable en los aspectos restantes provenientes del progenitor recurrente (por ejemplO, una línea de maiz que de otra manera tendria alto rendimiento) . Cuantos más ciclos de retrocruzamiento se realicen, mayor será la contribución genética del progenitor recurrente a la variedad introducida que se obtiene. Frecuentemente, esto es necesario porque las plantas resistentes pueden no ser deseables en otros aspectos, por ejemplo, debido un rendimiento bajo, una fecundidad baja, etcétera. En contraste, las cepas que son el resultado de programas de desarrollo intensivos pueden tener un rendimiento o una fecundidad eXCE~lentes, o semejantes, pero pueden ser deficientes en un carácter deseado. tal como la resistenCia al MRCV. La presencia y/o la ausencia de un marcador genético o un alelo particular, por ejemplo, los marcadores MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2{) 38, MZA11826 y MZA9105, asi como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 y MZA2803, (iii) MZA15490 y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261a, y (viii) bnlg1327 y umc1262a, en el genoma de una planta, puede determinarse mediante cualquier método mencionado en la presente documentaCión. Si los ácidos nucleicos provenientes de la planta son positivos con relación a un alelo marcador genético deseado, la planta puede autofertilizarse para crear una verdadera linea de cruzamiento con el mismo genotipo, o puede cruzársela con una planta con el mismo marcador o oon otras características deseadas para crear una generación híbrida por medio de un cruzamiento sexual. Introducción de alelas favorables -retrocruzamienlto eficiente de marcadores de resistencia en líneas elite Una aplicación de la MAS en el contexto de la presente invención es en el uso de los marcadores de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada paral incrementar la eficiencia del esfuerzo de introducción o retrocruzamiento dirigido a la introducción de QTL de resistencia en un antecedente deseado (típicamente de alto rendimiento) . En el retrocruzamiento asistido por marcadores de marcadores especificos (y QTL asociados) a partir de una fuente donante, por ejemplo, en un fondo genético elite o exótico, se realiza una selección entre la progenie del retrocruzamiento para el carácter donante, y luego se utiliza el retrocruzamiento repelida con la linea elite o exótica para reconstituir tanto del genoma del antecedente elite/exOtico como sea posible. Por lo tanto, los marcadores y los métodos de la prnsente invención pueden utilizarse para guiar la selección asistida por marcadores o el cruzamiento de variedMes de malz con el complemento deseado (conjunto) de formas alélicas de segmentos de cromosomas asociados con un rendimiento agricola superior (de resistencia, junto con cualquier otro marcador disponible de rendimiento, etcétera) . Cualquiera de los alelos marcadores descritos puede introducirse en una línea de maiz por introducción, cruzamiento tradicional (o puede introducirse por transformación, o ambas) para obtener una planta de maíz con un rendimiento agrícola superior. La cantidad de alelos asociados con la resistencia que pueden in'lroducirse o que pueden estar presentes en una planta de maíz de la presente invención varia dentro del rango entre 1 y la cantidad de alelos descrita en la presente documentación, y cada uno de estos valores se incorpora en la presente documentación como si se mencionara de manera explicita. la presente invención también se extiende a un método para crear una progenie de plantas de maiz, y a dicha progenie de plantas de maíz per se. El método comprende cruzar una primera planta de malz progenitora con una segunda planta de maíz, y cultivar la planta de maíz femenina bajo condiciones apropiadas para el crecimiento de la planta para obtener una progenie de plantas de maiz. Los métodos de cruzamiento y cultivo de plantas de maíz se encuentran dentro de la capacid, :ld de aquellos expertos en la materia. Dima progenie de plantas de maíz puede analizarse en busca de alelos asociados con resistencia, y de esa manera puede selecciOnarse la progenie deseada. Dicha progeni~~ de plantas o semillas puede comercializarse para la producción de marz, puede utilizarse para alimentos, puede procesarse para obtener un constituyente deseado del malz, o puede utilizarse adicionalmente en episoduos de cruzamiento subsiguientes. Por lo menos una de las primera o segunda planta de maíz es una planta de malz de la presente invención, ya que al menos una de las formas alélicas de los marcadores de la presente invención, de manera tal que la progenie es capaz de heredar el alelo. Un método de la presente invención puede aplicarse a al menos una planta de maíz relacionada, tal como de lineas progenitoras o descendientes en el pedigrí de la planta de maíz en cuestión, de modo que sea posible rastrear el alelo de resistencia deseado. La cantidad de generaciones que separan las plantas de maíz sometidas a los métodos de la presente invención será en general de entre 1 y 20, comúnmente entre 1 y 5, Y típicamente 1, 2, 6 3 generaciones de separación, y más frecuentemente, se someterá al método a un descendiente o un progenitor diredo de la planta de maiz (es decir, una generación de separación) . Introducción de alelos favorables incorporación de gennoplasma "exótico" mientras se mantiene el progreso del cruzamiento La diversidad genética es importante para la ganancia genética a largo plazo en cualquier programa de desarrollo. Con una diversidad limitada, la ganancia genética eventualmente llegará a una meseta cuando todos los alelas favorables se hayan fijado en la población elite. Un objetivo consiste en incorporar diversidad en un lote elite, sin perder la ganancia genética que ya se ha conseguido y con una inversión lo minima posible. la MAS provee una indicaciÓn de cuáles regiones genómicas y cuáles alelos favorables provenientes de los ancestros original se han seleccionado y se han conservado durante el transcurso del tiempo, lo que facilita [os esfuerzos para incorporar variaciones favorables de fuentes de germoplasma exótico (progenitores que no están relacionados con el lote de genes elite) con la e$peranza de encontrar alelos favorables que no existan actualmente en el lote de genes elite. Por ejemplo, los marcadores de la presente invención pueden utilizarse para la MAS en cruzamientos relacionados con lineas de maíz elite x exóticas, sometiendo a la progenie que se esta segregando a una MAS para mantener los alelos de rendimiento principales, j unto con los alelos marcadores de resistencia descritos en la presente documentación. Clonación posicional Los loei marcadores moleculares y los alelos de la presente invención, por ejemplo, los marcadores MZA625, MZA16656, MZA15451, MZA15490, MZA2038, MZA'l1826 Y MZA91 05, así como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (¡ii) MZA 15490 Y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327y umc1261a, y (viii) bnlg1327 y umc1262a, pueden utilizarse, segun se indicó con anterioridad, pElra identificar un QTL de resistencia, el cual puede donarse mediante procedimientos bien establecidos, por ejemplO, segun se describe en detalle en Ausubel, Berger & Sambrook, citado en la presente documentación. Dichos clones con resistencia se identifican en primer lugar por su ligamiento genético con los marcadores de la presente invención. El aislamiento de un :.tcido nudeico de interés se realiza mediante cualquier cantidad de métodos, tal como se describe en detalle en referencias tales como Ausubet, Berger & Sambrook, citado en la presente documentación, y Clark, editor (1997) Plant Molecular Biology: A Laboratorv Manual Springer-Verlag, Berlin. Por ejemplo, en la "clonación posicional de genes~ se utitiza la proximidad de un marcador de resistencia para definir fisicamente un fragmento cromosómico aislado que contiene un QTL de un gen de resistencia. El fragmento cromosómico aislado puede producirse utilizando métodos bien conocidos, tales como la digestión de ADN cromosómico Con una o más enzimas de restricción, o la amplificación de una región cromosómica en una reacción en cadena de polimerasa (peR) , o con cualquier reacción de amplificación alternativa apropiada. El fragmento digerido o amplificado típicamente se une a un vector apropiado para la replicación, V por ejemplo, la expresión del fragmento insertado. l os marcadores que son adyacentes a un marco abierto de lectura (ORF) asociado con un carácter fenotípico pueden hibridar .:on un clan de ADN (por ejemplo, un don proveniente de una biblioteca genómica de ADN) , con lo que puede· identificarse sobre cuál ORF (o fragmento de ORF) está localizado un don. Si el marcador es más distante, se identifica un fragmento que contiene el ORF mediante episodios sucesivos de selección y aislamiento de clones que Juntos comprenden una secuencia de AON contigua, un proceso que se denomina "rastreo cromósomico", que da como resultado un ·contig" o "mapa de contigs". Pueden encontrarse protocolos apropiados para guiar a aquellos expertos en la materia en el aislamiento de clones asociados COn marcadores ligados, por ejempto, en Berger, Sambrook V Ausubel, todos citados en la presente documentación. Generación de células y plantas transgénicas la presente invención también se relaciona con células y organismos huésped que han sido transformados con ácidos nucleicos correspondientes a un QTL de resistencia identificado de acuerdo con la invención. Por ejemplo, estos ácidos nudeicos incluyen intervalos c:romosómicos (por ejemplo, fragmentos genómicos) , ORF y/o AONc que codifICan un carácter de resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada. Adicionalmente, en la invención se provee la producción de polipéptidos que proveen resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada por medio de técnicas recombinantes. Los textos generales donde se describen técnicas de biologia molecular para la clonación y la manipulación de ácidos nucleicos, y ta producción de los polipéptidos codificados incluyen Berger, Sambrook y Ausubel, supra. En dichos textos se describe la mutagénesis, el uso de vectores y promolores, y muchos otros tópicos relevantes relacionados, por ejemplo, con la generación de clones que comprenden ácidos nudeicos de interés, por ejemplo, loci marcadores, Sondas marcadoras, QTl que se segregan con loci marcadores, etcétera. Las células huésped se diseñan genéticamente (por ejemplo, se transducen, transfectan, transforman, etcétera) con los veclores de la presente invención (por ejl:!mplo. veclores tales como vectores de expresión que comprenden un ORF derivado de un QTL de resistencia o relacionado COn éste) , que pueden ser, por ejemplo, un veclor de donación, un vector versátil o un vector de expresión. Dichos vectores toman la forma, por ejemplo, de un ptásmido. un fagémido, un Agrobacterium, un virus. un polinucleótido desnudo (lineal o circular) o un 45 polinucleótido conjugado. l os vectores pueden introducirse en bacterias, especialmente con el propósito de su propagación y expansión. l os vectores también se introducen en tejidos vegetales y se cultivan en Células vegetates o protoptastos vegetales mediante una vari, edad de métodos convencionales conocidos en la técnica, que induyen, sin limitaciones, electroporación (From et al. (1985) Proc. Nat!. Acad. Sci. USA 82; 5824) , infección con vectores virales, tales como el virus en mosaico dB la coliflor (CaMV) (Hohn et al. (1982) Molecular Biology of Plant Tumors (Academlc Press, Nueva York, pp. 549-560; Patente de los EEUU Nº 4407956) , penetración balística a alta velocidad con pequeñas partículas con el áddo nudeico, ya sea dentro de una matriz en esferas o partículas pequeñas, o sobre la superficie (Klein et al. (1987) Nature 327; 70) , uso de polen como veclor CNO 85101856) , o uso de Agrobacterium tumefaciens o A rf¡izogenes que contienen un pl:.tsmido ADN-T donde se elonan fragmentos de ADN. El ADN-T del plásmido se transmite a células vegetales al infectarlas con 55 Agrobacterium tumefaciens, V una pordón SA integra de manAra estable en el genoma de la planta (Horsch et al. (1984) Science 233; 496; Fraley et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Se.. USA 80; 4803) . Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con los métodos para introducir acidos nudeicos en Sambrook, Berger y Ausubel, supra. El método para introducir un ácido nucleico de la presente invención en una célula huésped no es critico para la presente invención, y no pretende limitar la invendón a un método en particular para introducir material genético exógeno en una célula huésped. Por lo tant o, con la invención puede emplearse y utilizarse cualquier método apropiado, por ejemplo, que inctuya, sin limitaciones, los métodos descritos en la presente documentación, que permita realizar una introducción efectiva de un acido nueleieo en una célula o un proloplasto. Las células huésped diseñadas pueden cultivarse en medios nutritivos convencionates modificados, según sea apropiado para dichas actividades, !al como con promotores activado res, o seleccionando las transfonnantes. Opcionalmente, dichas células pueden cultivarse pam obtener plantas transgénicas. Además de en Sambrook, Berger y Ausubel, supra, la regeneración de plantas a partir de protoplastos cultivados se describe en Evans et al. (1983) "Protoplast lsolation and Culture", Handboc) k of Plant Cel! Cultures 1, 124-176 (MacMillan Publishing Co., Nueva York; Davey (1983", "Recen! Developme, nts in the Culture and Regeneration of Plant Protoplasts", Protoplasts, pp. 12-29, (Birkhauser, Basel) ; Dale (1903) "Protoplast Culture and Plan! Regeneration of Cereals and Other Recalcitrant Crops', 31-41 , (Birkhauser, Basel) ; Binding (1985) "Regeneration of Plants', Plant Protoplasts, pp. , Boca Raton, FL) . Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con el cultivo y la regeneración de I vegetales en Payne et al. (1992) Plant Cell and Tissue Culture in liguid Systems, John Wiley & Sons, Inc. Nueva York, NY: Gamborg y Phillips (eds) (1995) Plant Cell, Tissue and Organ Culture; Fundamental Methods, Springer Lab Manual, Springer-Venag (Benin Heidelberg Nueva York) , y Plant Molecular Biology (1993) R. R. D. Croy, editor, Bios Scientific PUblishers, Oxford, Reino Unido. ISBN O 12 198370 6. También se describen medios de cultivo para células en general en Atlas y Parks (editores) Tbe Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Raton. FL. Puede hallarse infonnación adicional para el cultivo de células en literatura que puede adquirirse comercialmente, tal como life Science Research Cel! Culture Catalogue (1998) , de Sigma-Aldrich, Inc (St Louis, MO) ("Sigma-LSRCCC") , y por ejemplo, Plan! Culture Catalogue y suplementos (por f!jemplo, 1997 o posteriores) , también de Sigma-Aldrich, Inc (St Louis, MO) ("Sigma-PCCS·) . La presente invención también se relaciona con la producción de organismos transgénicos, que pueden ser bacterias, levaduras, hongos, animales o plantas, transducidos con los ácidos nucleicos de la invención (por ejemplo, écidos nudeicos que comprenden los loo y/o QTL marcadores descritos en la presente documentación) . Puede encontrarse una descripción exhaustiva de las técnicas relevantes para el cultivo de bacterias, organismos eucariotas unicelulares y célulats en las referencias citadas en la presente documentación y las que se mencionarán más adelante. Hay varios mélodos bien conocidos disponibles para introducir ácidos nucleicos diana en células bacterianas, cualquiera de los cuales puede utilizarse en la presente invención. ¡;stos induyen la fusión de las células receptora con protoplastos bacterianos que contienen el ADN, el tratamiento de las células con Wposomas que contienen el ADN, la e!ectroporación, el bombardeo con proyectiles (biolistica) , la administración por medio de fibras de carbono y la in.fecciÓn con vectores virales (que se describirá con mayor detalle más adelante) , etcétera. Las células bacteriélnas pueden utilizarse para amplificar los plásmidos que contienen las construcciones de ADN de la presente invención. Las bacterias se cultivan hasta la fase logarítmica, y los plásmidos dentro de las bacterias pueden aislarse mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Sambrook) . Además, pueden obtenerse comercialmente muchos conjuntos de elementos para la purificación de plásrnidos a partir de bacterias. Para su uso correcto, han de seguirse las instrucciones del fabricante (véase, por ejemplo, EasyPrep TM, FlexiPrep n.o , ambos de Pharmacia Biotech: StrataClean nA. de Stratagene. y QIAprep ™ die Qiagen) . Los plásmidos aislados y purificados se siguen tratando para producir otros plásmidos, que se utilizan para transfectar células vegetales o se incorporan en vectores relacionados con Agrobacterium tumefaciens para infectar plantas. Los vectores típicos contienen terminadores de la transcripción y la traducción, secuencias de inicio de la transcripción y la traducción, y promotores útiles para regular la expresión del écido nucleico diana en particular. Los vectores opcionalmente comprenden cassettes de expresión genéricos que contienen al menos una seruencia de terminación independiente, secuencias que permiten la replicación del cassette en eucariotas o procariotas, o ambos, (por ejemplo, vectores versátiles) . y marcadores de selección para sistemas procatiotas y eucariotas. los vectores son apropiados para la replicación y la integración en procariotas, eucariotas, o preferiblemente ambos. Véanse Giliman & Smith (1979) ~8: 81: Roberts et al. (Ut87) Nature 328: 731: Schneider et al. (1995) Protein Expr. Purif. 