COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO

COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO
  • País: España
  • Fecha de solicitud: 09/12/2016
  • Número solicitud:

    P201631565

  • Número publicación:

    ES2616141

  • Fecha de concesión: 22/05/2018
  • Estado: Concesión
  • Inventores:
    Federico LOPEZ MOYA
    Luis Vicente LOPEZ LLORCA
  • Datos del titular:
    UNIVERSITAT D'ALACANT / UNIVERSIDAD DE ALICANTE
  • Datos del representante:
    Ignacio Temiño Ceniceros
  • Clasificación Internacional de Patentes de la publicación:
    A01N 43/16,A01N 65/12,A01N 65/20,A01P 5/00,A01P 5/00,
  • Clasificación Internacional de Patentes de la publicación:
  • Fecha de vencimiento:

Patente nacional por "COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO"

Este registro ha sido solicitado por

UNIVERSITAT D'ALACANT / UNIVERSIDAD DE ALICANTE

a través del representante

IGNACIO TEMIÑO CENICEROS

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Reivindicaciones:
+ ES-2616141_B1 ES 2 616 141 A1 1. Composición sinérgica de quitosano y un extracto vegetal con actividad nematicida para 5 uso fitosanitario en el tratamiento de infecciones producidas por nematodos. 2. Composición sinérgica para su uso según la reivindicación 1, donde el extracto vegetal nematicida es seleccionado de entre el extracto de tagetes, el extracto de gliricidia o el extracto de artemisa. 3. Composición sinérgica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, 10 donde le quitosano se encuentra en una concentración comprendida entre 5-100 pg/ml. 4. Composición sinérgica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la concentración del extracto vegetal nematicida se encuentra en una dilución 1/100. 5. Composición sinérgica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el quitosano y el extracto vegetal nematicida se aplica de forma conjunta.

+ ES-2616141_A1 1. Composicion sinergica de quitosano y un extracto vegetal con actividad nematicida para 5 uso fitosanitario en el tratamiento de infecciones producidas por nematodos. 2. Composicion sinergica para su uso segun la reivindicacion 1, donde el extracto vegetal nematicida es seleccionado de entre el extracto de tagetes, el extracto de gliricidia o el extracto de artemisa. 3. Composicion sinergica para su uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, 10 donde le quitosano se encuentra en una concentracion comprendida entre 5-100 pg/ml. 4. Composicion sinergica para su uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la concentracion del extracto vegetal nematicida se encuentra en una dilucion 1/100. 5. Composicion sinergica para su uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el quitosano y el extracto vegetal nematicida se aplica de forma conjunta.

Descripciones:
+ ES-2616141_B1 COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO Campo de la invención La presente invención se encuadra en el campo general de la agricultura y en particular, se refiere a composiciones sinérgicas de quitosano con extractos vegetales para el control de nematodos fitopatógenos. Estado de la técnica Los nematodos son uno de los grupos de organismos que causan mayor número de pérdidas económicas en cultivos hortícolas. Las pérdidas de cosecha anuales estimadas debidas a nematodos parásitos de plantas en la producción agrícola mundial se aproxima al 11% y en términos absolutos las pérdidas económicas anuales se calculan en torno a los 80 billones de dólares (Agrios, G.N. 1991. Fitopatología. Editorial Limusa. México. pp. 678-681). Ante la enorme problemática que presentan estos organismos y ante el creciente aumento en las restricciones nacionales y europeas en el uso de compuestos antagonistas para estos organismos, surge la necesidad de desarrollar nuevas moléculas de procedencia natural para disminuir el impacto que causan estos nematodos. Para ello se proponen nuevas moléculas procedentes de extractos vegetales ("botanicals") u originales de fuentes naturales, como es el caso del quitosano. El quitosano es un compuesto de origen natural (derivado de la quitina) que se genera en los organismos vivos por desacetilación enzimática de la quitina. En la actualidad el quitosano es un compuesto con un enorme potencial que ha permitido lograr importantes avances en diferentes áreas de conocimiento, destacando de forma significativa en agricultura. El quitosano es además, un compuesto que presenta un gran potencial, por su actividad antimicrobiana y antifúngica en particular. Este compuesto se caracteriza por desestabilizar las membranas celulares en hongos fitopatógenos (Fusarium oxysporum; Gaeumannomyces graminis; etc) (Palma-Guerrero, J., López-Jimenez, J. A., Pérez-Berná, A.J., Huang, I. C., Jansson, H. B., Salinas, J., Villalaín, J., Read N.D., López Llorca, L.V. (2010). Membrane fluidity determinates sensitivity of filamentous fungi to chitosan. Molecular Microbiology 75 (4) , pp. 1021-1032) es capaz de provocar un aumento significativo de las especies reactivas de oxígeno en hongos expuestos a quitosano, provocando la muerte (Lopez-Moya F, Maria F. Colom-Valiente, Pascual Martinez-Peinado, Jesus E. Martinez- Lopez, Eduardo Puelles, Jose M. Sempere-Ortells and Luis V. Lopez-Llorca. (2015). Carbon and nitrogen limitation increase chitosan antifungal activity in Neurospora crassa and fungal human pathogens. Fungal Biology. 