Patente nacional por "USO DE LA LAUREQUINONA COMO ANTIPARASITARIO"

Reivindicaciones:
+ ES-2957983_A11. Laurequinona para su uso como medicamento. 2. Laurequinona para su uso como medicamento humano o veterinario. 3. Laurequinona para su uso en el tratamiento de leishmaniasis. 4. Laurequinona según la reivindicación 3, donde leishmaniasis es causada por Leishmania spp. 5. Composición farmacéutica que comprende laurequinona y al menos un excipiente farmacéutico aceptable. 6. Composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación anterior en forma sólida, liquida o gel. 7. Composición farmacéutica de acuerdo a la reivindicación anterior, donde la composición es en forma sólida es en forma de comprimido, capsula, gránulos, píldoras o liofilizado 8. Método para la preparación de laurequinona donde dicho método comprende por lo menos las etapas: i) mezclar laurinterol en un ácido orgánico, ii) añadir trióxido de cromo a la mezcla anterior en un rango concentración desde 5% hasta 20% en p/v; seguido de agitación en un rango de temperatura desde 0-15°C, preferiblemente entre 2-10°C, para obtener laurequinona; iii) aislar la laurequinona obtenida en la etapa anterior mediante un método seleccionado de la lista que consiste en extracción con un disolvente orgánico, cromatografía, filtración, decantación, evaporación, destilación, centrifugación o cristalización; v) opcionalmente purificación del producto obtenido en la etapa anterior mediante un proceso seleccionado de la lista que consiste en cromatografía, filtración, decantación, evaporación, destilación, centrifugación o cristalización. 9. Método para la preparación de laurequinona de acuerdo a la reivindicación 8, donde el ácido orgánico de la etapa i) es seleccionado de la lista que consiste en ácido acético, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido butírico. 10. Método para la preparación de laurequinona de acuerdo a la reivindicación 8, donde preferiblemente el trióxido de cromo de la etapa ii) se encuentra la concentración de trióxido de cromo es desde 8% hasta 15% en p/v; 11. Método para la preparación de laurequinona de acuerdo a la reivindicación 8, donde preferiblemente el disolvente orgánico de la etapa iii) es seleccionado de la lista que consiste en diclorometano, hexano, acetato de etilo, cloroformo, éter o acetona; preferiblemente el disolvente orgánico se selecciona de diclorometano y acetato de etilo.

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+ ES-2957983_A1 USO DE LA LAUREQUINONA COMO ANTIPARASITARIO SECTOR DE LA TÉCNICA La presente invención se refiere al uso del compuesto laurequinona en el campo de las enfermedades parasitarias. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las enfermedades tropicales desatendidas, entre las que se encuentran las causadas por parásitos protozoarios, representan un importante problema de salud pública a nivel global, costando a las economías en desarrollo billones de dólares cada año. En particular, se estima que más de un billón de personas viven en zonas endémicas de leishmaniasis, representando cerca de un millón de las enfermedades parasitarias anuales, de las cuales la mayoría corresponden a leishmaniasis cutánea. A nivel global, la leishmaniasis afecta a 12 millones de personas, y se estima que 350 millones están en riesgo de infección. El tratamiento de primera elección se basa en el uso de sales de antimonio pentavalente como el antimoniato de meglumina y el estibogluconato de sodio. Otros medicamentos como anfotericina B, paromomicina, miltefosina y pentamidina se emplean como tratamiento de segunda línea. Sin embargo, el uso de estos fármacos presenta una serie de efectos secundarios derivados de su elevada toxicidad, los tratamientos son largos y costosos y se ha descrito la aparición de resistencia por parte de los parásitos. En los últimos 30 años se ha producido una escasa innovación en desarrollo de fármacos antiparasitarios, por lo que es necesaria la búsqueda de tratamientos más seguros, efectivos y económicos. El uso y estudio de sustancias naturales, fundamentalmente de plantas y microorganismos terrestres, ha sido muy relevante para el tratamiento de enfermedades causadas por parásitos. En la búsqueda de