6: 10: Ausubel, Sambrook, Berger (supra) . Se provee un catálogo de bacterias y bacteriófagos útiles para la clonación, por ejemplo, en la Colección Americana de Tipos de Cultivo (ATCG) , por ejemplo, The ATCC Catalogue of Bacteria and Bacteriophage (1992) Ghema et al. (editores) , publicado por la ATCC. Los procedimientos básicos adicionales para la secuenciaeión, la clonación y olros aspectos de la biologia molecular, y las consideraciones teóricas subyacentes también pueden encontrarse en Watson et al. (1992) Recambinant DNA, Segunda Edición, Scienlific American Books, NY. Además, esencialmente cualquier ácido nucleico (y virtualmente cualquier ácido nuc1eico marcado, ya s·ea convencional o no convencional) puede encargarse a medida o como referencia en cualquiera de diversas fuentes comerciales, atles como Midland Certified Regent Company (Midland, TX) , The Grea! American Gene Company (Ramona, CA) , ExpressGen Inc. (Chicago, IL) , Operon Technologies Inc. (Alameda, CA) , y muchos otros. Introduccíón de ácidos nucleicos en plantas Las realizaciones de la presente invención se relacionan con la producción de plantas transgénicas que comprenden los ácidos nucleicos donados, por ejemplo, ORF y ADNc aislados genes que COdifican genes de resistencia. Las técnicas para transformar células vegetales con ácidos nudeicos pueden obtenerse y adaptarse fácilmente a la invención. Además de Berger, Ausubel y Sambrook, todos citados anteriormente, las referencias generalmente útiles para la donación, el cultivo y la regeneración de células vegelales incluyen Jones (editor) (1995) Plant Gene Transference and Expressjon Protocols Melhods in Molecular BiOlOQy, Volumen 49, Humana Press Towata NJ ("Jones") ; Payne et al. (1992) Plant Cel! and Tissue Culture in Liguid Systems, John Wiley & Sons, Inc. Nueva York, NY ("Payne") ; y Gamborg y Phillips (editores) (1995) Plant Cel!, Tissue and Organ Culture: Fundamental Methods, Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin Heidelberg Nueva York) ("Gamborg") . En Atlas y Parks (editores) The Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Raton, FL ("Atlas") se describe una variedad de medios de cultivo para células. Puede hallarse información adicional para el cultivo de células vegetales en literatura que~ puede adquirirse comercialmente, tal como life Sclence Research Cell Culture Catalogye (1998) , de Sigma-Aldrich, Inc (St Louis, MO) (Sigma-LSRCCC) , y por ejemplo, Plant Culture Catalogue y suplementos (1997) , también de Sigma-Aldrich, Inc (St Louis, MO) (Sigma-PCCS) . Pueden hallarse detalles adicionales relacionados con el cultivo de células vegetales en Croy. Las construcciones de ácidos nucleicos de la invención, por ejemplo, los plásmidos, los cósmidos, los cromosomas artificiales, los polinudeótidos de ADN y ARN, se introducen en células vegetales, ya sea en cultivo o en los órganos de una planta, mediante una variedad de técnicas convencionales. Si la secuencia se expresa, la secuencia opcionalmente se combina con secuencias reguladoras del inicio de la tranScripción y la traducción, las cuales dirigen la transcripción o la traducción de la secuencia a partir del ADN exógeno en los tejidos deseados de la planta transformada. Los acidos nucleicos aislados de la presente invención pueden introducirse en plantas de acuerdo con cualquiera de los diversos procedimientos que se conocen en la técnica . los procedimientos para transformar una amplia variedad de espeCies de plantas superiores también son bien conocidos y están descritos en la literatura técnica, cientifica y de patentes, literatura que puede obtenerse fácilmente. Véase, por ejemplo, Weising et al. (1988) Ann. Rev. Gene!. 22: 421-477. Las construcciones de ADN de la invención, por ejemplo, los plásmidos, los fagémidos, los cósmidos, los fagos, los polinucleótidos de AON desnudos o conjugados de manera diferente (por ejemplo, AON conjugado con polilisina, AON conjugado con péptidos, AON conjugi3do con liposomas) , o los cromosomas artificiales pueden introducirse directamente en el ADN genómico de la célula vegetal usando procedimientos tales como la electroporaaón y la microinyección de proloplastos en las células vegetales, o las construcciones de AON pueden introducirse directamente en las células vege'lales usando métodos balisticos, tales como el bombardeo con partículas de AON. Los procedimientos de microinyección para inyectar plantas, por ejemplo, células, embriones, callos y protoplastos, se conocen en la técnica y están bien de, scntos en la literatura científica y de patentes. Por ejemplo, se describe una cantidad de métodos en Jones, y también en las otras referencias mencionadas en la presente documentación y disponibles en la literatura. Por ejemplo, en Paszkowski, et al., EMBO J. 3: 271"1 (1984) se deso;be AON usando una precipitación con polietilenglicol. En Fromm, et aL, se describen técnicas de electroporación. En Klein, I~t al., Nature se técnicas de transformación ballstica. Pueden hallarse delalles adicionales en Jones y Gamborg, supra, y en la Patente de los EEUU Nº 5990387. Como alternativa, y preferiblemente en algunos casos, se emptea una Iransformación mediada por Agrobacterium para generar plantas transgénicas. Las técnicas de transformación mediadas por Agrobacterium, que incluyen el desarme y uso de vectores binarios, también están bien descritas en la literatura científica. Véase, por ejemplo, Horsch, el al. (1984) Science ~~33; 496; Fraley et al. (1964) Proc. Nall. Acad. Sa. USA 80:4803, y se revisan en Hansen y Chillon (1998) Curr. Top. Microbiol. Immunol. 240:21 , y Das (1998) Sybcellular Biochemistr y 29: Planl Microbe Interaction~i, pp. 343-363. Las construcciones de ADN opcionalmente se combinan con regiones adyacentes de AON-T apropiadas y se introducen en un vedor huésped convencional Agrohacferillm fumefaciens. Cuando la bacteria infecla la célula. las funciones de virulencia del huésped Agrobacterium tumefaciens dirigen la inserción de la construcción y el marcador adyacente en el ADN de la célula vegetal. Véase la Patente de los EEUU Nº 5591616. Aunque Agrobacterium es útil en principio en dicoliledónea~;, determinadas monocotiledóneas pueden transformarse utilizando Agrobacterium. Por ejemplo, la transformación de maíz con Agrobacterium se describe en la Patente de los EEUU Nº 5550318. Otros métodos de transfección o transformación incluyen (1) la transformación mediada por Agrobacterium rflizogenes (véanse, por ejemplo, Lichtenstein y Fuller (1987) en Gene!ic Engineerina, vol. 6, PWJ Rigby, Editor, Londres, Academic Press; y lichtenstein; y Draper (1985) en DNA Cloning, Vol. 11, D. M. Glover, editor, Oxford, IRI Press; WO 88102405, publicado el 7 de Abril de 1988, donde se describe el uso de una cepa de A. rhizogenes A4 y su ptásmido Ri, junto con los vectores de A. tumefaciens pARC8 o pARC16) , (2) la absorción de AON mediada por liposomas (véase, por ejemplo, Freeman et al. (1984) Plant Cell Physiol. 25:1353) , y (3) el método vortex (véase, por ejemplo, Kindle (1990) Proc:. Natl. Acad. SCi., (USA) 87:1228) . El ADN tambíén puede introducirse en plantas por transferencia directa en polen, tal como se describe en Zhou el al. (1983) Methods in EnzvmolQQY, 101: 433; D. Hess (1987) Intem. Rev. CvtoL 107: 367; Luo et al. (1988) Plant Mol. Biol. Rep. 6:165. La expresión de genes que codifican pOlipéptidos puede obtenerse inyectando el ADN en los órganos reproductores de una planta, tal como se describe en Pena et al. (1987) Nature 325:274. El ADN también puede inyectarse directamente en las células de embriones inmaduros, y los embriones desecados pueden rehidratarse como se describe en Neuhaus et al. (1987) Theor. Appl. Gene!. 75:30; y Benbrook et al. (1986) en Proceedings Bio Expo ButtelWorth, Stoneha.m, Mass., pp. 27-54. En la técnica se conoce una variedad de virus que atacan vegetales que pueden emplearse como vectores. los cuales incluyen el virus en mosaico de la coliflor (CaMV) , el virus géminis. el virus en mosaico de la broma y el virus en mosaico del tabaco. Generaciónlregeneración de plantas transgénicas Las células vegetales transformadas que se obtienen mediante cualquiera de las técnicas de transformación anteriores pueden cultivarse para regenerar una planta completa que posee el genotipo transformado, y por lo tanto, el fenotipo deseado. Dichas técnicas de regeneración se basan en la manipulación de determinadas filohormonas en un medio de cultivo para el desarml!o de tejidos, que tipicamente se basa en un marcador biocida y/o herbicida que ha sido introducido junto con las secuencias de nucteótidos deseadas. La regeneración de plantas a partir de protoplastos en cultivo se describe en Payne; Fundamental Methods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin, Heidelberg, Nueva York) ; Evans et al. (1983) Protoplasts Isolation and Culture, Handbook of Plant Cell Culture pp. 124-176, Macmillian Publishing Company, Nueva York; y Binding (1985) Regeneration of Plants, Plant Protoplasts pp. 21-73, CRC Press, Boca Raton. La regeneración también puede realizarse a partir de callos vegetales, explantes, embriones somáticos (Dandekar et al. (1989) J. Tissue Cult. Meth. 12: 145; McGranahan, et al. (1990) Célula vege'tal Rep. 8:512) órganos, o partes de éstos. Dichas técnicas de regeneración se describen en general en Klee et al. (1987) Ann. Rev. Plant Phvs. 38:467-486. Pueden hallarse detalles adicionales en Payne y Jones, supra, y Weissbach y Weissbach, editore (1988) Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, Inc., San Diego, CA. Dicho proceso de regeneración y desarrollo incluye los pasos de selección de las células y los brotes transformados, formación de raíces en los brotes transformados, y cultivo de las plántulas en tierra. Dichos métodos se adaptan a la ínvención para producir plantas transgénicas con QTL y aIras genes aislados de acuerdo con los métodos de la invención. Además, la regeneración de plantas que contienen polinucleótidos de la presente invención, los cuales han sido introducidos mediante Agrobacterium en células de explantes de hojas, puede efectuarse como se describe en Horsch el al. (1985) Science 227:1229-12331. En dicho procedimiento, las transformantes se cultivan en presencia de un agente de selección y en un medio que induce la regeneración de brotes en las especies vegetales a transformar, tal como se describe en Fraley et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci, USA 80:4803. Dicho procedimiento tlpicamente resulta en brotes en un periodo de entre dos y cuatro semanas, y dichos brotes transformados se transfieren posteriormente a un medio inductor de ralces apropiado que contiene el agente de selección y un antibiótico para impedir el crccímjcn~o de bacterias. Las plantas transgénicas de la presente invención pueden ser fértiles o estériles. No se pretende limitar la transformación de plantas y la expresión de pOlipéptidos que proveen resistencia a enfermedades a maiz, tal como se describe en la presente invención. En efecto, se contempla la posibilidad de usar los pOlipéptidos que proveen la resistencia delseada en maiz para proveer dicha resistencia en otras especies de importancia agricola y hortícola, merced a procedimientos de transformación y expresión. Por ejemplo, estas especies incluyen soja, canola, alfalfa, irigo, girasol y sorgo. En la construcción de los cassettes de expresión recombinantes de la invención, los cuales incluyen, por ejemplo, plásmidos auxiliares que comprenden funciones de virulencia, y plásmidos o virus que comprenden secuencias de ADN exógeno, tales como genes estructurales, opcionalmente se emplea un fragmento promotor vegetal que dirige la expresión de un ácido nucleico en alguno o todos los tejidos de una planta regenerada. los ejemplos de promotores constitutivos incluyen la región de inicio de transcripción del virus en mosaico de la cOlinor (CaMV) 355, el promotor l' O 2' derivado del ADN-T de Agrobactertum tumefacfens, y otras regiones de inicio de transcripción de distintos genes vegetales conocidos por aquellOS expertos en la materia. Como alternativa, el promotor vegetal puede dirigir la expresión del polinucleótido de la invención en un tejido especifico (promotores con especificidad por tejidOS) , o puede estar bajo un control ambiental más preciso (promotores inducibles) . los ejemplos de promotores con especifi·cidad por tejidos bajo el control del desarrollo incluyen los promotores que permiten iniciar la transcripción solamente en determinados tejidos, tales como frutos, semillas o flores. Puede ser apropiado cualquiera de los diversos promotores que dirigen la transcripción en células vegetales. El promotor puede ser constitutivo o inducible. Adem~ls de los promotores mencionados con anterioridad, los promotores de origen bacteriano que operan en plantas incluyen el promotor de octopina sintetasa, el promotor de nopalina sintetasa y otros promotores derivados del plásmidos Ti nativos_ Véase Herrara·Estrella el al. (1983) , Nature, 303:209. Los promotores virales incluyen los promotores 35S y 19S del virus de ARN en mosaico de la coliflor. Véase, Odell et al. (1985) Nature, 313:810. Otros promotores vegetales incluyen el promotor del inhibidor de tripsina de Kunilz (KTI) , SCP1 , SUP, UCD3, el prornotor de la subunidad pequeña de la ribulosa-1 , 3-bisfosfato carboxilasa y el promotor de la faseolina. También puede utilizarse la secuencia promotora del gen E8 y otros genes. El aislamiento y la secuencia del promotor E8 se describen en detalle en Deikman y Fischer (1988) EMBO J. 7:3315. Actualmente están en uso muchos otros promotores, los cuales pueden acoplarse COn una secuencia de ADN exógeno para dirigir la expresión del ácido nuc1eico. Si se desea la expresión de un polipéptido proveniente de un ADNc, tipicamente se incluye una región de poliadenilación en el extremo 3' de la región que lo o:ldifica. la región de poliadenilación puede derivar del gen natural, proveniente de una variedad de otros genes vegetales, o por ejemplo, de ADN-T. El vedor que comprende las seruencias (por ejemplo, las regiones promotoras o codificantes) provenientes de genes que codifican productos de expresión y transgenes de la invención tipicamente incluirán una subsecuencia de ácido nudeico, un gen marcador que confiere un fenotipo de selección, o como alternativa, detectable, a las células vegetales. Por ejemplo, el marcador puede codificar tolerancia a un biocida, en particular, tolerancia a un antibiótico, tal como tolerancia a kanamicina, G418, bleomicina, higromicina, o tolerancia a un herbicida, tal como tolerancia a cloroslufurón o fosfinotricina (el ingrediente activo en los herbicidas Bialaphos o Basta) . Véase, por ejemplo, Padgelte et al. (1996) en Herbicide-Resistant Crops (Duke, editor) , pp 53-84, CRC lewis Publishers. Boca Raton. Por ejemplo, la selectividad por herbicidas especificos para el rultivo puede COnferirse incluyendo en los cultivos genes que codifican enzimas apropiadas que metabolizan el herbicida y provienen de otros organismos, tales como microbios. Véase, Vasil (19~16) en Herbicide-Resistant Crops (Duke, editor) , pp 85--91, CRe lewis Publishers, Boca Raton) . Aquellos expertos en la materia han de reconocer qu~~, después de incorporar de manera estable el cassette de expresión recombinante en plantas transgénicas y confirmar que es operativo, puede introducírselo en otras plantas por medio de un cruzamiento sexual. Puede utilizarse cualquiera de una variedad de técnicas de cruzamiento convencional, dependiendo de las especies a auzar. En cultivos propagados de manera vegetativa, las plantas transgénicas maduras pueden propagarse· tomando cortes, o mediante técnicas de cultivo de tejidos para producir muchas plantas idénticas. Se realiza la selección de los transgénicos deseables, y se obtienen nuevas variedades y se propagan de manera vegetativa para uso comercial. En cultivos propagados por semillas, las plantas transgénicas maduras pueden endocruzarse para producir una planta homocigota por endocruzamiento. La planta proveniente del endocruzamiento produce semillas que contienen el écido nucleico heterólogo introducido recientemente. Dichas semillas pueden cultivarse para producir plantas que podrian producir el fenotipo seleccionado. las partes que se obtienen de la planta regenerada, tales como las flores, las semillas, las hojas, las ramas, los frutos, etcétera, están incluidas en la invención, siempre y cuando dichas partes comprendan células que comprendan el ácido nudeico aislado de la presente invención. la progenie y las variantes, y los mutantes de las plantas regeneradas también están incluidos dentro del alcance de la invención, siempre que estas partes comprendan las secuencias de ácido nucleico introducidas. La transmisión del écido nucleico de la presente invención en las plantas transgénicas o introducidas que expresan un polinucleótido de la presente invención puede detectarse, por ejemplo, mediante métodos de detección de ácidos nucleicos convencionales, o por protocolos de inmunotransferencia. Puede determinarse la expresión a nivel del ARN para identificar y cuantificar las plantas COn expresión positiva. Pueden emplearse técnicas de análisis de ARN convencionales, las cuales incluyen ensayos de amplificación por RT-PCR empleando cebadores de oligonucle6lidos diseñados para amplificar solamente ARN molde heterólogo o de introgresión, y ensayos de hibridación en solución usando muestras específicas marcadas o unidas a QTl. También puede analizarse la expresión de protelnas en las plantas, por ejemplo, con análisis de inmunotransferencia Western, usando anticuerpos que reconocen los polipéptidos codificados. Además, puede realizarse una hibridación in silu e inmunocitoquirnica de acuerdo con protocolos convencionales, usando polinude6tidos sonda especlficos para los ácidos nucleicos heterólogos y los anticuerpos, respectivamente, con el fin de localizar sitios de expresión dentro del tejido transgénico. En general, usualmente se analiza el ácido nucleico incorporadO en varias lineas transgénicas para identificar y seleccionar las plantas con los perfiles de expresión más apropiados. Una realización de la invención consiste en una planta transgénica que es homocigota para el ácido nucleico heterólogo agregado; por ejemplo, una planta transgénica que contiene dos copias de la secuencia de ácido nucleico agregada, por ejemplo, un gen en el mismo locus en cada aomosoma de un par de aomosomas homólogos. Una planta transgénica homocigota puede obtenerse cruzando sexualmente (auto-fertilizando) una planta transgénica heterocigota que contiene un único ácido nucleico heterólogo agregado, haciendo germinar algunas de las semillas que producen, y analizando las plantas que se obtienen en busca de la expresión alterada de un polinucleótido de la presente invención, en comparación con una planta control (por ejemplo, una planta no transgEmica nativa) . Puede utilizarse un retrocruzamiento con una planta progenitora y un exocruzamiento con una planta no transgénica para introducir el ácido nucleico heterólogo en un antecedente seleccionado (por ejemplo, una linea elite o exótica de maíz) . Métodos para las plantas de maíz resistentes al MFtCV AquellOS experimentados en el cultivo de plantas pueden reconocer las plantas de malz resistentes en el campo y seleccionar los individuos o las poblaciones resistentes para propósitos de desarrollo o propagación. En este contexto, los encargados del cultivo de las plantas pueden reconocer las plantas de maiz "resistentes' y "no resistentes~, o · susceptibles". Los encargados del cultivo de las plantas han de apreciar que la resistencia de la planta es un espectro fenotipico que consiste en extremos de resistencia, susceptibilidad, y un contínuo de fenotipos de resistencia intermedia. La resistencia también varia debido a efectos ambientales y a la gravedad de la infección por patógenos. La evaluación de los fenotipos usando ensayos reproducibles y métodos de calificación de la resistencia son valiosos para los científicos que buscan identificar los locus genéticos que confieren resistencia, para realizar la selección asistida por marcadores para crear poblaciones resistentes, y para las técnicas de introducción que tienen por objeto incluir un carácter de resistencia en una linea de maíz elite, por ejemplo. En contraste con las observaciones de campo fortuitas donde las plantas se clasifican como "resistentes' o ·susceptibles~, se conocen diVersos sistemas para calificar el grado de resistencia o susceptibilidad de una planta. Estas técnicas puedefl aplicarse a distintos campos en distintos momentos, y resultan en califICaciones de la resistencia que pueden usarse para caracterizar una cepa dada, independientemente de las condiciones de aJllivo o la localización. Sistemas de detección/correlación automatizados de la invención En algunas realizaciones, en la presente invención se induye un sistema automatizado para detectar los marcadores de la invención y/o correlacionar los marcadores con un fenotipo deseado (por ejemplo, la resistencia) . Por ende, un sistema tipico puede incluir un conjunto de sondas o cebadores marcadores configurados para detectar al menos un alelo faveorable de uno o más loci marcadores asociados con la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada al MRCV. Dichas sondas o cebadores se configuran para detectar los alelos marcadores indicados en las tablas y los ejemplos en la presente documentación, por ejemplo, usando cualquier formato de detección de alelas disponible, por ejemplO, la detección basada en matrices en fase sólida o liquida, la detección en muestras con base microfluida, etcetera. Por ejemplo, en una realización, ellocus marcador e:; MZA625, MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105, o cualquier combinación de éstos, asi como cualquiera de los siguientes intervalos cromosómicos: (i) MZA8381 Y MZA18180, (ii) MZA4305 Y MZA2803, (iii) MZA 15490 Y MZA2038, (iv) bnlg1458b y umc1261a, (v) bnlg1458b y umc1262a, (vi) bnlg1327 y umc1261 a, y (viii) bnlg1327 y umc1262a, o cualquier combinación de éstos, yel conjunto de sondas se configura para detectar el locus. El sistema ¡¡pico incluye un detector que se configura para detectar uno o más señales de salida desde el conjunto de sondas marcadoras o cebadores, o amplicones de éstos, con lo que puede identificarse la presencia o la ausencia del alelo. Hay una amplia variedad de aparatos disponibles para detección de set'iales, los cuales incluyen tubos fotomulliplicadores, espectrofotómetfCIs, matrices de CCD, matrices y analizadores de matriz, detectores de barrido, fototubos y fotodiodos, estaciones de microscopia, analizadores galvánicos, aparatos de detección de amplificación de ácidos nucleicos con base microfluida, etcétera. La configuración precisa del detector dependerá en parte del tipo de marcador que se utilice para detectar el alelo marcador, asi como del instrumental que el usuario pueda obtener de manera más conveniente. Pueden usarse detectores que permiten delectar la fluorescencia, la fosforescencia, la radiacl'ividad, el pH, la carga, la absorbancia, la luminiscencia, la temperatura, el magnetismo, o semejantes. Las realizaciones típicas de los detectores incluyen detectores de luz (por ejemplo, fluorescencia) o detectores de radiactividad. Por ejemplo, la detección de una emisión de luz (por ejemplo, una emisión de fluorescencia) u olra sonda marcadora es indicativa de la presencia o la ausencia de un alelo marcador. La detección de fluorescencia es es.pecialmente preferible, y en general, se la utiliza para la detección de acidos nucleicos amplificados (sin embargo, sobre los amplicones también pueden llevarse a C<lbo operaciones hacia el extremo 5' y/o hacia el extremo 3' que pueden induir otros métodos de detección) . En general, el detector detecta uno o más marcadores de emisión (por ejemplo, luz) proveniente de un marcador de sonda, que es indicativo de la presencia o ausencia de un alelo marcador. El o los detectores opcionalmente monitorean una o varias señales provenientes de una reacción de amplificación. Por ejemplo, el detector puede monitorear señales ópticas que corresponden a los resultados de un ensayo de amplificación "en tiempo real". Las instrucciones del sislema que permiten correlacionar la presencia o la ausencia del alelo favorable con la resistencia predicha también son una caracter[stica de la invención. Por ejemplo, las instrucciones pueden incluir al menos una tabla de consulta donde se inCluye una. correlación entre la presencia o la ausencia de los alelos favorables, y la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada predicha. La forma precisa de las instrucciones puede variar dependiendo de los componentes del sistema, por ejemplo, puede presentarse como un sistema de software en uno o más unidades de sistema integradas (por ejemplo, un microprocesador, un ordenador o un medio que puede ser leido por un ordenador) , o puede presentarse en una o más unidades (por ejemplo, ordenadores o medios que pueden ser leidos por un ordenador) acoplados al detector en forma operativa. Como se mencionó, en una realización típica, las instrucciones del sistema incluyen al menos una tabla de consulta donde se incluye una correlación entre la presencia o la ausencia de los alelos favorables, y la resistencia conferida recientemente o la resistencia mejorada predicha. las instrucciones tipicamente tambien incluyen instrucciones que proveen una interfase de usuario con el sistema, por ejemplo, para permitir que un usuario vea los resullados del análisis de una muestra e ingrese los parámetros al sistema. El sistema típicamente incluye componentes para almacenar o transmitir datos que pueden ser leIdos por un ordenador. los cuales representan o designan los ale~los detectados con los métodos de la presente invención. por ejemplo, en un sistema automatizado. los medios que pueden ser leidos por un ordenador pueden incluir memorias caché, principal y de almacenamiento, y/u otros componentes de almacenamiento electrónico de datos (discos rigidos, diskettes extraíbles, discos de almacenamiento, etcétera) para almacenar código de ordenador. los datos que representan los alelos detectados mediante el método de la presente invención también pueden transmitirse por medios electrónicos, ópticos o magnéticos como una señal de datos de ordenador, en forma de un medio de transmisión a través de una red, tal como una intranet o Internet, o combinaciones de éstas. Además, o como alternativa, el sistema puede transmitir datos por via inalámbrica, IR, u otras alternativas de transmisión disponibles. Durante la operación, el sistema tipicamente comprende una muestra a analizar, tal como un tejido vegetal , o un material aislado a partir del tejido, tal como ADf>J genómico, ADN genómico amplificado, ADNc. AONc amplificado, ARN, ARN amplificado, etcétera. En el contexto de la presente invención, la frase ·sistema de detección/correlación de alelas' hace referencia a un sistema donde los datos que son ingresados en un ordenador corresponden a objetos físicos o procesos externos respecto del ordenador, por ejemplo, un alelo marcador, y un proceso que, dentro de unordenador, causa una transformación física de las señales de ingreso para obtener señales de salida diferentes. En otras palabras, los datos de ingreso. por ejemplo, la amplificación de un alelo marcador en particular, se transforman a datos de salida, por ejemplo, la identificación de la forma alélica de un segmento de cromosoma. El proceso dentro del ordenador consiste en un conjunto de instrucciones º ·programa" mediante el cual el sistema integrado reconoce las señales positivas de amplificación o hibridación, y las atribuye a muestras individuales como un genotipo. Otros programas adicionales correlacionan la identidad de las muestras individuales con valores fenotípicos o alelos marcadores, por ejemplo, métodos estadisticos. Además existen numerosos, programas de computación escritos, por ejemplo, en e /CH, Delphi y/o Java para interfaces GUI, y herramientas de productividad (por ejemplo, Microsoft Excel y/o SigmaPlot) para graficar o crear tablas de referencia de correlaciones alelo-carácter relevantes. Otras herramientas de software Uiiles en el contexto de los sistemas integrados de la invención induyen conjuntos estadisticos, tales como SAS, Genstat, MaUab, Mathematica y SPlus, y conjuntos de modelado genético, tales como QU-GENE. Además, en los sistemas integrados de la invención también se emplean apropiadamente lenguajes de programaCión adicionales tal como Visual Basic. Por ejemplo, los valores de un alelo marcador de resistencia asignado a la población de una progenie descendiente de cruzamientos entre lineas elite se re!;Jistran en un medio que puede ser leido por un ordenador, con lo que se establece una base de datos donde se hacen corresponder los alelos de resistencia con identificadores únicos de miembros de la pOblación de progenie. En el contexto de la presente invención, cualquier arChivo o carpeta, ya sea hecha a medida u obtenida comercialmente (por ejemplo, en Oracle o Sybase) , que sea apropiada para grabar datos en un medio que pueda ser leído por un ordenador, es aceptable como base de datos. l os datos COn referencia a un genotipo para uno o más marcadores moleculares, por ejemplo, ASH, SSR, RFlP, RAPO, AFlP, SNP, marcadores de isozimas u otros marcadores, tal como se describe en la presente documentación, se registran de manera similar en una base de datos accesible para un ordenador. Opcionalmente, los datos de marcadores que se obtienen usando un sistema integrado que permite automatizar uno o mas aspedos del ensayo (O ensayos) se utilizan para determinar genotipo de los uno o más marcadores. En un sistema con esas características, los datos de ingreso correspondientes a los genotípos de marcadores moleculares provenientes de un detector, por ejemplo, una matriz, un scanner, un CCO, u otro dispositivo de detección, pasan diredamente a archivos en un medio que puede ser leIdo por un ordenador, que es accesible para la unidad central de proceso (CPU) . Después, el dispositivo informalico ejecuta un conjunto de instrucciones del sistema (típicamente en forma de uno o más programas) que codifican las correlaciones entre resistencia y los alelos de la invención para identificar las correlaciones entre alelas marcadores y los fenotipos de caracteres predichos. Típicamente, el sistema también incluye un dispositivo de ingreso para el usuario, tal como un teclado, un ratón, una pantalla sensible al tacto, etcétera, por ejemplo, para seleccionar archivos, recuperar datos, revisar tablas de información sobrA los marcadores, y un dispositivo de salida (por ejemplo. un monitor. una impresora) para observar o recuperar el producto del análisis estadístico. Por lo tanto, en un aspecto, en la invención se proporciona un sistema inlegrado que comprende un ordenador o un medio que puede ser leido por unordenador, que comprende un conjunto de archivos y/o una base de datos con al menos un conjunto de datos que corresponde a los alelos marcadores de la presente invención. El sistema también induye una interfase de usuario que permite que un usuario vea de manera selectiva una o mas de dichas bases de datos. Además, puede utilizarse software de manipulación de textos convencional, tal como software de procesamiento de texto (por ejemplo, Mic:rosoft Wordn• o Corel WordPerfect"') y software de