119 (2-3) 154-169). Esta característica ha permitido tener en cuenta el quitosano como producto natural para el tratamiento de enfermedades en agricultura. Surgiendo en los últimos años algunas patentes que se refieren al uso del quitosano en este sentido, como por ejemplo, la patente ES 2521990 describe el uso de quitosano para aumentar la formación de apresorios en Pochonia chlamydosporía y/o aumentar la patogenicidad de Pochonia chlamydosporía sobre huevos de nematodos y para aumentar la colonización de raíces de plantas por Pochonia chlamydosporía sin afectar al desarrollo de las mismas. Y la patente ES 2574588, que describe el uso del quitosano para incrementar la esporulación de hongos entomopatógenos y nematófagos. Sin embargo, a pesar del reciente uso del quitosano en agricultura, aun es necesario proporcionar composiciones naturales a base de este compuesto que sean más efectivas a menor cantidad de principio activo, que tengan una forma de producción y aplicación más fácil y por supuesto, que no sean tóxicas ni para el cultivo en cuestión, ni para el medio ambiente en general. Breve descripción de la invención La presente invención soluciona los problemas descritos en el estado de la técnica ya que proporcionan una composición sinérgica a base de quitosano y extractos vegetales frente a nematodos fitopatógenos que causan graves pérdidas en los cultivos de enorme importancia económica. Así pues, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a una composición sinérgica de quitosano y un extracto vegetal con actividad nematicida (de aquí en adelante, composición de la presente invención) para uso en el tratamiento de infecciones producidas por nematodos. En una realización preferente, los nematodos son del género Meloidogyne, preferentemente, los nematodos son M. javanica y M. incoginata y del género Caenorhabditis, preferentemente C. elegans. En una realización particular, el extracto vegetal con actividad nematicida de la composición de la presente invención es seleccionado de entre el extracto de tagetes (TAC) ) , extracto de gliricidia (GS) , y extracto de artemisa (AJ) ) En una realización en particular, el quitosano se encuentra en una concentración comprendida entre 5-100 pg/ml. En una realización particular, la concentración de quitosano es de al menos 50 pg/ml. En otra realización particular, la concentración de quitosano está comprendida entre 75-100 pg/ml. En una realización en particular, la concentración de los extractos de tagetes (TAC) , gliricidia (ExG) y artemisa (AJ) con actividad nematicida se encuentra en una dilución 1/100. El extracto de tagetes usado en la presente invención se obtuvo mediante percloración con glicol, a partir de plantas enteras de tagete (Tagete erecta) (partes verdes, y pétalos). La metodología para obtener el extracto de artemisa (AJ) y gliricidia (GS) , fue la misma que la utilizada para el extracto de tagetes (TAC). En una realización en particular, el quitosano y el compuesto nematicida de la presente invención se aplican de forma conjunta. Más en particular, los compuestos de la composición sinérgica de la presente invención se aplican de forma simultánea o de forma secuencial. Independientemente del orden de aplicación de cada compuesto. En una realización en particular, los compuestos de la presente invención se aplican en forma líquida. Descripción de las figuras La figura 1 muestra el efecto del quitosano sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicación en líquido. La figura 2 muestra el efecto de extracto de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicación en líquido. La figura 3 muestra el efecto sinérgico del quitosano y el extracto de tagetes (TAC). La figura 4 muestra el efecto del quitosano sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicación en líquido. Evaluación en tubos Eppendorf. La figura 5 muestra el efecto de extracto de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicación en líquido. Evaluación en tubos Eppendorf. La figura 6 muestra la evaluación del efecto nematicida del quitosano sobre nematodos de la especie M. incógnita. La figura 7 muestra la evaluación del efecto nematicida del extracto de gliricidia (GS) (1/100) y el quitosano sobre nematodos de la especie M. incógnita. La figura 8 muestra la evaluación del efecto nematicida del quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 9 muestra la evaluación del efecto nematicida del extracto de tagetes (TAC) (1/100) y el quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 10 muestra la evaluación del efecto nematicida del extracto de tagetes (TAC) (1/1000) y el quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 11 muestra la evaluación del efecto nematicida del extracto de tagetes (TAC) (1/10000) y el quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 12 muestra la eclosión de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano. La figura 13 muestra la eclosión de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano y el extracto de artemisa (AJ) a una dilución 1/100. La figura 14 muestra la eclosión de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano y el extracto de gliricidia (GS) a una dilución 1/1000. La figura 15 muestra la eclosión de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano y el extracto de tagetes (TAC) a una dilución 1/100. La figura 16 muestra la medida de la longitud máxima aérea de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales (Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 17 muestra la medida del peso aéreo de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 18 muestra la medida de la longitud máxima radicular de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas co (AJ) s formulaciones Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN) La figura 19 muestra la medida del peso máximo radicular de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN. La figura 20 muestra los valores de severidad de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales según el índice de agallamiento establecido por Bridge and Page (1980). La figura 21 muestra la cuantificación final del número de tomates por tratamiento (Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 22 muestra el peso total de tomates por tratamiento al final del experimento, Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 23 muestra la evolución temporal en el número de tomates por tratamiento, Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN. La figura 24 muestra la evolución temporal en el preso de tomates por tratamiento (Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). Descripción detallada de la invención Ejemplo 1: Efecto sinérgico del quitosano junto con el compuesto extracto de plantas