nuevas fuentes de productos naturales destacan aquellos que provienen del medio marino. Las estructuras químicas de algunos productos naturales marinos han servido de inspiración para la síntesis de nuevos agentes para el tratamiento de enfermedades desatendidas en general. Sin embargo, a pesar de que ya existen en el mercado diversos agentes derivados de compuestos marinos, ninguno de ellos se aplica al tratamiento de enfermedades tropicales desatendidas. En el caso particular de las algas marinas, numerosos extractos compuestos puros han sido evaluados para determinar su efecto frente a protozoos, correspondiendo gran parte de ellos a compuestos de las clases de los diterpenos, triterpenos halogenados, polisacáridos sulfatados, acetogeninas, polifenoles, entre otros. En una revisión realizada por Tchokouaha Yamthe et al. (Marine Drugs 2017, 15 (11) , 323) se analizó el potencial de extractos y compuestos aislados de algas marinas para el desarrollo de fármacos frente a Leishmania spp. Este estudio reflejó que tan sólo 151 especies de macroalgas de las más de 30000 especies identificadas mundialmente han sido investigadas por su propiedades anti-Leishmania. De los trabajos analizados, 80 corresponden a extractos de algas rojas, 48 de algas pardas y 23 de algas verdes. Sólo en 12 de los estudios se continuó con el análisis químico con el fin de identificar los compuestos responsables de la actividad biológica, resultando ser, en su mayoría, moléculas de naturaleza terpénica. Hay que destacar un estudio reciente de Imperatore et al. (Marine Drugs 2020, 18 (2) , 112) en el que se investigó el potencial antiparasitario de los sesquiterpenoides marinos, avarol y avarona, y una serie de análogos semisintéticos de este último. Los resultados del mecanismo de acción putativo de estos compuestos que contienen fragmentos quinona/hidroquinona/tiazinoquinona parecen relacionar su actividad antiparasitaria con la formación de una especie radical tóxica de semiquinona. Avarona y tiazoavarona fueron evaluados frente a promastigotes y amastigotes de L. infantum, además de promastigotes de L. trópica, mostrando, en el caso de avarona, concentraciones inhibitorias medias (Cl50) entre 20-28 M frente a promastigotes y de 7.6 M en amastigotes de L. infantum. Tiazoavarona mostró valores inferiores a 10 M en los tres modelos estudiados. No obstante, ambos compuestos presentaron un índice de selectividad (IS) 8. Entre las quinonas naturales más estudiadas destaca thymoquinona por su potencial como anti-cáncer y por sus futuras aplicaciones clínicas. También se ha evaluado su actividad anti-Leishmania frente a promastigotes de L. trópica y L. infantum. Particularmente, el núcleo quinona es un fragmento común en muchos fármacos utilizados en la terapia del cáncer por su facilidad para actuar como intercalantes de ADN, alquilantes de biomoléculas, y/o generadores de especies reactivas de oxígeno. Este fragmento es habitual en moléculas de origen natural; sin embargo, en la mayoría de los trabajos en los que se ha determinado la selectividad de compuestos activos, los índices de selectividad (IS) son inferiores a 20 (Bioorg. Med. Chem.2015, 23 (21) , 6930­ 6942; Eur. J. Med. Chem. 2016, 118: 107-120) , criterio insuficiente de acuerdo con lo establecido (Cl50 < 1 jg /m L e IS > 20) para considerar un compuesto anti-leishmanicida omo "hit" (Nat. Rev. Drug Discov. 2006, 5 (11) , 941-955; PLoS Negl. Trop. Dis. 2009, 3 (8) , e440) . RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención soluciona los problemas anteriormente mencionados y está relacionada con el uso del compuesto laurequinona, compuesto de formula (I) Como medicamento, preferiblemente como medicamento de uso humano o veterinario y más preferiblemente para el tratamiento de la leishmaniasis. El compuesto denominado laurequinona (RN 94418-42-5 que corresponde con el compuesto 1 de la figura 1, fue inicialmente descrito en Shizuri et al. (Phytochemistr y (1984) , Vol. 23, N° 11, páginas 2672-3) , dicha divulgación no describe ningún uso médico de dicho compuesto, menos aún su uso en el tratamiento para la Leishmania. Se ha encontrado que la laurequinona tiene la ventaja el que cuando se usa para el tratamiento de la Leishmania se