bases de datos u hojas de cálculo convencional (por ejemplo. software de hojas de cálculo tal como Microsoft Excel''', Corel Quattro Pro"', o programas de bases de datos, tales como Microsoft Access'" o Paradox"') en combinación con una interfase de usuario (por ejemplo, una GUI en un sistema operativo convencional, tal como un sislema Windows, Macinlosh, Unix o Linux) para rnanipular las cadenas de caracteres correspondientes a los alelos u otras caracter[sticas de la base de datos. Los sistemas opcionalmente incluyen componentes para la manipulación de las muestras, por ejemplo, al incorporar dispositivos robóticos. Por ejemplo, un 80lenoide robótico de control de liquidos para transferir soluciones (por ejemplo, extractos de células vegetales) provenientes de una fuente hacia un destino, por ejemplo, desde una placa de microtitulación hacia una malriz de sustrato, se conecta en forma operativa opcionalmente al ordenador digital (o a un ordenador adicional en el sistema integrado) . Comúnmente, una característica del sistema integrado consiste en un dilipositivo de entrada para el ingreso de datos al ordenador digital, para controlar la transferencia de líquidos de alto rendimiento mediante el solenoide robótico de control de liquidos, y opcionalmente, para controlar la transferencia mediante el solenoide al soporte sólido. Muchos de dichos sistemas robóticos automatizados para manipular fluidos pueden obtenerse comercialmente. Por ejemplo, puede obtenerse una variedad de sistemas automatizados en Caliper Technologies (Hopkinton, MA) , donde se utilizan distintos sistemas Zymate, que tipicamente incluyen, por ejemplo, módulos robóticas y de manejo de fluidos. De manera similar, el robot comun ORCA®, que se utiliza en una variedad de sistemas de laboratorio, por ejemplo, para la manipulación de bandejas de mic:rotitulación, también puede obtenerse comercialmente, por ejemplo, en Beckman Coulter, Inc. (Fullerton, CA) . Como una altemativa a los robots convencionales, en la actualidad pueden obtenerse fácilmente sistemas de base microfluida para realizar el manejo y la detección de fluidos, por ejemplo, en Caliper Technologies Corp. (Hopkinton, MA) y Agilent Technologies (Pato Alto, CA) . Por lo tanto, los sistemas para el análisis de marcadores moleculares de la presente invención pueden incluir un ordenador digital con uno o más programas de softwalre de alto rendimiento para el control de liquidas, software de análisis de imágenes para analizar los datos de la$ marcas de los marcadores, software de interpretación de datos, un solenoide robótico de control de liquidos para transferir las soluciones que van desde una fuente hacia un destino conectado en forma operativa al ordenador digital, un dispositivo de ingreso (por ejemplo. un teclado de ordenador) para la entrada de datos al ordenador digital, con el fin de controlar la transferencia de liquidos de alto rendimiento mediante el solenoide robótica de control de liquidos, y opcionalmente, un scanner de imágenes para digitalizar las señales de los marcadores provenienles de las sondas marcadas hibridadas, por ejemplo, a marcadores sobre un soporte sólido conectado en forma operativa al ordenador digital. El scanner de imágenes tiene una interfase con el software de análisis de imágenes para proveer una medición, por ejemplo, de la intensidad del marcador de la sonda de ácido nucleico con el que hibridiza a una población de muestras de ácidos nucteicos dispuesta en una matriz (por ejemplo, que comprende uno o más marcadores) , donde el software de interpretación de datos sirve para interpretar la medición de la intensidad del marcador de la sonda para mostrar si (yen qué grado) , la sonda marcada hibridiza con un ácido nucleico marcador (por ejemplo, un alelo marcador amplificado) . Después, se establece 113 correlación entre los datos obtenidos y la identidad de la muestra para determinar la identidad de una planta con un genotipo particular para marcadores o alelos particulares, por ejemplo, para facilitar la selección asistida por marcadores de plantas de maiz con formas alélicas favorables de segmentos cromosómicos que participan en el desempeño agrícola (por ejemplo, resistencia conferida recientemente o resistencia mejorada) . En cualquiera de las realizaciones de la presente invención, las imágenes ópticas, por ejemplo, los patrones de hibridación que se observan (y opcionalmente, se re~listran) mediante una cámara u otro dispositivo de registro (por ejemplo, un fotodiodo y disposilivo de almacenamiento de datos) se somelen a una procesamiento adicional opcional. por ejemplo. digitalizando la imagen y/o alrnacenando y analizando la imagen en un ordenador. Hay una variedad de equipos y programas de software disponibles comercialmente para digitalizar, almacenar y analizar un video digitalizado o una imagen óptica digitalizada, por ejemplo, usando una PC (por ejemplo, una máquina con un chip Intel x86 o Pentium, o compatible, con un sistema operativo DOS'''', OS2T"" WINDOWsn.. , WINDOWS NT'''', WINDOWS 95™, WINDOWS 97™, WINDOWS 2000' ''', WINDOWS XpT'" o WINDOWS VISTN"') o un ordenador basado en MACINTOSHll.. , LINUX o UNIX (por ejemplo, una estación de trabajo SUNTM) . EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, pero no limitar la invención que se reivindica. Ha de Comprenderse que los ejemplos y las realizaciones que se describen en la presente documentación se proveen solamente a modo de ilustración, y aquellos experto:s en la materia han de reconocer que es posible cambiar distintos reactivos o parámetros sin apartarse del esplritu de la invenciÓn o el alcance de las reivindicaciones adjuntas. Este estudio fue completado por dos abordajes de anillisis de asociación diferentes: 1) Análisis de asociación estructurada basado en poblaciones y 2) Análisis de asociación basado en pedigrl. Mediante la identificación de estos marcadores genéticos, puede usarse una selecciÓn asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia del cruzamiento oon relación a la resistencia mejorada del malz a las infecciones de MRCV. El mapeo de asociación es conocido en la técnica y se describe en diversas fuentes, por ejemplo, Jorde (2000) Genome Res. 10:1435-1444; Remington er al. (2001) 'StructU (l~ of linkage disequilibrium and fenotype associations in the maize genome", Proc Natl Acad Sci USA 98:11479-1'1484; Weiss y Clark (2002) Trends Genet. 18:19-24; y Shu et al. (2003) "Oetection Power of Random, Case-Control, and Case-Parent Control Oesigns far Association Tests and Genetic Mapping of Complex T raits' , Proceedingls of 15th Annual KSU Conference on Applied Statistics in Agriculture 15:191-204. Ejemplo 1 Análisis de mapeo de asociación Se puso en práctica una estrategia de mapeo de asociación para identificar marcadores genéticos de maíz asociados con la resistencia a la infección de MRCV, que es el agente causal del "mal de Río Cuarto". Mapeo de asociaciÓn La comprensiÓn de la extensión y los patrones dl~ desequilibrio de ligamiento (LO) en el genoma es un prerrequisito para desarrollar abordajes de asociación eficientes para identificar y mapear loci de caracteres cuantitativos (OTl) . El desequilibriO de ligamiento (LO) designa la asociación no azarosa de alelos en una colección de individuos. Cuando se observa LO entre alelos en loo relacionados, se lo mide como una disminuciÓn del LO a través de una región especifica de un cromosoma. La extensiÓn del LO es un reflejo de la historia de recombinación de dicha región. La tasa promedio de disminución del LO en un genoma puede ayudar a predecir la cantidad y la densidad de los marcadores necesarios para efectuar un estudio de asociación en todo el genoma, y provee una estimación de la resolución que pUede esperarse. El mapeo de asociaciÓn o lO tiene por objeto ide'ntificar asociaciones significativas entre el genotipo y el fenotipo. Se lo ha explotado como una herramient"l poderosa para realizar un mapeo fino en especies con cruzamientos entre individuos, tales como los ser, es humanos (Corder et al. (1994) ' Protective effect of apolipoprotein-E type-2 allel for late-onset Alzheimer-disease", Nat Genet 7:180-184; Hastbacka el al. (1992) "Unkage disequilibrium mapping in isolaled fOunder populations: diastrophic dysplasia in Finland", Nat Genet 2:204-211; Kerem et al. (1989) "Identification of the cystic fibrosis gene: genetic analysis', Science 245:10731080) Y maiz (Remington et al., (2001) "Struclure of linkage disequilibrium ancl fenotype associations in the maize genome", Proc Natl Acad Sci USA 98:11479-11484; Thomsberr y el al. (2001) "Dwarf8 polimorphisms associate with variation in flowering time", Nal Gene!. 28:286-289; revisado por Flint-Garcia et al. (2003) 'Structure of linkage diseQuilibrium in plants". Annu Rev Planla Biol. 54:357-374) . donde la recombinación enlre heterocigotos es frecuenle y resulta en una caida rápida del LO. En las especies sometidas a la endocría, donde la recombinación entre los genotipos homocigotos no puede detectarse a nivel genético, la extensión del LO es mayor (es decir, se heredan juntos bloques más grandeS) , y esto mejora dramáticamente la potencia de detecciÓn del mapeo de asociación (Wall y Pritchard (2003) "Haplotype blocks and linkage disequilibrium in Ihe human genome", Nal Rev GeneI4:587-597) . La historia de recombinación y mutación de una poblaciÓn es una función del habito de cruzamiento y del tamaño efectivo y la edad de una población. Los tamaños poblacionales grandes ofrecen mejores poSibilidades para detectar la recombinación, al tiempo que las pobla (~ones mAs viejaS generalmente se asocian con mayores niveles de polimorfismo, y ambos factores contribuyHn a un decaimiento más veloz del LO. Por otro lado, las pohlaciones de menor tamaño. por ejemplo, aquellas Que han pasadO por un cuello de botella genético reciente, tienen a presentar una caída del LO más lenta, lo que resulta en una conservación más extensa del haplotipo (Flint-Garcia et al. (2003) "Structure of linkage disequilibrium in plants·, Annu Rev Planta Biol. 54:357-374) . Las lineas de cruzamiento elite proporcionan un punto de partida valioso para los análisis de asociación. En los análisis de asociación se usan calificaciones fenotípicas cuantitativas (por ejemplo, una tolerancia a enfermedades que varía entre uno y nueve para cadal línea de maiz) , en contraste con la observación Simple de las distribuciones de frecuencias de alelos entre tolera.nles y resistentes en los tipos de análisis de dislribución de alelos entre grupos. La disponibilidad de datos dl~ desempeño fenotípiCO detallado, recolectados por los programas de desarrollo durante varios años y en varios ambientes para una gran cantidad de lineas elite, provee un conjunto de datos valioso para realizar los análisis de mapeo de asociación de marcadores genéticos. Esto facilita ta integración sin problemas entre la inve8tigación y la aplicación, y permite aprovechar los conjuntos de datos acumulados con el correr del tiempo. Sin embargo, la comprensiOn de la relaciOn entre el polimorfismo y la recombinación es útil para desarrollar estrategias apropiadas para extraer eficientemente una cantidad de información máxima a partir de estos recursos. Este tipo de análisis de asociación no requiere ni genera datos de mapeo, sino que es independiente de la posición en el mapa. En este análisis se compara la calificación fenotipica de las plantas con los genotipos en distintos loci. Subsiguientemente, puede usarse cU~llquier mapa de maiz apropiadO (por ejemplo, un mapa compuesto) para contribuir en la observación de la distribución de los marcadores OTl identificados y/o la agrupación de marcadores OTl, usando localizalciones de mapa determinadas previamente para los marcadores. Lineas de maíz y calificación fenol1pica las lineas de malz se sometieron a una calificación fenotípica sobre la base de su grado de resistencia a las infecciones de MRCV (en cootraste con la categorización simple de "tolerante" o ·susceptible") . las variedades de plantas usadas en los análisis provinieron de diversas fuentes, incluyendo germoplasma elite, cultivares distribuidos en el ámbito comercial y otras variedades públicas. las colecciones comprendieron 475 líneas de maíz. las líneas usadas en el estudio tuvieron un amplio rango de madurez, que varió entre CRM (madurez relativa comparativa) 90 y CRM 140, lo que representa las lineas endocriadas más importantes de germoplasma Piooeer. El grado de resistencia de una planta a las infecciones de MRCV varió ampliamente, lo cuat se midió usando una escala entre uno (muy susceptible) y nueve (muy resistente) . En general, se asignó una calificación de dos (2) a las cepas más susceptibles. se asignó una calificación de cuatro (4) como umbral para considerar una planta susceptible o resistente (menos de 4, susceptible; 4 o más, resistente) , y se asignó una calificación de siete (5-7) a las lineas más resistentes. Se reservaron los valores de resistencia de ocho (8) y nueve (9) para niveles de resistencia muy raros. generalmente no observados en el germoplasma existente. De no haber enfermedad presente en un sembradío, no se calificó la resistenc ia. Sin embargo, de apreciarse señales de enfermedad en una localización especifica en el campo, se evaluaron todas las lineas en dicha localización. Se acumularoo calificaciones para las cepas de prueba en múltiples localizaciones y años, y finalmente se le asignó un valor promedio (por ejemplo, consenso) a cada linea. Se recolectaroo calificaciones de resistencia para la colección de 475 lineas endocriadas durante varias temporadas de cultivo (se evaluaron 394 líneas endocriadas al mismo tiempo en la temporada de cultivo) . la recolección de los datos tipicamente se realizó en un procedimiento de calificación después del florecimiento. Para evaluar la relación entre los marcadores y la tolerancia, se usó un abordaje cuantitativo donde se determinó una calificación de resistencia para cada linea de ma rz y se la incorporó en el análisis estadrstico de mapeo de asociación. Determinación del genotipo de maíz Se analizó una colección de 475 lineas de maíz realizando la secuenciación de ADN de 4000-1 0000 genes (loo genéticos) . Se usó la variación de los SNP para generar los haplotipos especificos de las lineas endocriadas SS en cada lacus. Estos datos se usaroo para identificar las asociaciones entre los alelos y la resistencia al MRCV a nivel del genoma. Métodos estadísticos Se realiza un análisis de asociación basado en I:a estructura usando métodos de mapeo de asociación convenciooales, doode la estructura de la población s¡e controla usando los datos de los marcadores. Se usó el software de análisis de agrupamientos basado en modelos Structure, desarrollado por Pritchard el a!., con los datos de haplotipos para 880 lineas endocriadas de maiz elite y doscientos marcadores, para estimar los coeficientes de mezcla y asignar las lineas endocriad~ls a siete subpoblacioncs (J.K. Pritchard, M. Stcfens y P. J. Donnelly (2000) "Inference of population structure usil'lg muHilocus genotype data", Genetics 155:945-959) . Esto reduce la ocurrencia de falsos positivos que pueden surgir debido al efecto de la estructura de la población sobre la estadistica de mapeo de asociación. Se usa la estadística de Kuiper, que permite determinar si dos distribuciooes son iguales. para evaluar un marcador dado para la asociación entre el haplotipo y el fenotipo en una subpoblación dada rN. H. Press, S. A. Teukolsky, W. T. Vetterling, 8. P. Flanner y , 2002; Numerical Recipes in C, segunda edición, Cambridge University Press, NY) . El mapeo de asociaciÓfl basado en pedigrí se reali.zó usando el procedimiento GPA (análisis de asociación general basado en pedigri) , desarrollado por Shu e:t al. (Guoping Shu, 8eiyan Zeng, y Oscar Smilh, 2003; Detection Power of Random, Case-Control, and Case-Parent Control Designs for Assoclation Tests and Genetic Mapping of Complex Traits. Proceooings of 15th AnnLlal KSU Conference on Applled Statistlcs in Agriculture. 