de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans. Para comprobar el efecto del quitosano (T8) sobre el nematodo C. elegans, se prepararon distintas composiciones de quitosano con una concentración comprendida entre 0-100 gg/ml. Tal y como muestra la figura 1, se observó una disminución del porcentaje de supervivencia del nematodo con la concentración de quitosano a partir de una concentración de 10 gg/ml hasta alcanzar un 32% de reducción de la supervivencia con respecto al control a la mayor concentración de quitosano ensayada. A continuación, se comprobó el efecto del extracto de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicación en líquido. Para ello se prepararon distintas disoluciones del extracto de tagetes (TAC) (diluciones comprendidas entre 0-1/10000). Tras realizar una evaluación de la efectividad del extracto (TAC) sobre C. elegans en aplicación en líquido se determinó que la supervivencia de los nematodos se vio afectada de manera significativa por la presencia del extracto, observándose una disminución de la supervivencia del 40% a una concentración 1/100 del mismo, que se mantuvo de manera significativa con las diluciones del producto, haciéndose menos efectiva a mayor dilución del mismo (FIG. 2). Una vez comprobado el efecto de cada compuesto por separado sobre C. elegans, se procedió a comprobar el efecto que tenían los dos compuestos combinados. Cuando realizamos el análisis de los resultados de la aplicación conjunta del extracto de tagetes (TAC) y el quitosano observamos (FIG.3) un efecto sinérgico del quitosano y el extracto tagetes (TAC). Con el producto tagetes (TAC) altamente diluido (1/100) se observó sinergismo entre el extracto tagetes (TAC) y el quitosano hasta una concentración de 50 pg/ml, a dicha concentración de quitosano, independiente de la dilución del extracto tagetes (TAC) , se observaron reducciones de la supervivencia respecto al control (sin quitosano) de 50% o más en algunos casos. Estos experimentos fueron realizados en placas multipocillo y para confirmar dicho efecto, fueron repetidos en tubos desechables independientes (tipo Eppendorf) , sobre todo para confirmar el efecto del quitosano sobre la supervivencia de C. elegans que se repitió en estas condiciones (FIG. 4). En esta gráfica se observan resultados muy similares a su equivalente en placas multipocillo (FIG. 1). De nuevo se repitió el efecto inhibitorio del extracto tagetes (TAC) sobre la supervivencia de C. elegans (FIG. 5) , observándose una reducción máxima de la supervivencia con el producto de un 20% a una dilución 1/100 del dicho extracto. Ejemplo 2: Efecto del quitosano en combinación con extracto de plantas de gliricidia (Gliricidia (GS) ) en aplicación líquida sobre M. incognita. De nuevo se observó una reducción en el porcentaje de supervivencia de M. incognita debido al quitosano, que varió entre un 10 y 15% a 5 y 100 pg/ml, respectivamente Fig. 6). Cuando el extracto de gliricidia (GS) se utilizó en combinación con el quitosano, se observó, especialmente a la dilución 1/100 (FIG.7) , un elevado efecto sinérgico dependiente de la concentración de quitosano entre los dos compuestos. Se apreciaron reducciones en la supervivencia entre casi un 10% a 5 pg/ml y más de un 20 % a la máxima concentración (100 pg/ml) de este compuesto. Ejemplo 3: Evaluación de la acción nematicida del extracto de tagetes (TAC) en combinación con el quitosano en aplicación líquida sobre M. incognita. Como en los dos controles anteriores sin extracto vegetal, en esta ocasión (FIG 8) , se apreció que el quitosano a 50 y a 100 pg/ml redujo por sí solo la supervivencia de M. incognita, en aproximadamente un 20%. Como en el caso del extracto Gliricidia (GS) , cuando el extracto de tagetes (TAC) se combinó con el quitosano, se observó un efecto sinérgico de los dos compuestos en la reducción de la supervivencia de M. incognita (FIG 9). Las mayores reducciones de la supervivencia, se produjeron a 75 y 100 pg/ml, de entre un 40 y un 50% respectivamente, observándose un claro efecto sinérgico entre el extracto de tagetes (TAC) y el quitosano. De nuevo, al diluir el extracto vegetal, no se apreció el efecto descrito anteriormente (FIG 10 y11). Ejemplo 4: Evaluación de la eclosión de huevos de M. javanica tras estar en contacto con las formulaciones a base de quitosano y los extractos de Artemisa (AJ) , Gliricidia (GS) y extracto de tagetes (TAC) de Atlántica Agrícola. Los ensayos para evaluar la eclosión de huevos de M. javanica se realizaron utilizando "tap water/agua corriente del grifo" ya que resulta el medio idóneo para llevar a cabo este tipo de experimentos (Greenway, 1970). Los experimentos de eclosión se evaluaron a las 24 y 72 horas. La evaluación de la eclosión de los huevos de M. javanica en presencia únicamente de quitosano, se vio sensiblemente aumentada a concentraciones mayores de dicho compuesto, indicando un ligero efecto contraproducente sobre la eclosión de los mismo en su aplicación de manera independiente (FIG.12). Evaluación de Artemisa (AJ) y quitosano sobre la eclosión de huevos de M. javanica. En los ensayos, se ha evaluado el efecto combinado de Artemisa (AJ) y quitosano sobre la eclosión de los huevos de M. javanica. En este estudio se observaron diferencias en los ensayos de eclosión de huevos exponiendo a éstos a concentraciones del extracto (1/100) y concentraciones crecientes de quitosano. Observándose una reducción en la eclosión del 18% en los huevos de M. javanica tratados con Artemisa (AJ) 1/100 y 100 pg/ml de quitosano, con respecto a los huevos tratados con la misma concentración del extracto, pero sin quitosano. Se observó una eclosión inversamente proporcional a la concentración de quitosano en presencia de una dilución del extracto a 1/100 (FIG.13). Diluciones mayores de este extracto atenúan el efecto nematicida de ambos compuestos actuando de manera conjunta Evaluación de Tagetes (TAC) y quitosano sobre la eclosión de huevos de M. javanica. En este caso, se observaron diferencias muy significativas en los ensayos de eclosión de