observa una mejor selectividad frente a otros tratamientos convencionales como la Miltefosina. De una muestra de alga roja Laurencia jonhstonii, se ha podido identificar un compuesto, la laurequinona, el cual muestra excelente actividad biológica y frente al tratamiento de la leishmaniasis. Como resultado adicional, se ha encontrado que el sesquiterpeno laurinterol es el compuesto mayoritario producido por el alga L. johnstonii, comprendiendo el 70% del peso total del extracto etanólico. Estudios posteriores han demostrado que el sesquiterpeno laurinterol, debido a su abundancia natural y teniendo en cuenta que la principal limitación para la realización de los estudios pre-clínicos y clínicos es la dificultad de acceso a la fuente natural, es además útil como intermedio en la obtención de laurequinona. La presente invención proporciona así un proceso sintético para la obtención de la laurequinona. Los resultados de la actividad biológica de laurequinona obtenida por etodología sintética son análogos a los del compuesto obtenido de la natural, alga roja Laurencia jonhstonii. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las características y ventajas de la invención se harán más evidentes para los expertos en la materia a partir de la siguiente descripción detallada de una realización preferente de la invención, dada a modo de ejemplo no limitante con referencia a los dibujos anexos, en los que: Figura 1. Estructuras químicas de laurequinona (1) y laurinterol (2) . Figura 2. Efecto de la concentración de laurequinona (1) en la viabilidad de promastigotes de Leishmania amazonensis tras 72 horas de incubación. Figura 3. Efecto de la concentración de laurequinona (1) en la viabilidad de la línea celular de macrófagos de ratón tras 24 horas de incubación. Figura 4. Transformación de laurinterol (2) en laurequinona (1) . REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN El primer aspecto de la invención está relacionado con el uso de la laurequinona como medicamento, preferiblemente para su uso como medicamento humano o veterinario. En otra realización preferida del primer aspecto de la invención está relacionado con laurequinona para su uso en el tratamiento de leishmaniasis, preferiblemente, donde la leishmaniasis es causada por Leishmania spp. Se ha visto que el primer aspecto de la invención presenta las siguientes ventajas: La laurequinona presenta mejores valores de Cl500.43 ± 0.04 g/mL y de índice de selectividad (IS) 22, frente a promastigotes de L. amazonensis que el fármaco de referencia Miltefosina (Cl5029.42 ± 1.25 g/mL / IS=11.14) El segundo aspecto de la invención está relacionado con una composición farmacéutica que comprende laurequinona y al menos un excipiente farmacéutico aceptable. El término "excipiente farmacéutico aceptable" se refiere a un excipiente que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que generalmente no es tóxica y no es biológicamente indeseable e incluye lo que es aceptable para uso veterinario y / o uso farmacéutico humano. En otra realización preferida del segundo aspecto de la invención la composición farmacéutica que comprende laurequinona y al menos un excipiente farmacéutico aceptable, se encuentra en forma sólida, liquida o gel. En otra realización preferida del segundo aspecto de la invención, la composición farmacéutica comprende laurequinona y al menos un excipiente farmacéutico aceptable, donde dicha forma sólida se selecciona de entre comprimido, capsula, gránulos o sólido liofilizado. El tercer aspecto de la invención está relacionado con un método para la preparación de laurequinona donde dicho método comprende por lo menos las etapas de: i) mezclar laurinterol en un ácido orgánico, ii) añadir trióxido de cromo a la mezcla anterior en un rango concentración desde 5% hasta 20% en p/v; seguido de agitación en un rango de temperatura desde 2-10°C, preferiblemente 4°C, para obtener laurequinona; iii) aislar la laurequinona obtenida en la etapa anterior mediante un método seleccionado de la lista que consiste en extracción con un disolvente orgánico, cromatografía, filtración, decantación, evaporación, destilación, centrifugación o cristalización; iv) opcional purificación del producto obtenido en la