15: 191-204) . El procedimiento GPA incluye un software de mapeo de asociadón basado en la probabilidad condicional implementado en el lenguaje informático SAS. versión 9.0 (2001 , SAS Institute, Car y , Carolina del Norte) . Resultados En la Tablas 1 se detallan los marcadores de maiz que presentaron desequilibrio de ligamiento con el fenotipo del MRCV usando el método de mapeo de asociación. En la Tablas 1 también se indicala pOSición de cada marcador en el mapa respecto de otros marcadores Gonocidos, expresada en cM , donde la posición cero es el primer marcador (más distal desde el centrómero) conocido al comienzo del cromosoma. Las posiciones en este mapa no son absolutas y representan una posición de mapeo estimada. En la Tablas 6 se proporcionan las secuencias consenso y de los cebadores para los mElrcadores MZA, y en la Tabla 7 se proveen las secuencias consenso para los marcadores SNP además de las secuencias de los cebadores directo e inverso. Las probabilidades estadlsticas de que el alelo marC8idor y el fenotipo de tolerancia a la enfermedad segreguen de manera independiente se reflejan en los valores de probabilidad ajustada del mapeo de asociación indicados en la Tabla " y constituyen una probabilidad (P) derivada del análisis de asociación entre genotipo y fenotipo. Cuanto menor es el valor de probabilidad, más significativa es la asociación entre el genotipo marcador en el lecus yel fenotipo de tolerancia a la infección de MRCV. El análisis de asociación no estructurada para el gnJpo denominado SS reveló la presencia de dos picos de probabilidad en el cromosoma 2, en la posición 65, 99, representados por los marcadores MZA2038 (p = 0, 00000266) Y MZA11826 (p = 0, 00000179) y en la pOSición 127, 18-131 , 13, representados por los marcadores MZA11806 (p =0, 000002) Y MZA14212 (p =0, 000002, 27) . El análisis no estructurado también reveló varias otras asociaciones en el genoma. La única asociación conflistente que fue convalidada por abordajes independientes correspondió a la posición 65, 99 en el cromosoma 2. El análisis no estructurado permite incrementar la potencia de la evaluación de la variabilidad general de los alelas para una región dada, pero al mismo tiempo, resulta en el incremento de la cantidad de asociaciones pOSitivas falsas, ya que la estructura de la pobladón no es corregida por este análisis. En la Figura 1A se ilustra un análisis de asociación estructurada para un grupo de lineas endoeriadas argentinas (o lineas endoeriadas que fueron el blanco del programa de desarrollo en Argentina) donde fueron significativos varios marcadores, con un nivel de p de 0, 0005, en la región entre las posiciones 65, 99 y 85, 64, induyendo MZA16656 (p = 0.000194) , MZA18224 (p = 0, 000066) Y MZA5057 (p = 0, 000045) . En la Figura 18 se ilustra un análisis de asociación estrudurada para un grupo SS, donde, en el brazo corto del cromosoma 2, los marcadores más asociados fueron MZA1525 en la posiCión 54, 62 (P = 0, 00043) Y MZA11826 en la posición 65, 99 (p = 0, 00168) . Se observaron dos asociaciones adicionales en la posición 91, 19, representados por el marcador MZA13812 (p =0, 000299) , y la posición 154.06, representados por el marcador MZA10682 (p = 0, 000024) . En la Figura 1 C se ilustra un análisis de asociación estructurada para otro grupo SS con un conjunto de datos fenotípicos diferentes. El marcador más asociado en el brazo corto del cromosoma 2 fue MZA12899 en la posición 53, 83 (p = 0, 000298) . Hubo otros marcadores asociados en el brazo largo del cromosoma 2. donde los marcadores más asociados fueron MZA1067 (posición en el mapa: 141, 9; P = 0, 000094) Y MZA10832 (posición en el mapa: 159, 8; P = 0, 000086) . Ejemplo 2 Mapeo de intervalos de aTL y análisis de regresión de marcadores individuales Se realizó un análisis de mapeo de intervalos de QTL y un análisis de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromos6micos y marcadores genéticos de maiz (respectivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran conferirle resistencia a infecciones de MRCV a la planta de maíz. El mapeo de QTL y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loei genéticos que co-segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación dl~ estos loei genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener líneas endocriadas e hlbridas de maíz mejoradas. Uneas de maíz Se crearon dos poblaciones de mapeo prindpales para la resistencia al MRCV a partir de los cruzamientos de las lineas endoeriadas PH7WT (genotipo resistente) y PH30T (genotipo muy susceptible) , y PH9T J (genotipo resistente) y PH890 (genotipo susceptible) . La población PH7WTxPH3DT consistió en 120 fam¡lias F5JF7, y la población PH9T JxPH890 consistió en 212 familias BC2F4/BC2F5. Calificadón fenotrpica La calificación fenotipica de cada una de las líneas ~;e basó en conjuntos de datos fenotipicos obtenidos en el carrpo durante dos o (cruzamiento PH890xPH9TJ) o tres temporadas de cultivo diferentes (PH7WTxPH3DT) . Determinación del genotipo del maiz El genotipo de la progenie F5 de maiz PH7WTxPH3DT se determinó usando un total de 246 marcadores polimórficos y de buena calidad, y el genotipo de la progenie BC2F4 de PH890xPH9TJ se determinó con 167 marcadores polimórficos y de buena calidad. El primer procedimiento de determinación del genotipo induyó marcadores SSR. Se llevó a cabo un segundo procedimiento de determinación del genotipo con un conjunto de 101 marcadores polimórficos y de buena calidad en la progenie F7 PH7WTxPH30T. Se llevó a cabo un segundo procedimiento de determinación del genotipo en la población PH89OxPH9TJ usando un conjunto de marcadores en regiones genómicas especificas. Se usó Windows QTl Cartographer (la versión más a.ctualizada de este software a la fecha del mapeo de QTl) para el análisis de regresión de marcadores y el mapeo de intervalos de QTl. las calificaciones lOO (logaritmo de la relación de probabilidades) se estimaron para todo el genoma, de acuerdo con procedimientos de mapeo de QTl convencionales. El término "relación de probabilidades" se usa para describir la probabilidad relativa de dos o más explicaciones de las fuentes de variación en un carácter. Puede computarse la probabilidad de estas dos explicaciones diferentes (modelos) , y puede elegirse el modelo más probable. Si el modelo A es 1000 veces probable que el modelo B, luego la relación de probabilidades es de 1000:1 y el logaritmo de la relación de probabilidades es de 3. Se usaron los datos en bruto para las replicas individuales y los anos y las calificaciones promediO en el mapeo de intervalos de QTl. El umbral lOO fue 2, 5. Se e$timó un intervalo de confianza para cada QTL luego se representaron las posiciones obtenidas como un histo!~rama superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. Resultados Mapeo de Inlervalos de QTL En este estudio se identificaron varios intervalos cromosómicos correlacionados con QTl asociados con la resistencia/susceptibilidad a las infecciones de MRCV. los QTl se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTl significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2 en ambos cruzamientos de mapeo (véanse las figuras 12-14; véase también la Tabla 13, donde se presenta un análisis de regresiOn de QTL marcadores para el cruzamiento PH89OxPH9TJ) . Tabla 13 Se identificó un segundo QTL en et grupo de ligamiento 5, en la posición 150-160 (población PH890xPH9TJ) , y otro en la posición 200-220 del grupo de ligamiento 5 (población PH7WTxPH3DT) . Se localizó un tercer aTL en PH7WTxPH30T, en la posición 165-185 del cromosoma 2. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o rnejor, como se ilustra en las Tabla 13. Algunos de los marcadores identificados en el analisis de regresión de marcadores individuales presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. Discusión/conclusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromosómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para otros propósitos. Ejemplo 3 Convalidación de los QTL mediante selección asis"tida por marcadores Se realizó un mapeo de intervalos de QTL y un analis, is de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromosómicos y marcadores genéticos de maiz (respectivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran conferirle resistencia a infecciones de MRCV a la planta de maiz. El mapeo de QTL y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loci genéticos que ea-segregan con un fenotipo deseado. Meaante la identificación de estos Ioci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de leos cruzamientos para obtener líneas endocriadas e híbridas de maiz mejoradas. Lineas de maíz Se creó una población principal para la convalidación y el mapeo de la resistencia al MRCV a partir del cruzamiento de las I1neas endocriadas PH7WT y PH3DT. Se generaron otras poblaciones para convalidar el efecto de este QTL en los distintos antecedentes. La :población PH7WTxPH3DT consistió en 82 familias BC3F3, generadas mediante la introducción de marcadores QTL localizados en el cromosoma 2 en PH3DT. Hubo 4 poblaciones BCl F3 adicionales, las cuales se genelClron mediante una selección asistida por marcadores, que consistieron en 24 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PH6KWxPH7WT, 12 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PH6B8xPH7WT, 3 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PHP3P1xPH7WT y 6 familias BC1F3 originadas en el cruzamiento PH6GFxPH7WT. Estas poblaciones se generaron autocruzando plantas BC3 o BCl especificas, y obteniendo familias BC3F3 () BC1F3 con variaciones alélicas en la región del QTL. Calificación fenotipica La calificación fenotipica de BC1F3, BC3F3 y cada uno de los progenitores se basó en conjuntos de datos fenotipicos obtenidos en el campo durante una temporada de cultivo. Determinación del genotipo del malz El genotipo de la progenie BC1F3 de malz, originada en distintos cruzamientos, y el genotipo de la progenie BC3F3, originada en el cruzamiento PH7WTxPH3DT, se determinó usando SNP polimórfieas en la región del OTL. BC3F3 se sometió ¡:¡ una depuración de los anl!~cedentes genéticos en la etapa BC3, especialmente en el QTL del cromosoma 5. Los marcadores incluyeron marcadores SNP. Se usó Windows OTL Cartographer (la versión mas actualizada de este software a la fecha del mapeo de QTL) para el analisis de regresión de marcadores y el map4:!Q de intervalos de QTL. Las calificaciones LOO (logaritmo de la relación de probabilidades) se estimaron para todo el genoma, de acuerdo con procedimientos de mapeo de QTL convencionales. Se usaron los datos en bruto para las réplicas individuales y las calificaciones promedio en el mapeo de intervalos de QTL. El umbral LOO fue 2, 5. Se estimO un intervalo de confianza para cada QTL. Luego se representaron las posiciones obtenidas como un histoqrama superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. Como estas poblaciones se generaron con una selección asistida por marcadores (eventos de recombinación no azarosos) , se consideró que el análisis de regresión de marcadores seria tan poderoso como el análisis de mapeo de intervalos. Resultados Mapeo de Intervalos de QTL En este estudio se identificó un solo intervalo cromosómico que estuvo correlacionado con QTL asociados con la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV. l.os QTL se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTl significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2 en la población de convalidación principal BC3F3. Los marcadores principales en este QTL en I:ól población de convalidación principal se verificaron en las otras progenies BC1 F3, lo que permitió confirmar el efecto de este QTL sobre la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor, como se ilustra en la Tabla 14. Algunos de los marcadores identificados en el análisis de regresión de marcadores individuales presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. El mapeo de intervalos puede observarse en la Figura 2. y el análisis de regresión de marcadores del cruzamiento PH30TxPH7WT puede observarse en la Tabla 14. Vale destacar que la rÉ~plica Nº 3 fue afectada por el estrés provocado por los herbicidas. MRCVSC = calificación fenot!pica del MRCV. Inc. Sin!. Sev. = frecuencia de plantas con síntomas severos en cada unidad experimental. El efecto de la variación alélica de MRCV 1 sobre diversos antecedentes se evaluó con los datos fenotipicos de las progenies BC1F3 con variaciones alélicas en la región MRCV1. El alelo resistente a MRCV1 presentó un efecto positivo en otros 4 antecedentes genéticos (líneas endocriadas PH6GF, PHP3P1, PH6B8 Y PH6KW) . En la Tabla 15 a continuación se detalla la calificación fenotípica principal para la progenie BC1F3 con variaciones alélicas en la región MRCV1 . Tabla 15 Posición del marcador: 65, 99 lineas endocriHdas Calificación de la línea endocriadas PH6GF 38 I PHP3P1 2, 5 PH6B8 3 PH6KW 3 Alelo susce tibie BC1F3 (AA Alelo heteroci oto BC 1 F3 AB Alelo resistente Be 1 F3 (BB) 500 . 611 4, 10 3, 53 6, 17 450 5, 17 5, 47 4, 19 4, 26 5, 00 Efecto del QTL 1, 11 I 2, 07 I 0, 97 0, 81 Discusión/conclusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromo:;6micos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. l os marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para otros propósitos. 15 Ejemplo 4 Convalidación de los QTl en poblaciones de cruumiento OH Se realizó un análisis de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromos6micos y marcadores genéticos de maíz (respectivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran conferirle resistencia a infecciones de MRCV a la planta de maíz. El mapeo de QTl y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loci genéticos que co-segregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para ob'tener líneas endocriadas e híbridas de maíz mejoradas. lineas de malz l as poblaciones para la selección de pedigri mejorada por marcadores (MEPS) , de acuerdo con un esquema de cruzamiento de poblaciones que permitiría obtener resistencia al MRCV, se crearon a partir de distintos cruzamientos de lineas endocriadas. Los cruzamientos incluyeron los siguientes: a) Cruzamientos con MRCV1 fijo: PHKEFxPHBNA, PHKEFxPHS2G, PHKFDxPHS3J, PHKFAxPHBNA, PHKFAxPHKEF, PHS2YxPHKEF, y b) Cruzamientos con MRCV1 segregante: PH30TxPHI<EF, PHKEFxPH9PR, PHKEFxPHKOK, PHKONxPHKFD, PHKDNxPHS3J, PHKFOxPHCOG, PHKDKxPHKFA, PHKDNxPH9PH. Tabla 16 Población PHKEF/PHBNA PHKEF/PHS2G PHKFO/PHS3J PHKFAlPHBNA PHKFAlPHKEF PHS2Y/PHKEF PH30T/PHKEF PHKEFIPH9PR PHKEF/PHKDK PHKON/PHKFD PHKDN/PHS3J PHKFO/PHCOG PHKOKIPHKFA PHKDNIPH9PH Cantidad de indo 9 13 12 12 34 12 11 12 18 30 11 9 15 8 MRCV1 Ho Ho Ho Fi'o Ho Ho S re ante Segregante Segre ante S re ante SeRregante Se r ante Se re ante SegreQante Estas poblaciones se generaron con el proceso de los haploides dobles. La cantidad de individuos 40 caracterizados por resistencia al MRCV se detalla en la Tabla 16. Se usaron los datos de huellas digitales genéticas en la región del QTL principal y la información de identidad por descendencia para definir las poblaciones con QTL segregantes y QTL fijos. CalificaciÓn fenotipica La calificación fenotípica de cada una de las poblaciones OH MEPS se basó en conjuntos de datos fenotípicos obtenidos en el campo durante una temporada de cultivo. peterminaciÓn del genotipo del maiz El genotipo de la progenie OH de maiz se detenninó usando un conjunto de 756 SNP distribuidos en el genoma del maíz. Después, se representaron las posiciones obtenidas como un histograma superpuesto con la figura de mapeo de intervalos. Resultados Análisis de QTL marcadores En este estudio se identificó un solo intervalo cromosómico de importancia correlacionado con QTL asociados con la resistenciafsusceptibilidad a infecciones de MRCV cuando se seleccionaron "a priori" poblaciones de cruzamientos SS resistente x susceptible, y segregantes para el QTL de mayor importancia para el MRCV en el cromosoma 2. Los QTL se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTL significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2. Los cruzamientos genéticos entre las lineas endocriadas que alojaban el alelo positivo del QTL de mayor importancia en el cromosoma 2 (QTL fijado por los progenitores) resultaron en una mayoria de progenies con una calificación de MRCV de campo de 4 o más. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor , como se ilustra en las Tablas 1 y 2. Algunos de los 30 marcadores identificados en el análisis de regresión de marcadores individuales presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. En un grupo de lineas endocriadas SS, la asociación principal se localizó en el marcador MZA10538 (posición 54, 5) . En un grupo de lineas endocriadas NSS, se localizó una asociación de importancia en la posición 72 cM. piscusión/conclusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromosómicos y marcadores individuales correlacionados con la 40 resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son utiles en la MAS, y también para otros propósitos. Ejemplo 5 Caracterización de las líneas endocriadas principales 45 Se caracterizó un conjunto de materiales genéticos argentinos en función de su fenotipo y su genética para confirmar loci marcadores genéticos de maiz asociados con la resistencia al MRCV. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener lineas endocriadas e híbridas de maiz mejoradas. Lineas de maíz y calificación de la resistencia Las variedades de plantas usadas en el análisis provinieron de diversas fuentes, incluyendo germoplasma elite, cultivares disponibles comercialmente y otras lineas publicas que representaban un amplio rango de 55 gennoplasma relacionado con el programa de desarrollo argentino, y se incluyeron las calificaciones principales de resistencia al MRCV. Se prepararon grupos de lineas de maiz para realizar análisis basados en sus respuestas fenotípicas contra infecciones de MRCV, donde las plantas se calificaron como variedades muy susceptibles o muy resistentes. Las 60 clasificaciones de resistencia y susceptibilidad se basaron solamente en observaciones de incidencia de enfermedades fortuitas de ocurrencia natural, en pruebas de campo que se prolongaron durante varios años. El grado de resistencia de la planta a infecciones de MRCV varió ampliamente, y se midió usando una escala entre uno (muy susceptible) y nueve (muy tolerante) . En general, se asignó una calificación de dos (2) a las cepas más susceptibles, se asignó una calificación de cuatro (4) como umbral para considerar una planta susceptible o resistente (menos de 4, susceptible; 4 o más, resistente) , y se asignó una calificación de siete (5-7) a las lineas más resistentes. Se reservaron los valores de resistencia de ocho (8) y nueve (9) para niveles de resistencia muy raros, generalmente no observados en el germoplasma existente. De no haber enfermedad presente en un sembradío. no se calificó la resistencia. Sin embargo. de apreciarse señales de enfermedad en una localización específica en el campo, se evaluaron todas las líneas en dicha localización. Se acumularon calificaciones para las cepas de prueba en múltiples localizaciones y años, y finalmente se le asignó un valor promedio (por ejemplo, consenso) a cada línea. La recolección de los datos típicamente se realizó en un período de calificación. Dicho período de calificación se estableció después del florecimiento. Para evaluar la relación entre los marcadores y la resistencia, se usó un abordaje de regresión simple por comparación. Se verificó el origen de los alelos con un abordaje de identidad por descendencia. Usando este 15 abordaje, se usaron las lineas de maiz consideradas como representativas de las clases resistencia o susceptibles para evaluar la asociación. Se construyó un grupo de lineas resistentes, donde las lineas endocriadas con una calificación de resistencia de 4 o más se consideraron "resistentes". De manera similar. las líneas de maíz con calificaciones de tres o menos se consideraron en conjunto como susceptibles. Solamente se usaron las lineas que pudieron asignarse en forma confiable a cualquiera de los dos grupos. Una vez que una línea se incluye en un grupo "resistente" o "susceptible". se la trata como igual en dicho grupo. También se usaron las calificaciones cuantitativas reales para la prueba de asociación. Además de esta prueba, se usó la información de identidad por descendencia para confirmar el origen del alelo resistente con los marcadores más asociados. En el estudio se identificaron 85 lineas de maiz que fueron consideradas resistentes en el espectro fenotipico; estas plantas formaron el grupo "resistente". También se identificaron 35 lineas de maiz que fueron consideradas susceptibles al MRCV; estas cepas formaron el grupo "susceptible". Determinación del genotipo de maiz Se determinó el genotipo de cada una de las líneas tolerantes y susceptibles de maíz con un conjunto de 63 marcadores SNP que abarcaron la región del QTL en el cromosoma 2. usando procedimientos bien conocidos en la técnica. El protocolo de determinación del genotipo consistió en recolectar tejido foliar joven y aislar ADN genómico a partir de tejido agrupado de cada linea endocriada. El ADN genómico de maiz se extrajo con el método CTAB. como se describe en Maroof et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 81 :8014-8018. Después, el ADN genómico aislado se usó en reacciones de PCR con cebadores de amplificación especificos para una gran cantídad de marcadores que abarcaron la región del QTL. Se determinó el genotipo de marcadores SNP usando un protocolo ASH. La lógica subyacente es que los marcadores con distribuciones de alelos significativamente diferentes entre los grupos resistente y susceptible (es decir, distribuciones no azarosas) podrian estar asociados con el carácter y podrian usarse para separarlOS para realizar una selección asistida por marcadores de lineas de maíz con resistencia o susceptibilidad al MRCV previamente no caracterizadas o caracterizadas. En el presente análisis se examinó un locus marcador por vez, y se determinó si la distribución de alelos dentro del grupo resistente era 45 significativamente diferente de la distribución de alelos dentro del grupo susceptible. En este análisis se compara la calificación fenotípica de las plantas con los genotipos en los loci diana. Resultados 50 La distribución no azarosa de los alelas entre los grupos de plantas resistentes y susceptibles en los diversos loci marcadores en la Tabla 1 (en la columna encabezada por "Método de identificación", el método indica "identidad por descendencia") es una evidencia clara de que los QTL que influyen en la resistencia al MRCV están ligados a estos loci marcadores. Considerando que la mayoria de las lineas endocriadas en este conjunto corresponden a un programa de desarrollo específico (programa de desarrollo argentino) . ha de esperarse que los inventores 55 descubran desequilibrio de ligamiento con otros marcadores en las regiones circundantes del gen. Los marcadores más asociados correspondieron a los marcadores previamente considerados preferidos. Como es conocido en la técnica. el nivel de asociación de los marcadores diana con un carácter de interés será determinado a partir del nivel de desequilibrio de ligamiento en la región diana en dicho conjunto de materiales 60 genéticos. En la Tabla 17 a continuación se detalla el nivel de asociación en la región diana entre los datos genotipicos de los marcadores SNP y la respuesta al MRCV. Tabla 17 ICr. Ipos. IMarcador IF (1, n-2) Ipr (F) ICar. MRCV 64, 05 MZA625-29-A 1, 612 0, 322 95, 712 O uu 64, 05 MZA625-3D-A 1, 602 -0, 326 92 , 373 O uu 65, 99 MZA16656-8-A 1, 613 0, 255 4, 107 O uu 65, 99 MZA16656-19-A 1, 571 0, 344 105, 781 O u •• 65, 99 MZA15490-137-A 1, 724 -0, 189 23 , 834 O uu 65, 99 MZA15490-138-A 1, 731 -0, 179 20 , 667 O .... 65, 99 MZA15490-801-A 1, 727 -0, 172 19, 222 O uu 65, 99 MZA2038-71-A 1, 702 0, 045 1, 095 0, 298 65, 99 MZA2038-7B-A 1, 691 0, 063 1, 987 0, 161 65, 99 MZA11826-801-A 1, 673 0, 098 , 614 0, 034 · 65, 99 MZA11826-27-A 1, 681 0, 092 , 315 0, 04 · 65, 99 MZA 11826-803-A 1, 673 -0, 113 6, 286 0, 014 · 65, 44 MZA9105-8-A 1, 576 -0, 226 22, 461 O .... 65, 44 MZA9105-6-A 1, 681 -0, 081 3, 452 0, 066 Con el fin de evaluar el efecto de la variación alélica en este QTl a nivel de los híbridos, se caracterizó un conjunto de 371 híbridos (antecedentes genéticos heterogéneos) de acuerdo con la presencia de uno (heterocigotos para el QTl) o dos alelos resistentes (homocigotos para el QTl) en las lineas progenitoras. Se observó un efecto positivo y aditivo del alelo resistente en el QTl de importancia en las combinaciones híbridas; no se observaron efectos maternos. En la Tabla 18 a continuación se detalla el desempeño en el campo de híbridos con distintos genotipos en el QTl de mayor importancia. Discusión Existe una cantidad de maneras para usar la información proporcionada en este análisis para desarrollar variedades de maiz mejorado. Una aplicación consiste en usar los marcadores asociados (o más basados en un valor de corte de probabilidad más alto) como candidatos para mapear QTl en poblaciones especificas segregantes para plantas con tolerancia a la infección de MRCV. En esta aplicación, se efectúa un mapeo de QTl convencional en una población segregante, pero con atención especial en los marcadores asociados con la tolerancia a la infección de MRCV, en lugar de usar marcadores para el genoma completo. Esto hace que los esfuerzos de mapeo sean más económ icos al reducir dramáticamente los recursos de laboratorio empleados en el proyecto. Por ejemplo, en lugar de analizar poblaciones segregantes con una gran cantidad de marcadores que abarcan el genoma completo, se realiza la búsqueda solamente con aquellos pocos marcadores que satisfacen un determinado corte estadístico en el estudio de asociación de alelos. Esto no solamente reduce el costo del mapeo, sino que también elimina las pistas falsas que sin duda aparecen con un gran conjunto de marcadores. En cualquier cruzamiento, es probable que solamente un pequeño subconjunto de los marcadores asociados esté de hecho correlacionado con la tolerancia a infecciones de MRCV. Una vez que se identifican los pocos marcadores relevantes en cualquier progenitor tolerante, pueden centrarse los esfuerzos de la futura selección asistida por marcadores (MAS) solamente en aquellos marcadores que son importantes para esta fuente de tolerancia. Al preseleccionar las líneas que tienen el alelo asociado con la con tolerancia por MAS, pueden eliminarse las líneas susceptibles indeseable, y pueden concentrarse los recursos de las pruebas de campo costosas en las líneas que presentan una probabilidad elevada de ser resistentes a la infección de MRCV. Ejemplo 6 Evaluación de aTl en poblaciones de cruzamiento F3 las asociaciones de marcadores se usan ampliamente en métodos para ídentificar locí genéticos que cosegregan con un fenotipo deseado. Mediante la identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener líneas endocriadas e híbridas de maíz mejoradas. Lineas de maíz Se usó el esquema de cruzamiento tradicional, basado en el método en el método de desarrollo de pedigrí convencional, para realizar los cruzamientos F1 y obtener varias generaciones de autocruzamiento (F2, F3, F4, 5 etcétera) _Con el objetivo de comprobar la importancia de los alelas pOSitivos y negativos en el QTl de mayor importancia para la resistencia al MRCV en un conjunto especifico de materiales de desarrollo argentinos, se siguieron los siguientes pasos: a) Selección de los progenitores resistentes cuya resistencia habría de esperarse sobre la base del MRCV1 de mayor importancia; b) Selección de un total de 2372 familias F3, originadas en múltiples cruzamientos de desarrollo; c) Creación de dos grupos de familias F3, un primer grupo basado en cruzamientos entre progenitores sin los alelos positivos del QTl de importancia, y un segundo grupo donde ambos progenitores contienen el alelo positivo del QTl de importancia. Se usaron los datos de huellas digitales genéticas en la región del QTl principal y la información de identidad por descendencia para definir las poblaciones con QTl segregantes y QTl fijos (positivas/negativas) . MZA 16656 y/o los marcadores circundantes fueron los marcadores clave para definir la presencia del alelo positivo para MRCV1 . la cantidad total de individuos localizados en estos grupos fue 2372. Se usaron los datos de huellas digitales genéticas en la región del QTl principal y la información de identidad por descendencia para definir las poblaciones con QTl segregantes y QTl fijos . de cada una de las poblaciones F3 se basó en conjuntos de datos fenotípicos recolectados en el campo en una temporada de cultivo. peterminación del genotipo del maiz No se determinó el genotipo de familias F3 individuales. El genotipo del QTl más importante para cada población F3 individual se estimó de acuerdo con los alelos especificos en ambos progenitores. Si ambos progenitores en una población F3 específica contenían el alelo positivo en MRCV1, se consideró que la totalidad de la progenie de dicho cruzamiento contenia el alelo positivo. Si ambos progenitores en una población F3 especifica contenian el alelo negativo en MRCV1, se consideró que la totalídad de la progenie de dicho cruzamiento contenía el alelo negativo. Se usó software convencional para realizar el análisis ANOVA de los marcadores. Resultados Aná/isis de QTL marcadores Con este estudio pudo apoyarse la conclusión de que se obtiene un intervalo Cfomosómico de importancia correlacionado con QTl asociados con la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV cuando se seleccionan ~a priori" poblaciones obtenidas de cruzamientos fijos para el QTL de mayor importancia para MRCV en el cromosoma 2. ANOVA de un solo marcador Usando un ANQVA para un marcador, se observó una cantidad de marcadores asociados con el fenotipo de tolerancia con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor. Algunos de los marcadores identificados en el análisis 45 ANOVA presentan una concordancia de observaciones con el mapeo de asociación, donde los distintos abordajes permitieron identificar los mismos marcadores. Por ejemplo, hay marcadores en la región entre 55 y 70 cM del cromosoma 2 que fueron identificados con la regresión de marcadores y el mapeo de asociación. Discusiónlconclusiones: En este estudio se han identificado intervalos CfomOSómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para otros propósitos. En este ejemplo, los inventores evaluaron el efecto sobre la resistencia al MRCV de la variación alélica en MRCV1, y se observó una asociación clara entre esta variación alélica y el fenotipo esperado sobre una gran 55 cantidad de progenies F3. En la Tabla 19 a continuación se presenta la prueba de F del modelo, donde la fuente fue el QTL y se consideraron dos niveles de dicha fuente: Nivel AA: poblaciones F3 con alelos susceptibles fijos en la región dianadiana (posición 65, 99 o inferidos por los marcadores circundantes) y nivel BB: poblaciones F3 con alelos 60 resistentes fijos en la región dianadiana (posición 65, 99 o inferidos por los marcadores circundantes) . Tabla 19 s == 1, 094: R-Sq == 36, 87%; R-Sq (adj) '" 36, 84% Referencias: DF. Grado de libertado. SS. Suma de cuadrados. MS. Cuadrados medios. F. Valor de F. 10 P. Valor de probabilidad. En la Tabla 20 a continuación se presenta una prUl~ba convencional, donde el nivel de AA y el nivel de BB representan la variación alélica en el QTL diana y de acuerdo con el modelo induido en la Tabla 19. El promedio fenotípico para el nivel de AA fue 3, 42 (categoría susc:eplible al MRCV) , y el promedio fenotípico para el nivel de BB fue 5, 138 (categoria resistente al MRCV) . Tabla 20 Intervalo de confianza individual del 95% para el promedio basado en la desviación estandar agrupada ---+.._------+--------+---------+----- ('-) (-' ) ---+.._------+---------+---------+---3, 504, 00 4, 50 5, 00 Nivel N Promedio Desv. Es!. AA 1462 3, 420 1, 048 BB 910 5, 138 1, 164 Desviación estándar agrupada = 1, 094 20 Referencias: N: Cantidad de familias F3. Promedio: Promedio fenotípico de cada nivel. Desv. Est.: Desviación estándar. Ejemplo 7 Mapeo de genes de alta resolución y líneas casi isogénicas El mapeo de genes de aHa resolución basado en la evaluación de la progenie de plantas resistentes homocigotas se efectuó mediante la localización de los genes de resistencia al MRCV con alta resolución. Se realizó un mapeo de intervalos de QTl y un análisis de regresión de marcadores individuales para identificar intervalos cromosómicos y marcadores genéticos de maiz (resp, ~ctivamente) que estuvieran asociados con la resistencia y pudieran mejorar la resistencia a infecciones de MRCV. El mapeo de QTl y la regresión de marcadores son métodos ampliamente utilizados para identificar loci genéticos que ca-segregan con un fenotipo deseado. Mediante ta identificación de estos loci genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar ta eficiencia de los cruzamientos para obtener lineas endocriadas e hlbridas de maiz mejoradas. lineas de malz Se creó una población principal para el mapeo de genes de resistencia al MRCV de alta resolución a partir det cruzamiento de las lineas endocriadas PH7WT y PH3DT. Se creó otra población para el mapeo fino en una fuente independiente a partir del cruzamiento de las lineas endocriadas PH9TJ y PH890. la población PH7WTxPH3DT consistió en 256 familias BCSF3, !:;Ieneradas mediante la autocruza y la fijaciOn de plantas recombinantes BCS seleccionadas a partir de un totéll de 3000 plantas BCS, las cuales alojaban un fragmento 45 heterocigoto en la región entre 50 y 80 cM en el cromosoma 2. Esta estrategia permitió abarcar recombinantes de la región del QTl completa (Tablas 7 y 8, Y Figura 4A y Figura 4B) . la población PH9T JxPH890 consistió en 245 familias BC3F3, generadas a) mediante el cruzamiento de plantas BC2F4 seleccionadas, homocigotas para el aTl de mayor importancia en los cromosomas 2 y 5, con PH890 (progenitor susceptible) ; b) produciendo dos generaciones de autocruza para lograr la fijación en la s familias BC3F3. En la Tabla 21 se indica la cantidad de plantas recombinantes BC5F3 generadas a partir del cruzamiento PH3DTxPH7WT. También se incluye el tamaño en Kb esperado para cada intervalo marcador. En la Tabla 22 se indica la cantidad de plantas recombinantes BC5F3 generadas a partir del cruzamiento PH3DTxPH7WT. Se incluye una comparación con la primera estimación de contenido del gen. Tabla 21 'Marcadores ordenados de acuerdo con la secuenciación, la fisica y la recombinación. El mapa genético Pioneer solamente se incluye a modo de referencia. "Cantidad de bandas de huellas digitales geneticas entre pares de marcadores. 