huevos exponiendo a éstos a concentraciones del extracto (1/100) y concentraciones crecientes de quitosano. Se observó una reducción en la eclosión total (inhibición del 100%) en los huevos de M. javanica tratados con extracto de tagetes (TAC) 1/100 y todo el rango de concentraciones de quitosano. Se observó una inhibición de la eclosión total en presencia de una dilución del extracto a 1/100 (FIG. 15). A mayores diluciones de este extracto se observa un ligero aumento de la eclosión cuando se aplican conjuntamente los dos compuestos (extracto y quitosano). La combinación con quitosano de los extractos vegetales Artemisa (AJ) , pero sobretodo Tagetes (TAC) produjo una reducción drástica de la eclosión de los huevos de M. javanica. En el caso de Tagetes (TAC) la combinación de dicho compuesto diluido 1/100 con concentraciones moderadas y altas de quitosano (50-100 pg/ml) inhibió completamente la eclosión de dicho nematodo. En resumen, los ensayos mostraron lo siguiente: - El quitosano en su aplicación en líquido aumentó de manera significativa la mortalidad de nematodos de la especie Caenorhabditis elegans a concentraciones superiores a 10 pg/ml. - El extracto Tagetes (TAC) en su aplicación en líquido sobre poblaciones de Caenorhabditis elegans aumentó la mortalidad de las larvas de esta especie de manera directamente proporcional a la concentración del extracto. - Se observó sinergismo entre el extracto Tagetes (TAC) altamente diluido (1/100) y el quitosano hasta una concentración de 50 pg/ml. - El quitosano aplicado de manera independiente (75-100 pg/ml) presenta cierta actividad nematicida sobre nematodos fitopatógenos de la especie Meloidogyne incognita. - En combinación con Artemisa (AJ) el quitosano redujo la supervivencia respecto al control especialmente en el rango de concentraciones entre y 5-10 pg/ml de quitosano. - La combinación del producto Gliricidia (GS) especialmente a la dilución 1/100, con el quitosano, produjo un elevado efecto sinérgico dependiente de la concentración de quitosano entre los dos compuestos. - El extracto Tagetes (TAC) en combinación con el quitosano presentó un efecto sinérgico sobre la supervivencia de M. incognita, se produjeron a 75 y 100 pg/ml, de entre un 40 y un 50% de mortalidad sobre nematodos, respectivamente. - Se determinó un efecto sinérgico de Artemisa (AJ) y quitosano observándose una reducción en la eclosión del 18% en los huevos de M. javanica tratados con Artemisa (AJ) 1/100 y 100 pg/ml de quitosano. - El extracto Gliricidia (GS) y quitosano actúan de manera sinérgica observándose valores de reducción de la eclosión de huevos de M. javanica del 10% a concentraciones altas de quitosano. - El extracto Tagetes (TAC) y quitosano suprimen (reducción del 100%) la eclosión de huevos de M. javanica en presencia de bajas (50 pg/ml) concentraciones de quitosano. Ejemplo 5: Efecto de la combinación del quitosano con los extractos Artemisa (AJ) , Gliricidia (GS) y Tagetes (TAC) , sobre los nematodos fitopatógenos en cultivos de tomate. Para comprobar el efecto de las combinaciones de la presente invención en cultivos de tomate se diseñó un experimento en dos bloques con distribución aleatoria, en el que se utilizaron 10 plantas por tratamiento en maceteros de 12 litros, utilizando arena de sílice inerte como sustrato. Los tratamientos ensayados fueron los siguientes: - control - nematodos (RKN) : inoculación con J2 de M. javanica, - Extracto de tagetes (TAC) + quitosano (T8) : dilución 1/100 TAC + 100 gg/ml quitosano, - Extracto de artemisa (AJ) + T8 dilución 1/100 (AJ) + 100 gg/ml quitosano, - Oxamilo - Nemagold - T8: 100 gg/ml quitosano. Se realizaron tres aplicaciones de los extractos en combinación con quitosano. Las plantas se regaron según sus necesidades y se realizó fertilización con NPK (10-52-20). Una vez alcanzada la madurez del cultivo (4 meses) , se procedió al desmontaje del experimento y procesado de las plantas para la evaluación del efecto de las formulaciones experimentales sobre el desarrollo del tomate, así como sobre las poblaciones del nematodo. Se separaron la parte aérea y radicular de las plantas y se midieron los siguientes parámetros: peso fresco aéreo, longitud máxima aérea, peso fresco radicular y longitud máxima radicular. Una vez procesada la parte aérea se retiraron los tomates presentes en las plantas con el fin de obtener una cuantificación del efecto de los tratamientos sobre la producción. Adicionalmente, se procedió al enjuague y lavado de las raíces con el fin de obtener dicha estructura de la planta lo más limpia posible y así poder cuantificar su peso y longitud. Del 5 mismo modo, se procedió a la evaluación de la severidad de la infección causada por los nematodos agalladores (M. javanica) siguiendo el índice de agallamiento propuesto por Bridge y Page en 1980. Con el fin de evitar el desprendimiento de las masas de huevos de la raíz, éstas se lavaron en un recipiente con agua evitando el contacto directo de un amplio caudal de agua que pudiera propiciar la pérdida de dichas masas. La severidad de la infección causada por los nematodos agalladores en raíces de tomate se estimó a partir de la cuantificación de huevos provenientes de masas de huevos. Con el fin de evaluar la evolución de la infección causada por nematodos agalladores se procedió a la cuantificación y recuento de huevos de nematodos de todas las raíces de cada uno de los tratamientos experimentales. Para dicha cuantificación se fragmentaron las raíces en secciones, éstas se dispusieron en hipoclorito sódico (1%) durante 5 min, transcurrido este tiempo los fragmentos de raíz, así como la suspensión de huevos se pasaron por tamices de diferente tamaño de malla (100, 25 y 10 micras) para retirar restos de raíz y del sustrato de crecimiento vegetal. Las muestras se recogieron de los tamices con 100 ml aproximadamente de agua destilada. Para cuantificar el número de huevos por raíz y para cada uno de los tratamientos se agitaron las muestras para conseguir su homogenización. A continuación, se tomaron submuestras de cada una