etapa anterior mediante un proceso seleccionado de la lista que consiste en cromatografía, filtración, decantación, evaporación, destilación, centrifugación o cristalización. En una realización preferida del tercer aspecto de la invención el ácido orgánico de la etapa i) es seleccionado de la lista que consiste en ácido acético, acido fórmico, acido propiónico y ácido butírico. En una realización preferida del cuarto aspecto de la invención el trióxido de cromo de la etapa ii) se encuentra la concentración de trióxido de cromo es desde 8% hasta 15% en p/v; En una realización preferida del tercer aspecto de la invención, el disolvente orgánico de la etapa iii) es seleccionado de la lista que consiste en diclorometano, hexano, acetato de etilo, cloroformo, éter y acetona; preferiblemente el disolvente orgánico se selecciona de diclorometano y acetato de etilo. En una realización preferida del tercer aspecto de la invención, la laurequinona obtenida en la etapa iii) se purifica mediante un proceso seleccionado de la lista que consiste en cromatografía, filtración, decantación, evaporación, destilación, centrifugación o cristalización. El proceso de purificación se puede llevar a cabo con por lo menos un disolvente seleccionado de la lista que consiste en; diclorometano, hexano, acetato de etilo, cloroformo, éter y acetona; preferiblemente el disolvente orgánico se selecciona de diclorometano y acetato de etilo. El método del tercer aspecto de la invención tiene la ventaja que permite obtener la laurequinona con un alto rendimiento y pureza, siendo la pureza superior al 95 %, preferiblemente superior al 98%, más preferiblemente superior al 99%, haciéndola así adecuada para su uso como medicamento. EJEMPLOS Ejemplo 1. Obtención de laurequinona por aislamiento de muestras de Laurencia spp. Se obtiene un extracto etanólico por maceración de muestras secas de L. jonhstonii, seguido de filtración y concentración de dicho extracto en vacío, mediante el uso de un rotavapor a 40 °C. El extracto crudo resultante se purifico mediante cromatografía usando una columna de exclusión molecular Sephadex® LH-20 y utilizando MeOH como eluyente. Se, obtuvieron cinco fracciones: SF1 - SF5. Las fracciones que contienen los productos de interés fueron fraccionadas en columnas de sílica gel y luidas con mezclas de n-hex:AcOEt de polaridad creciente adecuadas a la naturaleza de la muestra. Los compuestos 1, laurequinona (Shizuri et al. 1984) y 2 laurinterol, (Irie et al. 1966) se purificaron mediante HPLC (fase normal, n-hex:AcOEt) . Los resultados muestran que la proporción de laurinterol extraída es muy superior que la de laurequinona, obteniendo 30 veces más laurinterol que laurequinona. A continuación, se muestra la caracterización química de los compuestos, llevada a cabo mediante técnicas espectroscópicas descritas a continuación, NMR, espectroscopia de masas y rotación especifica y corroborada con los datos existentes en la literatura científica. Laurequinona (1) se obtuvo como un aceite amarillo; [a]25D -28.21 (c 0.12, CH2Ch) HRESIMS m/z 229.1231 [M-H]- (calc. C15H17O2, 229.1229) 1H NMR (500 MHz, CDCh) 5 0.45 (2H, m, H-12) , 1.07 (2H, m, H-3) , 1.18 (1H, m, H-5) , 1.18 (3H, s, H-15) , 1.32 (3H, s, H-14) , 1.66 (1H, d, J= 12.4, 8.1 Hz, H-4) , 1.94 (1H, ddt, J= 15.7, 7.8, 4.1 Hz, H-4) , 2.02 (3H, d, J= 1.6 Hz, H-13) , 2.05 (1H, dd, J= 13.4, 8.2 Hz, H-5) , 6.51 (1H, t, J= 1.6 Hz, H-11) , 6.87 (1H, s, H-8) ; ) ; 13C NMR (125 MHz, CDCh) 5 15.0 (C-12) , 15.6 (C-13) , 17.8 (C-15) , 22.9 (C-14) , 23.5 (C-3) , 25.2 (C-4) , 28.7 (C-2) , 35.3 (C-5) , 48.2 (C-1) , 131.7 (C-8) , 135.0 (C-11) , 144.2 (C-9) , 154.2 (C-6) , 188.6 (C-7) , 189.2 (C-10) . Laurinterol (2) se obtuvo como un cristal traslucido; [a]25D +17 (c 0.15, CH2Ch) ; HRESIMS m/z 293.0531 [M-H]- (calc. C15H18O79Br, 293.0541) , 295.0518 [M-H]- (calc. C15H18O81Br, 295.0521) 1H NMR (500 MHz, CDCh ) 5 0.55 (1H, dd, J= 7.9, 4.8 Hz, H-12) , 0.58 (1H, t, J= 4.6 Hz, H-12) , 1.15 (1H, dt, J= 8.1, 4.3 Hz, H-3) , 1.28 (1H, m, H-5) , 1.32 (3H, s, H-13) , 1.41 (3H, s, H-14) , 1.66 (1H, dd, J= 12.3, 8.0 Hz, H-4) , 1.95 (1H, tdd, J= 12.3, 8.1, 4.4, H-4) , 2.09 (1H, dd, J= 13.2, 8.1 Hz, H-5) , 2.29 (3H, s, H-15) , 5.26 (1H, br, s, 7-OH) , 6, 61 (1H, s, H-8) , 