5 Tabla 22 Pos. UC7 PCO ~~;'osoma ;;'::pael vMer~adus amplicones ~:n de! Identificador genético de trabajo de malz :;:t~~ de la Recombinanies PHD yn 2 64, 05 MZA625 loe_029 AC191302_5part fr:~:riPCjón de Prote¡na de unión a loc_028 AC191302_3 putrescina; proteina hipotética loe 027 co6Q[) 856 l-asc~bato - p I oeroxldasa probable Protefna de loc_025 pco530474 desarrollo de I____ __t-__+ _______+ ____ I-_______________+~P.:lástjdos· DAG Proteína hipotética; 59 l oc 024 co593067 Suhunidad . de la -P ATP slntetasa vacuolar? l oc 023 AC 191302 6 Proteína hi tética loc 022 Infericb en arroz SOrgo Proteina hi otética loc 021 co641713 Proteína hi otética loe 016 0591841 Fact.or. regulador del -pe CfecJmlento ~ l oc_015 Genomic_PC0622600_PC0666161 ~~:f:!: ~nido8~ Se generaron lineas casi isogénicas (NIL) BC5F3 que presentaban variaciones alelicas en la región de los marcadores preferidos (MZA16656, MZA15451 , MZA15490, MZA2038, MZA11826 Y MZA9105) por medio de una selección asistida por marcadores a partir d, ;!1 cruzamiento PH7WTxPH3DT. Las NIL se generaron introduciendo la región del OTL de PH7WT en PH:-IDT, depurando el antecedente genético y seleccionando recombinantes especificas en la región de los marcadores preferidos. Mediante la autocruza de plantas BC5F2 individuales que contenían un fragmento heterocigotCl en la región de los marcadores preferidos, se obtuvieron líneas casi isogénicas negativas y positivas, y el QTL se trató como un solo factor mendeliano. Carficación fenotípica La calificaciOn fenotípica de cada una de las familials BC5F3, provenientes del cruzamiento PH7WTxPH3DT, cada una de las 245 familias BC3F3, provenient!~s del cruzamiento PH9T JxPH890, y cada uno de los progenitores, se basó en conjuntos de datos fenotrpicos recolectados en el campo (experimentos de campo con infecciones naturales, provincia de Córdoba, Argentina) en una temporada de cultivo. Ademas de la calificación fenotípica, las isolíneas específicas en la región de los marcadores preferidos se caracterizaron con una prueba de ELlSA para determinar la presencia del virus en la provincia de Buenos Aires, Argentina. Determinación del genotipo del maiz El genotipo de la progenie BC5F3, proveniente del cruzamiento PH7WTxPH3DT, y BC3F3, proveniente del cruzamiento PH9T JxPH890, usando SNP polimórfícos en la región del QTL en el cromosoma 2 (véase el Ejemplo 2) . Además, se disei'laron dos marcadores CAPS y se los usó para determinar el genotipo de las progenies BC5F3; estos dos marcadores CAPS se colocaron en el intervalo entre MZA9105 y MZA18224. En el caso del cruzamiento PH9T JxPH890, se colocaron rnarcadores adicionales en el QTL del cromosoma 5. Las familias BC5F3, obtenidas a partir del cruzamiento PH7WTxPH3DT, se sometieron a una depuración de los antecedentes en la etapa BC3, especialmente en el QTL del cromosoma 5. Las familias BC5F3, obtenidas a partir del cruzamiento PH9T JxPH890, se sometieron a una depuración de los antecedentes en la etapa BC2. Se usó Windows QTL Cartographer (la versión mas actualizada de este software a la fecha del mapeo de QTL) para el amilisis de regresión de marcadores y el mapo:lo de intervalos de QTL. Las calificaciones LOO (logaritmo de la relación de probabilidades) se estimaron para t'Jdo el genoma, de acuerdo con procedimientos de mapeo de QTL convencionales. Se usaron las calificaciones promedio en el mapeo de intervalos de QTL. El umbral LOO fue 2, 5. Se estimó un intervalo de confianza para cada QTL. Luego se representaron las posiciones obtenidas como un histograma superpuesto con la figura de mapeo de intervalos_ Como estas poblaciones se generaron con una selecdón asistida por marcadores (eventos de recombinación no azarosos) , se consideró que el análisis de regresión de marcadores seria tan poderoso como el análisis de mapeo de intervalos. Resultados Mapeo de Intervalos de QTL En este estudio se identificó un solo intervalo cromosómico Que estuvo correlacionado con OTL asociados con la resistencia/susceptibilidad a infecciones de MRCV. Los QTL se identificaron usando los datos de campo. Se localizó un QTL significativo de importancia en el grupo de ligamiento 2, en la posición de los "marcadores preferidos' en las poblaciones de mapeo de alta resolución obtenidas a partir de los cruzamientos PH7WTxPH3DT y PH9T JxPH890. El QTL adicional en el cromosoma 5, proveniente del cruzamiento PH9T JxPH890, no fue significativo en este análisis. Regresión de marcadores individuales Usando una regresión de marcadores individuales, se descubrieron varios marcadores asociados con el fenotipo resistente con un nivel de confianza P = 0, 05 o mejor, como se ilustra en las Tablas 23 y 24. Los marcadores identificados en el análisis de regreSión de marcadoms presentan una posiCión genética de alta resolución para el QTl diana, la cual coincide con la posición de los rnarcadores preferidos. En la Tabla 23 puede observarse el análisis de regresión de marcadores (MRCVSC = calificación fenotípica del MRCV) , y en la Figura 5 puede observarse el mapeo de intervalos para el cruzamiento PH7WTxPH30T. En la Tabla 24 puede observarse el analisis de regresión de QTl marcadores para el cruzamiento PH9T JxPH890, con QTl especiflCos en los cromosomas 2 y 5 (MRCVSC = calificación fenotlpiC::1 del MRCV) , y en la Figura 6 puede observarse el mapeo de intervalos para el cruzamiento PH7WTxPH3DT. Tabla 23 lineas casi isoqénicas Las líneas casi isogénicas que presentaban variaciones alélicas en la región de los marcadores preferidos presentaron una diferencia significativa en su respuesta a la enfermedad en la provincia de Córdoba (Figura 7A y Figura 7B) . En la Tabla 25 se detalla el genotipo de IDs SNP en la región de los marcadores preferidos para las lineas casi isogénicas (isolínea negativa = haplotipo susceptible; isolinea positiva:: haplotipo resistente) ; el fragmento introducido se representa con los SNP pOlirnórficos de MZA 16656-19-A a MZA9105-8-A, alliempo que los marcadores monomórficos circundantes MZAt¡25-30-A y MZA18224-801-A representan el haplotipo susceptible en ambas líneas casi isogénicas. En la prueba de ElISA para determinar la presencia de virus (muestras de la proviocia de Buenos Aires) se observó 0% de plantas positivas para el virus en las isollneas que contenlan el alelo resistente, mientras que 38% de plantas fueron posilivas para el virus en las isolíneas que contenían el alelo de susceptibilidad. Tabla 25 Isolinea MZA62530-A MZA1665619-A MZA15490801-A MZA15490137-A MZA203871-A MZA203876-A MZA11826-801A MZA11826803-A MZA91058-A MZA18224801-A 64 05 6599 6599 6599 6599 6599 6599 6599 6544 688 Negativa e A e A T e G T G A Positiva e G G e A T A e A A Nota: La prueba de ELlSA no se realizó con materiales sembrados en la provincia de Córdoba (la presión de la enfermedad fue mayor que en la provincia de 8uenos Aires) . Sin embargo, la presencia de enadones (un síntoma especifico de los Fijivirus) en los materiales resistentes y susceptibles en la provincia de Córdoba indica la presencia del virus en las plantas. Discusión/condusiones: En este estudio se han identificado intervalos cromo:sómicos y marcadores individuales correlacionados con la resistencia al MRCV. Los marcadores en estos intervalos son útiles en la MAS, y también para otros propósitos. la localización de los genes con alta resolución facilitalla clonación del QTL diana. Ejemplo 8 localización de genes, secuenciación y genes candidatos La información de secuenciación, genética y fisica de la región de los marcadores preferidos se integró para caracterizar la región diana. Se usó información de abordajes independientes (datos de recombinación, análisis de asociación y fragmentos conservativos) para identificar un intervalo especifico para generar datos de secuenciadón adicionales. Lineas de maíz Vcalificación fenotípica A las lineas de maíz se les asignó una calificación 'fenotípica sobre la base de su grado de resistencia a las infecciones de MRCV (en contraste con la categoriza.ción Simple de "tolerante" o ·susceptible") . las variedades de plantas usadas en los análisis provinieron de di"versas fuentes, incluyendo germoplasma elite, cultivares distribuidos en el ámbito comercial y otras variedade, s públicas. las colecciones comprendieron 883 lineas de maiz. Las líneas usadas en el estudio tuvieron un amplio rango de madurez, que varió entre CRM (madurez relativa comparativa) 90 y CRM 140, lo que representa las lineas endocriadas más importantes de germoplasma Pioneer. El grado de resistencia de una planta a las infecciones de MRCV varió ampliamente, lo cual se midió usando una escala entre uno (muy susceptible) y nueve (muy resistente) . En general, se asignó una calificación de dos (2) a las cepas más susceptibles, se asignó una calificación de cuatro (4) como umbral para considerar una planta susceptible o resistente (menos de 4, susceptible: 4 o más, resistente) , y se asignó una calificación de siete (5-7) a las lineas més resistentes. Se reservaron los valores de resistencia de ocho (8) y nueve (9) para niveles de resistencia muy raros, generalmente no observados en el germoplasma existente. De no haber enfermedad presente en un sembradío, no se calificó la resistencia. Sin embargo, de apreciarse señales de enfermedad en una localización especifica en el campo, se evaluar, :!n todas las líneas en dicha localización. Se acumularon calificaciones para las cepas de prueba en múltiples localizaciones y años, y finalmente se le asignó un valor promedio (por ejemplo, consenso) a cada linea. Se recolectaron calificaciones de resistencia para la c·alección de 883 colecciones de líneas endocriadas durante varias temporadas de cultivo (se evaluaron 394 lineas; endocriadas al mismo tiempo en la temporada de cultivo) . la recolección de los datos típicamente se realizó en un procedimiento de calificación después del florecimiento. Determinación del genotipo de maíz Se analizó una colección de 883 líneas de malz reali2:ando la secuenciación de ADN de 4000-10000 genes (loci genéticos) . Se usó la variación de los SNP para generar los haplotipos específicos de las lineas endocriadas SS en cada lacus. Estos datos se usaron para identificar las asociaciones enlre los alelas y la resistencia al MRCV a nivel del genoma. Pedigrí del maíz -fuentes de resistencia Se usó una base de datos de pedigrí Pioneer para comprender las relaciones entre las líneas endocriadas y los haplotipos. Esta base de datos contiene la relación de pedigrí entre las lineas endocriadas desde 1919. En el caso de las líneas endocriadas públicas, se incorporó información pública sobre el pedigrí y los origenes para comprender la relación entre las lineas endocriadas y el haplotipo. Se creó una lista de fundadores clave, los cuales presentaron fuentes de resistencia y susceptibilidad al MRCV en germoplasma Pioneer (induyendo lineas publicas) usando datos de pedigrí, fenotípicos y genotlpicos. la mayoría de las lineas endocnadas susceptibles se remontan a un conjunto especíifico de haplotipos de germoplasma de los EEUU (lineas públicas tales como 837, 873, 814, OH07, C103, y lineas endocriadas Pioneer 165 y 938) ; una excepción es PH26N, que proviene de germoplasma tropical. Localización de los genes El intervalo entre los marcadores MZA15490 y MZA:1038 (Figura 8) se consideró como región candidata para estudiar la diversidad alélica en la región del gen de resistencia. Esta región se seleccionó usando "nformación proveniente de las siguientes fuentes: a) Recombinantes. La localización de las recombinantes se indicó en el Ejemplo 7. Los datos fenotipicos de dos recombinantes en el intenfalo entre MZA16656 y MZA15490, y una recombinante en el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038 se usó para delimitar el lado izquierdo de la posición del gen. En la población de recombinación no hubo recombinantes disponibles en la región MZA2038MZA11826-MZA9105. b) Se usó información genotipica y fenotípica de líneas endocriadas SS de germoplasma Pioneer para detectar un fragmento conservativo para las líneas endocriadas resistentes/susceptibles. La detección de un fragmento conservativo se realizó dentro de pedigries específicos y para varíos fundadores independientes cuando hubo suficientes SNP conservativos disponibles para dichos fundadores independientes. Diversidad alélica natural y relación de los fundadores Se seleccionó el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038 para el análisis de diversidad alélica debido a la probabilidad elevada de que alojara un gen candidato, o debido al desequilibrio de ligamiento elevado con un gen candidato. Como la secuencia completa en el interva'lo entre MZA 15490 Y MZA2038 se halla disponible para la línea 873 (873 =274) , se usó un grupo de 13 fragmentos de secuencia pequenos como diana para la secuenciación en un conjunto de líneas de prueba. LflS líneas de prueba (Tabla 26) incluyeron a) algunas de las lineas endocriadas y haplotipos resistentes y susceptibles clave; b) los progenitores resistentes y susceptibles de las poblaciones de mapeo PH7WTxPH3DT y PH9T J, :PH890; c) recombinantes clave del conjunto de hibridos y la población de recombinación (PHG63 y una recombinante en el intervalo entre MZA 15490 YMZA2038) . En la Tabla 26 se detalla una lista de lineas de prueba y se incluyen calificaciones de resistencia y susceptibilidad al MRCV en germoplasma Pioneer y una recombinante en el intervato entre MZA15490 y MZA2038. En la Figura 9 se ilustra la posición de los fragmentos diana en el intervalo entre MZA 15490 Y MZA2038, Y la posición de los genes candidatos. Se obtuvieron resultados de secuenciación para las siguientes secuencias: MRQV_00005-1, MRQV_1318-1, MRQV_02352-1, MRQV_03828-1, MRQV_06374-1, MRQV_08351-1, MRQV _09551-1-1 , MRQV_10673-1 y MRQV_11074-1 . En la presente documentación se proveen las seOJencias en el grupo de lineas endocriadas de prueba para los segmentos MRQV _08351 -1 y MRQV_l 0673-1 , induyendo SNP polimómcos para caracterizar los haplotipos (véalse la Figura 16) . En la Figura 9 se induye la posición de la secuencia en el intervalo entre MZA15490 y MZA2038. Los datos de tas secuencias se usaron para ide, ntificar un homólogo probable para los segmentos de descendencia entre calificaciones independientes de resistencia o susceptibilidad. la región entre MRQV_OOOO51 y MRQV _08351 -1 fue común para la mayorla de las fuentes de susceptibilidad independientes. Los datos para una recombinante dave (de la población de mapeo de alta resolución, susceptible a la enfermedad) permitieron comprobar que el punto de recombinación para estel material genetico está localizado dentro de un factor de transcripción Myb potencial (PC0644442) , y que la variación de secuencia que genera la resistencia deberia estar localizada entre la posición de este gen candidato y MZA2038. También hubo una relación IBO (identidad por descendencia) esperada entre fuentes independientes, en la región de PC0644442. o una región cercana a ella, como se indica a continuación: a) PHR33 Y PH467. b) PHR33, PH9TJ, PHJ40 Y PHOG9. e) PHK09 presentó un haplotipo espeCifico. d) 630 presentó un haplotipo especifico. Hubo un grupo de SNP diana en MRQV _08351 -1, donde dichos SNP fueron muy especificas para las fuentes de resistencia. Sin embargo, los datos de la recombinación indican que la secuencia diana deberia estar localizada entre MRQV _08351-1 (localizado en PC0644442) y MZA2038. Teniendo en cuenta la especificidad de los SNP diana en MRQV_08351-1, se secuenció este fragmento espeCifico en un total de 625 lineas endocnadas de germoplasma Pioneer. Se desarrolló una descripción genética con relación a la resistencia al MRCV de parte del germoplasma Pioneer. usando la información combinada de a) los marcadores circundantes de este intervalo (MZA15490 y MZA2038) , b) los datos de secuencia para las 625 lineas endocriadas y las lineas de prueba, c) la relación de pedigri entre las lineas endocriadas, y d) los datos fenotipicos para dichas lín~~as endocriadas. Se usó un grupo específioo de haplotipos en MRQV._08351-1 , o combinados con la información de haplotipos para MRQV_10673-1 y MZA2038, para incrementar la información de caracterización e identidad por descendencia para las fuentes de resistencia de mayor importancia en el germoplasma Pioneer y considerar las variantes probables de la región diana. En la Tabla 2i' se presenta una descripción de los haplotipos especificos y las respuestas observadas y esperadas a la enfermedad para los distintos materiales por haplotipo. Se incluyen las fuentes representativas a modo de referencia. '", 1, 1'<> ... , MRQV_08351-1 MRQV_ 10673-1 MZA2038 Fenotipo esperado MRCVSC n Fuente Datos de segregación 1 1, 2, 8, 9 4, 5, 9, 11 Susceptible 3, 02 247 PHFV5, 274, PHANO, 165, OH7, otros 1 3 5 Resisten te 460 5 PHJ40 No 2 1 12 Resistente 4, 59 22 PH7WT, 173, 630, PHB04, PH14J PHAA4, PHG64 S; 3 6 1 14 Susceptible 3, 21 1. C103, 157, otros 4 4 Susce tibie 331 13 216 otros 5 4 4, 11 Resistente 5, 00 3 PHR33, PH467, 501 LACAUNEOP No 7 3 10, 15 Resistente 5, 90 10 PHP51 , PHDG9, 546, LACAUNEOP S; • 7 6 Resistente 500 2 PHK09, PH884, PHBD6, PHFCF SI Usando la información de MROV_08351-1, o en combinación con secuencias circundantes (MROV_10673-1 y MZA2038) , los inventores infirieron lo siguiente: a) Fuente de resistencia 1. las fuenles PHR33 y PH467 pueden compartir un ancestro común en MROV_08351-1 . las regiones compartidas con materiales europeos derivados de la variedad con polinización abierta LACAUNE apoyan la hipólesis de que hay un origen común probable a partir de una única región de haplotipo. b) Fuente de resistencia 2. las fuentes PHR33, PH9TJ, PHJ40 Y PHOG9 pueden compartir un ancestro común en la región circundante de MROV_08351 -1. Además, PHP51 puede inferirse como parte de este grupo. las regiones compartidas con materiales europeos derivados de la variedad con polinización abierta LACAUNE apoyan la hipótesis de que hay un origen común probable a partir de una única región de haplotipo. c) Fuente de resistencia 3. PHKOB presentó un haplotipo compartido con PHB06 en MRQV_08351-1, y podrlan compartir un origon común en el germoptasma Tuxpen. d) Fuente de resistencia 4. 630 presentó un haplotipo específico, y no hay una relación de IBO confirmada con otras fuentes. A partir de los resultados en las poblaciones de mapeo, los solicitantes demuestran que hay un OTl en la región de los marcadores preferidos en estas fuentes independientes: 630. PH9TJ. Alélico con 630. PHP51. Alélico con 630. PHB06. Alélico con 630. la integración de los análisis de recombinación, secuencia y pedigrí, y la inferencia de una relación de IBO esperada entre fuentes independientes motivó a los inventores para que consideraran la posibilidad de usar los cuatro haplollpos más importantes en la región de dos de los marcadores preferidos (MZA15490 y MZA2038) para caracterizar la mayoría de las fuentes de resiste~ncia en germoplasma Pioneer. Estos cuatro haplotipos de importancia podrlan agruparse como las siguientes fUlffites de germoplasma: (a) Fuentes de resistencia 1 y 2. Germoplasma duro SWAN, que comparte una región de homología con materiales de la población europea con polinización abierta dura LACAUNE. (b) Fuente de resistencia 3. Materiales originados en TUXPEN. (c) Fuente de resistencia 4. Fuente especifica, 630 es la linea endocriada representativa. El desarrollo de esta linea endocriada incluyó una base genética amplia, la aJal incluyó germoplasma TUXPEN y MEXICAN JUNE. PC0644442 (Figura 8, un factor de transcripción Myb potencial) es un candidato probable para la resistencia a la enfermedad provocada por el MRCV. las secuencias ligadas estrechamente con PC0644442 también deberlan considerarse como dianas para la clonación de genes, incluyendo las secuencias EPSIN1 probables y las secuencias circundantes del intervalo entre MZA 1182fi YMZA91 05. Se caracterizó una solo recombinante entre MZA15490 y MZA2038, proveniente del cruzamiento entre PH30T y PH7WT, Y el punto de recombinación se localizó dentro de PC0644442. la región entre el intrón 3 de PC0644442 y las secuencias promotoras de PC0644442 se consideran dianas dave para la convalidación de los efectos sobre las variaciones en las respuestas de resistencia/susceptibilidad entre los genotipos. En la Figura 10 se ilustra la caracterización de la recombinante entre MZA15490 y MZA2038; se originó una quimera PCÃ?644442 a partir de los genotipos PH30T y PH7WT. En la presente documentación se incluyen las secuencias en la región promotora de PC0644442 de PH30T (SEO ID Nº 195) Y PH7WT (SEO 10 Nº 194) , donde se Indican silios pollmórficos (véase el alineamiento de las secuencias en la Figura t5) . Ejemplo 9 MROV Caracterización de híbridos principales -Europa Se caracterizó un conjunto de materiales genéticos europeos en términos de fenotipo y genética para confirmar los loci marcadores genéticos de maiz asociados con la resistencia al MROV. Mediante la identificación de estos marcadores genéticos, puede usarse una selección asistida por marcadores (MAS) para mejorar la eficiencia de los cruzamientos para obtener malz con una resistencia mejorada al MROV. Hibridos de maiz y calificación de la resistencia las variedades de plantas usadas en el análisis provinieron de diversas fuentes, induyendo germoplasma elite, cultivares disponibles comercialmente e hibridos pre-comerciales que representaban un amplio rango de germoplasma relacionado con un programa de desarrollo europeo. Los grupos de híbridos de maíz se sembraron en un experimento de campo en España. Las clasificaciones de resistencia y susceptibilidad se basaron exclusivamente en observaciones de casos de enfermedad fortuitos, de ocurrencia natural, en pruebas de campo. El grado de resistencia de la planta a las infecciones de MRDV varió ampliamente, de acuerdo con las mediciones realiz:adas con una escala de incidencia de los sintomas del MRDV. La recolección de los datos típicamente se realizó en un período de calificación. Dicho período de calificación se estableció después del florecimiento. Para evaluar la relación entre los marcadores y la resistencia, se realizó una comparación usando la información de IBD de las líneas progenitoras. El origen del alelo se verificó usando el abordaje de identidad por descendencia. Con este abordaje, se usaron aquellas líneas de maíz consideradas representativas de cuatquiera de las clases genotipicas pa ra evaluar la asociación y predecir el desempeño a nivel de los híbridos. Determinación del genotipo de maiz Se determinó el genotipo de cada Unea progenitora de estos hibridos, y se estimaron cálculos de la IBD para cada línea. La lógica subyacente es que los marcadores con distribuciones de alelas significativamente diferentes entre los grupos resistente y susceptible (es decir, distribuciones no azarosas) podrian estar asociados con el carácter y podrian usarse para separarlos para realizar una selección asistida por marcadores de lineas de maíz con resistencia o susceptibilidad al MRCV previamente no caracterizadas o caracterizadas. En el presente análisis se examinó la información de IBO en la posición genética de la región de los marcadores preferidos y se determinó si la distribución de los alelas en el grupo resistente era significativamente diferente de la distribución de los alelas en el grupo susceptible. En este análisis se compara la calificación fenotípica de las planlas con los genotipos en los loei diana; los genotipos se predijeron por IBO. Resultados Con el objeto de evaluar el efecto de la variación alé, lica en este QTL a nivel de los hibridos, se caracterizó un conjunto de 212 híbridos (antecedentes genél¡co~; heterogéneos) de acuerdo con la presencia de uno (heterocigotos para el Q11.) o dos alelas resistentes (homocigotos para el QTL) en las líneas progenitoras. Se observó un efecto positivo y aditivo del alelo resistente en el QTL de importancia en las combinaciones híbridas. En la Tabla 28 se detalla el desempeño en el campo de hibrídos con distintos genotipos en el QTL de mayor importancia. El desempet'\o en el campo se caracterizó como calificación del MROV, protocolo similar al descripto con anterioridad. Tabla 28 Genotipo híbrido para el QTl más importante AA, alelo susce lible homoa 010 Cantidad de hlbridos 163 Promedio de ••calificación de' MRDV 425 Desv. est. 092 BA heteroci ata, alelo resistente femenino BB alelo resistente homocigoto 37 3 5, 45 6.00 1, 01 0, 88 En la Figura 11 se ilustra el desempel'lo de hibridos (je maíz bajo una infección de MRDV. El desempeño en el campo se caraderizó como calificaciOn del MROV. Discusión/conclusiones: En este ejemplo se han identificado intervalos cromosómicos que están correlacionados con la resislencia al MROV_ Los marcadores que se hallan en eslos intervalos son Utiles para la MAS. y también para otros propósitos. La predicción de la resistencia incrementada al MRDV usando los marcadores preferidos para la resistencia al MRCV indica que estos marcadores pueden usarse para la MAS con distintos Fijivirus. Por consiguiente. se espera un efecto positivo de los marcadores preferidos para la resistencla con otros Fijiviru s, tales como el fijivirus del enanismo con pica negra del arroz. Ejemplo 10 Ensayo fenotípiCo de la resistencia al MRCV Qué: Una calificación de 1 a 9 del virus del mal de Hio Cuarto. donde 1 representa la ausencia de resistencia (achaparrado, acortamiento de los internados, ausencia de mazorcas) y 9 indica que el material genétioo es resistente a la enfermedad (ausencia de sintomas) . Cuando: Desde el florecimiento hasta la cosecha Se verifican las calificaciones de lineas susceptibles conocidas para determinar si sus calificaciones actuales coinciden con las calificaciones históricas. 1. Se comparan las calificaciones que serian el resultado de lineas susceptibles en la actualidad con sus calificaciones históricas para determinar si hay coincidencia. 2. Si las calíficaciones son demasiado altas, luego no hay suficiente presión de la enfermedad para calificar esta localización. Sin embargo, se set'iala cualquier parcela donde haya mayor presencia de la enfermedad que en una pi!lrcela susceptible. 3. Calificación en base a parcelas. lals plantas en una parcela pueden tener sintomas variados debido al Uempo de infección, o algunas plantas pueden escapar de la enfermedad ~a infección natural depende de la población de vectores) . 4. Se considera la severidad de los $íntomas y la frecuencia de las plantas con síntomas. las calificaciones de 1 a 3 se hallan en la categoría susceptible; aquellas de 4 a 6 se hallan en la categoría resistente; aquellas de 7 a 9 se hallan en la categoría muy resistente. Descripción de las pruebas de campo: al Carficaciones 1-3. Categoría susceptible. los síntomas induyen enanismo severo, acortamiento severo de los internados, ausencia de mazorcas o desarrollo muy pobre de éstas, muerte prematura de las plantas. bl Calificaciones 4-6. Categoría resistente. Plantas con sintomas tales como enaciones y acortamiento de los internados btandos. Baja frecuencia de plantas con sintomas severos. el Calificaciones 79 Categoria muy resistente. Planta saludable. Presencia de enaciones o ausencia de síntomas.

Publicaciones:
ES2498440 (24/09/2014) - A2 Solicitud de patente sin informe sobre el estado de la técnica
ES2498440 (12/11/2014) - R1 Informe sobre el estado de la técnica
ES2498440 (11/05/2015) - B1 Patente de invención
Eventos:
En fecha 16/08/2012 se realizó Registro Instancia de Solicitud
En fecha 20/08/2012 se realizó Admisión a Trámite
En fecha 20/08/2012 se realizó 1001P_Comunicación Admisión a Trámite
En fecha 09/05/2013 se realizó Suspenso en Examen Formal y Técnico
En fecha 22/05/2013 se realizó Publicación Suspenso Examen Formal
En fecha 22/07/2013 se realizó 3585X_Registro Solicitud Prórroga de Plazos
En fecha 25/07/2013 se realizó Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 25/07/2013 se realizó 1585X_Notificación Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 06/08/2013 se realizó Publicación Concesión Prórroga de Plazos (BOPI)
En fecha 19/08/2013 se realizó 3007 registro contestación al suspenso Examen Formal
En fecha 19/12/2013 se realizó Suspenso en Examen Formal y Técnico
En fecha 27/12/2013 se realizó Publicación Suspenso Examen Formal
En fecha 27/02/2014 se realizó 3585X_Registro Solicitud Prórroga de Plazos
En fecha 28/02/2014 se realizó Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 28/02/2014 se realizó 1585X_Notificación Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 06/03/2014 se realizó Publicación Concesión Prórroga de Plazos (BOPI)
En fecha 28/04/2014 se realizó 3007 registro contestación al suspenso Examen Formal
En fecha 18/08/2014 se realizó 3406X_Solicitud Correcciones
En fecha 28/08/2014 se realizó Continuación del Procedimiento
En fecha 03/09/2014 se realizó Publicación Continuación del Procedimiento
En fecha 12/09/2014 se realizó IET1_Petición Realización IET
En fecha 24/09/2014 se realizó Publicación Solicitud
En fecha 24/09/2014 se realizó Publicación Folleto Solicitud (A2)
En fecha 31/10/2014 se realizó Realizado IET
En fecha 03/11/2014 se realizó 1109P_Comunicación Traslado del IET
En fecha 12/11/2014 se realizó Publicación IET
En fecha 12/11/2014 se realizó Publicación Folleto IET (R1)
En fecha 19/11/2014 se realizó Reanudación Procedimiento General de Concesión
En fecha 25/11/2014 se realizó Publicación Reanudación Procedimiento General de Concesión
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En fecha 04/05/2015 se realizó Sin Modificación de Reivindicaciones
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En fecha 04/05/2015 se realizó 1203P_Notificación Concesión por Procedimiento General de Concesión
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En fecha 11/05/2015 se realizó Publicación Folleto Concesión
En fecha 23/09/2015 se realizó Entrega título
Pagos:
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12/09/2014 - Pago Tasas IET
09/06/2015 - Pago Tasas Concesión
09/06/2015 - Pago 03 Anualidad
09/06/2015 - Pago 04 Anualidad
09/06/2015 - Pago 05 Anualidad
09/06/2015 - Pago 06 Anualidad
09/06/2015 - Pago 07 Anualidad
17/08/2015 - Pago 08 Anualidad
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El registro de patente nacional por LOCI DE CARACTERES CUALITATIVOS (QTL) IMPORTANTES QUE CONFIEREN AL MAIZ RESISTENCIA CONTRA FIJIVIRUS. con el número P201231308 fue solicitada el 31/10/2008. Se trata de un registro en España por lo que este registro no ofrece protección en el resto de países. El registro LOCI DE CARACTERES CUALITATIVOS (QTL) IMPORTANTES QUE CONFIEREN AL MAIZ RESISTENCIA CONTRA FIJIVIRUS. con el número P201231308 fue solicitada por PIONNER HI-BRED INTERNATIONAL, INC mediante los servicios del agente Javier Ungría López. El registro [modality] por LOCI DE CARACTERES CUALITATIVOS (QTL) IMPORTANTES QUE CONFIEREN AL MAIZ RESISTENCIA CONTRA FIJIVIRUS. con el número P201231308 está clasificado como C12Q 1/68 según la clasificación internacional de patentes.

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