de las suspensiones de huevos provenientes de raíces independientes. Se contaron 3 alícuotas de cada una de las muestras con el fin de obtener un número de mediciones suficiente que permitiera obtener valores de cuantificación robustos y que permitiera disminuir la variabilidad intra- e intermuestral. Tras la realización y evaluación del efecto de los extractos experimentales sobre plantas de tomate se observó que ninguno de los extractos presentaba efectos perjudiciales para el desarrollo de las plantas, indicando la idoneidad de su uso en condiciones de invernadero. Se observó como todas las plantas inoculadas con nematodos (Control+Nematodos (RKN) ; extracto de artemisa (AJ) +T8+RKN; extracto de tagetes (TAC) +T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN) presentaban mayor porte que las plantas sin infectar con nematodos (FIG.16). Se observó en los resultados como las plantas tratadas con quitosano únicamente para el control de nematodos, fueron las que alcanzaron una taya superior (> 2, 5 metros). Cuando evaluamos otro parámetro del desarrollo cómo fue el peso de la parte aérea se observó que las plantas tratadas con oxamyl y quitosano (T8) , presentaron un peso mayor que las plantas control (sin nematodos; FIG.17). Estos resultados confirmaron que la aplicación de ambos compuestos propicia un mayor desarrollo de la parte aérea. Observamos igualmente que ninguno de los extractos afectó al desarrollo de la raíz. Cabe destacar que las plantas tratadas con Nemagold son las que presentaron una longitud mayor, siendo dicha longitud, mayor que las del control (sin nematodos) (FIG.18). Adicionalmente, cabe señalar que teniendo en cuenta el peso fresco radicular, se destaca el oxamilo como el compuesto que ha propiciado una mayor cantidad de raíz por planta (FIG. 19). Este hecho sería debido a la mayor efectividad que muestra este compuesto para controlar nematodos y por tanto disminuir la afección de la misma por los nematodos. Todos los extractos presentaron mayores longitudes de raíz que el control, esto indicaría una buena efectividad contra los nematodos. Evaluación del efecto de los tratamientos experimentales sobre la evolución de nematodos agalladores en plantas de tomate en condiciones de invernadero. Tras realizar una evaluación de las raíces de tomate infectadas con nematodos y tratadas con las formulaciones experimentales, observamos como las plantas tratadas con el nematicida químico oxamyl presenta una menor infección por los nematodos. Está probada la alta efectividad de este compuesto para el control de nematodos, pero no es aconsejable su uso debido a su elevada toxicidad en mamíferos. A continuación, cabe destacar el efecto de la combinación del extracto artemisa (AJ) y el quitosano, se observa un índice de agallamiento un punto inferior que el control (FIG.20) , indicando una efectividad alta para el control de nematodos. A continuación, destaca el efecto que tiene la combinación del extracto de tagetes (TAC) y quitosano, obteniendo una reducción en la afección por nematodos de 0.4 puntos respecto a las plantas infectadas por nematodos y sin tratar con ningún extracto experimental (Control+RKN). Tras la cuantificación de nematodos en las raíces de tomate post aplicación de los diferentes productos experimentales se observó como el tratamiento que presentó mayor efectividad fue el oxamyl. Se observó cómo este compuesto redujo en más del 50% la presencia de huevos de nematodos en las raíces de dicho tratamiento. Obteniendo valores de cuantificación de huevos de 127, 879±8, 957 huevos en las plantas tratadas con oxamyl respecto al control (inoculado sólo con nematodos y sin aplicación de ningún tratamiento) que alcanzó valores de 244, 932±17, 500 huevos por planta. Cabe destacar el efecto de los tratamientos artemisa (AJ) +T8 y tagetes (TAC) +T8 los cuales propiciaron una ligera reducción del número de huevos de nematodos por planta, alcanzando valores de 223, 284±60, 699 y 240, 938±11, 138 huevos por raíz. Estos resultados indicaron el efecto que presentan estos compuestos para el control de nematodos en las dosis aplicadas. Evaluación de la evolución en la producción de tomates en plantas infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales. Tras la cuantificación de la producción de tomates en las plantas tratadas con los diferentes productos experimentales se observó una mayor producción total de tomates en las plantas tratadas con los extractos experimentales artemisa (AJ) +T8, tagetes (TAC) +T8 y T8 (FIG. 21). Alcanzando valores de obtención de tomates notablemente superiores al control (sin infectar por nematodos). Estos resultados indicaron una elevada compatibilidad de dichos extractos experimentales para el aumento de la producción y rendimiento de los cultivos. Adicionalmente, se observó que las plantas tratadas con artemisa (AJ) +T8 y tagetes (TAC) +T8 presentaron un mayor peso total de tomates que el resto de tratamientos (FIG. 22) , este hecho propiciaría el uso de estas formulaciones experimentales para mejorar y optimizar la fructificación en el cultivo de tomate. A su vez se observó en un estudio temporal como se produjo un inicio mayoritario en la producción de tomates a partir del tercer mes de duración del cultivo para todos los tratamientos ensayados. Se obtuvo una producción más temprana, aunque no muy abundante en los tratamientos Control, artemisa (AJ) +T8 y tagetes (TAC) +T8 (FIG. 23). Cabe destacar que, aunque la producción de tomate se inició 4 semanas más tarde, se obtuvo un rendimiento en la producción de tomates muy significativo en el tratamiento sólo con T8 (quitosano) alcanzando valores de producción en cuanto al número de tomates superiores al control, indicando que este compuesto puede actuar como inductor tardío de la fructificación. En cuanto a la evolución en peso de los tomates recolectados cabe destacar que los extractos tagetes (TAC) +T8 así como artemisa (AJ) +T8, presentaron mayor peso de tomates desde el principio del experimento alcanzando valores incluso superiores a los del control. Estos