7.61 (1H, s, H-11) ; 13C NMR (125 MHz, CDCh) 516.2 (C-12) , 18.6 (C-13) , 22.2 (C-14) , 23.5 (C-15) , 24.4 (C-3) , 25.3 (C-4) , 29.6 (C-2) , 35.9 (C-5) , 114.9 (C-10) , 118.8 (C-8) , 132.3 (C-11) , 134.0 (C-6) , 135.9 (C-9) , 153.3 (C-7) . Ejemplo 2. Evaluación de actividad de laurequinona como fármaco frente a Leishmania spp. La gráfica de la figura 2 representa la concentración de laurequinona (1) (eje x) frente a la fluorescencia emitida por alamarBlue (eje y) tras haber sido incubado durante 72 horas frente a promastigotes de L. amazonensis. La fluorescencia aumentó con la actividad metabólica de los parásitos y, por consiguiente, con el número de parásitos ivos. La Cl50, es decir, la concentración a la que laurequinona (1) inhibe al 50 % de los parásitos fue de 0, 43 ± 0, 04 jg /m L (1, 87 ± 0, 1 nM) . Cuanto menor es el valor de Cl50, menos cantidad de compuesto hace falta para eliminar al parásito. En el caso del fármaco de referencia Miltefosina, el valor de Cl50 fue de 2, 64 ± 0.10 |jg/mL. Por lo tanto. la laurequinona presento un mejor valor de Cl50 que la Miltefosina. Los valores de la citotoxicidad que induce laurequinona (1) en células de ratón se muestran en la figura 3. En dicha figura se representa la concentración de laurequinona (1) (eje x) frente a la fluorescencia emitida por alamarBlue (eje y) , tras haber sido incubado durante 24 horas frente a macrófagos de ratón. La CC50, es decir, la concentración a la que el compuesto mata al 50% de los macrófagos es de 9, 69 ± 0, 3 jg /m L (42, 1 ±1, 3 nM) . En el caso del fármaco de referencia Miltefosina, el valor de CC50 fue de 29.42 ± 1.25 jg/m L. La relación entre la CC50 y la Cl50 se denomina índice de selectividad (IS) . A mayor índice, mayor selectividad frente al parásito. Los datos indican que el IS de laurequinona está en torno a 22 frente al valor del fármaco de referencia, Miltefosina, que mostró un índice equivalente de 11. Por lo que la laurequinona resultó ser más selectivo que el fármaco de referencia, Miltefosina. Por tanto, la laurequinona (1) , teniendo un Cl500.43 ± 0.04 jg /m L frente a promastigotes de L. amazonensis, y un IS de 22, satisface todos los criterios establecidos para ser considerado un hit antileishmania, y mejora los valores del fármaco de referencia. Ejemplo 3. Proceso sintético de obtención de laurequinona a partir de laurinterol En otra realización de la invención el compuesto de interés, laurequinona (1) , se obtiene mediante un proceso de oxidación a partir de laurinterol (2) , como se describe a continuación. A una disolución de 50.0 mg (0.17 mmol) de laurinterol (2) en ácido acético al 80 %, se añadieron unas gotas de una disolución al 10% de trióxido de cromo en ácido acético. La reacción se mantiene en agitación a 4 °C durante 2 horas. Transcurrido ese tiempo, el producto de reacción se extrae con diclorometano tras la adición de agua. Se obtuvo laurequinona (1) mediante purificación mediante el uso de columna de sílica gel, eluyente n-Hex:AcOEt (99:1) . Sus datos espectroscópicos y espectrométricos coinciden con los del producto laurequinona. El rendimiento global de la reacción fue de un 48%. Asimismo, los estudios de actividad anti-Leishmania del compuesto laurequinona (1) obtenido mediante el proceso de síntesis son reproducibles con los del compuesto aislado de la fuente natural.

Publicaciones:
ES2957983 (30/01/2024) - A1 Solicitud de patente con informe sobre el estado de la técnica
Eventos:
En fecha 28/06/2022 se realizó Registro Instancia de Solicitud
En fecha 29/06/2022 se realizó Admisión a Trámite
En fecha 29/06/2022 se realizó 1001P_Comunicación Admisión a Trámite
En fecha 12/07/2022 se realizó Superado examen de oficio
En fecha 29/03/2023 se realizó Realizado IET
En fecha 31/03/2023 se realizó 1109P_Comunicación Traslado del IET
En fecha 30/01/2024 se realizó Publicación Solicitud
En fecha 30/01/2024 se realizó Publicación Folleto Solicitud con IET (A1)
En fecha 01/02/2024 se realizó 3411X_Alta Mandatarios
En fecha 01/02/2024 se realizó Alta mandatario
En fecha 16/04/2024 se realizó PETEX_Petición de examen sustantivo
En fecha 16/05/2024 se realizó Validación petición y/o pago de examen sustantivo conforme
Pagos:
24/06/2022 - Pago Tasas IET