resultados indicaron que estas combinaciones fueron efectivas no sólo para el manejo y control de nematodos, sino que también para el aumento del rendimiento y productividad del cultivo de tomate (FIG.24). El experimento de invernadero presentó una evolución satisfactoria desde el momento del trasplante hasta la completa madurez del cultivo, con las siguientes conclusiones: Los extractos vegetales experimentales en combinación con el quitosano no presentaron ninguna toxicidad en plantas de tomate adultas. Todas las plantas infectadas con nematodos fitopatógenos y tratadas con las diferentes combinaciones experimentales presentaron un aumento en el porte de las mismas viéndose traducido en un aumento en parámetros con el peso fresco aéreo y la longitud máxima radicular. Las plantas infectadas con nematodos agalladores y tratadas con el producto de Atlántica Agrícola Nemagold presentaron raíces de mayor longitud respecto al control. Tras aplicar los criterios determinados por el Índice de agallamiento de Bridge and Page se determinó que el oxamilo fue el compuesto con mayor actividad nematicida de todos los evaluados. El extracto de Aartemisa (AJ) +T8 fue la formulación experimental con mejores resultados mostrando valores de afección por nematodos, según mencionado índice, 1 punto menores 10 que el control. Las plantas tratadas con el nematicida oxamilo presentaron menor número de huevos de nematodos en sus raíces que el resto de formulaciones experimentales. Los extractos de artemisa (AJ) y de tagetes (TAC) en combinación con el quitosano (T8) favorecieron una reducción de la proliferación de nematodos fitopatógenos en la raíz 15 disminuyendo el número de huevos presentes en la misma respecto al control. Las formulaciones experimentales tagetes (TAC) +T8, artemisa (AJ) +T8 y T8 favorecieron la fructificación de tomates aumentando el número de frutos recolectados a lo largo del experimento (4 meses). Las formulaciones de extracto de agetes (TAC) y extracto de artemisa (AJ) en combinación 20 con el quitosano (T8) favorecieron el desarrollo de tomates alcanzando valores de peso superiores al control. Los extractos de artemisa (AJ) +T8 y de tagetes (TAC) +T8 pese a la infección con nematodos obtienen una producción de frutos similar a la observada en el control.

+ ES-2616141_A1 COMPOSICIONES SINERGICAS DE QUITOSANO Campo de la invencion La presente invencion se encuadra en el campo general de la agricultura y en particular, se refiere a composiciones sinergicas de quitosano con extractos vegetales para el control de nematodos fitopatogenos. Estado de la tecnica Los nematodos son uno de los grupos de organismos que causan mayor numero de perdidas economicas en cultivos hortfcolas. Las perdidas de cosecha anuales estimadas debidas a nematodos parasitos de plantas en la produccion agrfcola mundial se aproxima al 11% y en terminos absolutos las perdidas economicas anuales se calculan en torno a los 80 billones de dolares (Agrios, G.N. 1991. Fitopatologfa. Editorial Limusa. Mexico. pp. 678-681). Ante la enorme problematica que presentan estos organismos y ante el creciente aumento en las restricciones nacionales y europeas en el uso de compuestos antagonistas para estos organismos, surge la necesidad de desarrollar nuevas moleculas de procedencia natural para disminuir el impacto que causan estos nematodos. Para ello se proponen nuevas moleculas procedentes de extractos vegetales ("botanicals") u originales de fuentes naturales, como es el caso del quitosano. El quitosano es un compuesto de origen natural (derivado de la quitina) que se genera en los organismos vivos por desacetilacion enzimatica de la quitina. En la actualidad el quitosano es un compuesto con un enorme potencial que ha permitido lograr importantes avances en diferentes areas de conocimiento, destacando de forma significativa en agricultura. El quitosano es ademas, un compuesto que presenta un gran potencial, por su actividad antimicrobiana y antifungica en particular. Este compuesto se caracteriza por desestabilizar las membranas celulares en hongos fitopatogenos (Fusarium oxysporum; Gaeumannomyces graminis; etc) (Palma-Guerrero, J., Lopez-Jimenez, J. A., Perez-Berna, A.J., Huang, I. C., Jansson, H. B., Salinas, J., Villalafn, J., Read N.D., Lopez Llorca, L.V. (2010). Membrane fluidity determinates sensitivity of filamentous fungi to chitosan. Molecular Microbiology 75 (4) , pp. 1021-1032) es capaz de provocar un aumento significativo de las especies reactivas de oxígeno en hongos expuestos a quitosano, provocando la muerte (Lopez-Moya F, Maria F. Colom-Valiente, Pascual Martinez-Peinado, Jesus E. Martinez- Lopez, Eduardo Puelles, Jose M. Sempere-Ortells and Luis V. Lopez-Llorca. (2015). Carbon and nitrogen limitation increase chitosan antifungal activity in Neurospora crassa and fungal human pathogens. Fungal Biology. 119 (2-3) 154-169). Esta caracterfstica ha permitido tener en cuenta el quitosano como producto natural para el tratamiento de enfermedades en agricultura. Surgiendo en los ultimos anos algunas patentes que se refieren al uso del quitosano en este sentido, como por ejemplo, la patente ES 2521990 describe el uso de quitosano para aumentar la formacion de apresorios en Pochonia chlamydosporia y/o aumentar la patogenicidad de Pochonia chlamydosporia sobre huevos de nematodos y para aumentar la colonizacion de rafces de plantas por Pochonia chlamydosporia sin afectar al desarrollo de las mismas. Y la patente ES 2574588, que describe el uso del quitosano para incrementar la esporulacion de hongos entomopatogenos y nematofagos. Sin embargo, a pesar del reciente uso del quitosano en agricultura, aun es necesario proporcionar composiciones naturales a base de este compuesto que sean mas efectivas a menor cantidad de principio activo, que tengan una forma de produccion y aplicacion mas facil y por supuesto, que no sean toxicas ni para el cultivo en cuestion, ni para el medio ambiente en general. Breve descripcion de la invencion La presente invencion soluciona los problemas descritos en el estado de la tecnica ya que proporcionan una composicion sinergica a base de quitosano y extractos vegetales frente a nematodos fitopatogenos que causan graves perdidas en los cultivos de enorme importancia economica. Asf pues, en un primer aspecto, la presente invencion se refiere a una composicion sinergica de quitosano y un extracto vegetal con actividad nematicida (de aquí en adelante, composicion de la presente invencion) para uso en el tratamiento de infecciones producidas por nematodos. En una realizacion preferente, los nematodos son del genero Meloidogyne, preferentemente, los nematodos son M. javanica y M. incoginata y del genero Caenorhabditis, preferentemente C. elegans. En una realizacion particular, el extracto vegetal con actividad nematicida de la composicion de la presente invencion es seleccionado de entre el extracto de tagetes (TAC) ) , extracto de gliricidia (GS) , y extracto de artemisa (AJ) ) En una realizacion en particular, el quitosano se encuentra en una concentracion comprendida entre 5-100 pg/ml. En una realizacion particular, la concentracion de quitosano es de al menos 50 pg/ml. En otra realizacion particular, la concentracion de quitosano esta comprendida entre 75-100 pg/ml. En una realizacion en particular, la concentracion de los extractos de tagetes (TAC) , gliricidia (ExG) y artemisa (AJ) con actividad nematicida se encuentra en una dilucion 1/100. El extracto de tagetes usado en la presente invencion se obtuvo mediante percloracion con glicol, a partir de plantas enteras de tagete (Tagete erecta) (partes verdes, y petalos). La metodologfa para obtener el extracto de artemisa (AJ) y gliricidia (GS) , fue la misma que la utilizada para el extracto de tagetes (TAC). En una realizacion en particular, el quitosano y el compuesto nematicida de la presente invencion se aplican de forma conjunta. Mas en particular, los compuestos de la composicion sinergica de la presente invencion se aplican de forma simultanea o de forma secuencial. Independientemente del orden de aplicacion de cada compuesto. En una realizacion en particular, los compuestos de la presente invencion se aplican en forma líquida. Descripcion de las figuras La figura 1 muestra el efecto del quitosano sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicacion en lfquido. La figura 2 muestra el efecto de extracto de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicacion en lfquido. La figura 3 muestra el efecto sinergico del quitosano y el extracto de tagetes (TAC). La figura 4 muestra el efecto del quitosano sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicacion en lfquido. Evaluacion en tubos Eppendorf. La figura 5 muestra el efecto de extracto de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicacion en lfquido. Evaluacion en tubos Eppendorf. La figura 6 muestra la evaluacion del efecto nematicida del quitosano sobre nematodos de la especie M. incognita. La figura 7 muestra la evaluacion del efecto nematicida del extracto de gliricidia (GS) (1/100) y el quitosano sobre nematodos de la especie M. incognita. La figura 8 muestra la evaluacion del efecto nematicida del quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 9 muestra la evaluacion del efecto nematicida del extracto de tagetes (TAC) (1/100) y el quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 10 muestra la evaluacion del efecto nematicida del extracto de tagetes (TAC) (1/1000) y el quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 11 muestra la evaluacion del efecto nematicida del extracto de tagetes (TAC) (1/10000) y el quitosano sobre nematodos de la especie M.incognita. La figura 12 muestra la eclosion de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano. La figura 13 muestra la eclosion de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano y el extracto de artemisa (AJ) a una dilucion 1/100. La figura 14 muestra la eclosion de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano y el extracto de gliricidia (GS) a una dilucion 1/1000. La figura 15 muestra la eclosion de huevos de M.javanica en contacto durante 3 días con quitosano y el extracto de tagetes (TAC) a una dilucion 1/100. La figura 16 muestra la medida de la longitud maxima aerea de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales (Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 17 muestra la medida del peso aereo de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 18 muestra la medida de la longitud maxima radicular de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas co (AJ) s formulaciones Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN) La figura 19 muestra la medida del peso maximo radicular de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN. La figura 20 muestra los valores de severidad de plantas de tomate infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales segun el índice de agallamiento establecido por Bridge and Page (1980). La figura 21 muestra la cuantificacion final del numero de tomates por tratamiento (Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 22 muestra el peso total de tomates por tratamiento al final del experimento, Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). La figura 23 muestra la evolucion temporal en el numero de tomates por tratamiento, Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN. La figura 24 muestra la evolucion temporal en el preso de tomates por tratamiento (Control+Nematodos (RKN) ; (AJ) +T8+RKN; ExT+T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN). Descripcion detallada de la invencion Ejemplo 1: Efecto sinergico del quitosano junto con el compuesto extracto de plantas de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans. Para comprobar el efecto del quitosano (T8) sobre el nematodo C. elegans, se prepararon distintas composiciones de quitosano con una concentracion comprendida entre 0-100 pg/ml. Tal y como muestra la figura 1, se observo una disminucion del porcentaje de supervivencia del nematodo con la concentracion de quitosano a partir de una concentracion de 10 pg/ml hasta alcanzar un 32% de reduccion de la supervivencia con respecto al control a la mayor concentracion de quitosano ensayada. A continuacion, se comprobo el efecto del extracto de tagetes (TAC) sobre la mortalidad de C. elegans en su aplicacion en lfquido. Para ello se prepararon distintas disoluciones del extracto de tagetes (TAC) (diluciones comprendidas entre 0-1/10000). Tras realizar una evaluacion de la efectividad del extracto (TAC) sobre C. elegans en aplicacion en lfquido se determino que la supervivencia de los nematodos se vio afectada de manera significativa por la presencia del extracto, observandose una disminucion de la supervivencia del 40% a una concentracion 1/100 del mismo, que se mantuvo de manera significativa con las diluciones del producto, haciendose menos efectiva a mayor dilucion del mismo (FIG. 2). Una vez comprobado el efecto de cada compuesto por separado sobre C. elegans, se procedio a comprobar el efecto que tenfan los dos compuestos combinados. Cuando realizamos el analisis de los resultados de la aplicacion conjunta del extracto de tagetes (TAC) y el quitosano observamos (FIG.3) un efecto sinergico del quitosano y el extracto tagetes (TAC). Con el producto tagetes (TAC) altamente diluido (1/100) se observo sinergismo entre el extracto tagetes (TAC) y el quitosano hasta una concentracion de 50 pg/ml, a dicha concentracion de quitosano, independiente de la dilucion del extracto tagetes (TAC) , se observaron reducciones de la supervivencia respecto al control (sin quitosano) de 50% o mas en algunos casos. Estos experimentos fueron realizados en placas multipocillo y para confirmar dicho efecto, fueron repetidos en tubos desechables independientes (tipo Eppendorf) , sobre todo para confirmar el efecto del quitosano sobre la supervivencia de C. elegans que se repitio en estas condiciones (FIG. 4). En esta grafica se observan resultados muy similares a su equivalente en placas multipocillo (FIG. 1). De nuevo se repitio el efecto inhibitorio del extracto tagetes (TAC) sobre la supervivencia de C. elegans (FIG. 5) , observandose una reduccion maxima de la supervivencia con el producto de un 20% a una dilucion 1/100 del dicho extracto. Ejemplo 2: Efecto del quitosano en combinacion con extracto de plantas de gliricidia (Gliricidia (GS) ) en aplicacion líquida sobre M. incognita. De nuevo se observo una reduccion en el porcentaje de supervivencia de M. incognita debido al quitosano, que vario entre un 10 y 15% a 5 y 100 pg/ml, respectivamente Fig. 6). Cuando el extracto de gliricidia (GS) se utilizo en combinacion con el quitosano, se observo, especialmente a la dilucion 1/100 (FIG.7) , un elevado efecto sinergico dependiente de la concentracion de quitosano entre los dos compuestos. Se apreciaron reducciones en la supervivencia entre casi un 10% a 5 pg/ml y mas de un 20 % a la maxima concentracion (100 pg/ml) de este compuesto. Ejemplo 3: Evaluacion de la accion nematicida del extracto de tagetes (TAC) en combinacion con el quitosano en aplicacion líquida sobre M. incognita. Como en los dos controles anteriores sin extracto vegetal, en esta ocasion (FIG 8) , se aprecio que el quitosano a 50 y a 100 pg/ml redujo por si solo la supervivencia de M. incognita, en aproximadamente un 20%. Como en el caso del extracto Gliricidia (GS) , cuando el extracto de tagetes (TAC) se combino con el quitosano, se observo un efecto sinergico de los dos compuestos en la reduccion de la supervivencia de M. incognita (FIG 9). Las mayores reducciones de la supervivencia, se produjeron a 75 y 100 pg/ml, de entre un 40 y un 50% respectivamente, observandose un claro efecto sinergico entre el extracto de tagetes (TAC) y el quitosano. De nuevo, al diluir el extracto vegetal, no se aprecio el efecto descrito anteriormente (FIG 10 y11). Ejemplo 4: Evaluation de la eclosion de huevos de M. javanica tras estar en contacto con las formulaciones a base de quitosano y los extractos de Artemisa (AJ) , Gliricidia (GS) y extracto de tagetes (TAC) de Atlantica Agricola. Los ensayos para evaluar la eclosion de huevos de M. javanica se realizaron utilizando "tap water/agua corriente del grifo" ya que resulta el medio idoneo para llevar a cabo este tipo de experimentos (Greenway, 1970). Los experimentos de eclosion se evaluaron a las 24 y 72 horas. La evaluacion de la eclosion de los huevos de M. javanica en presencia unicamente de quitosano, se vio sensiblemente aumentada a concentraciones mayores de dicho compuesto, indicando un ligero efecto contraproducente sobre la eclosion de los mismo en su aplicacion de manera independiente (FIG.12). Evaluacion de Artemisa (AJ) y quitosano sobre la eclosion de huevos de M. javanica. En los ensayos, se ha evaluado el efecto combinado de Artemisa (AJ) y quitosano sobre la eclosion de los huevos de M. javanica. En este estudio se observaron diferencias en los ensayos de eclosion de huevos exponiendo a estos a concentraciones del extracto (1/100) y concentraciones crecientes de quitosano. Observandose una reduccion en la eclosion del 18% en los huevos de M. javanica tratados con Artemisa (AJ) 1/100 y 100 pg/ml de quitosano, con respecto a los huevos tratados con la misma concentracion del extracto, pero sin quitosano. Se observo una eclosion inversamente proporcional a la concentracion de quitosano en presencia de una dilucion del extracto a 1/100 (FIG.13). Diluciones mayores de este extracto atenuan el efecto nematicida de ambos compuestos actuando de manera conjunta Evaluacion de Tagetes (TAC) y quitosano sobre la eclosion de huevos de M. javanica. En este caso, se observaron diferencias muy significativas en los ensayos de eclosion de huevos exponiendo a estos a concentraciones del extracto (1/100) y concentraciones crecientes de quitosano. Se observo una reduccion en la eclosion total (inhibicion del 100%) en los huevos de M. javanica tratados con extracto de tagetes (TAC) 1/100 y todo el rango de concentraciones de quitosano. Se observo una inhibicion de la eclosion total en presencia de una dilucion del extracto a 1/100 (FIG. 15). A mayores diluciones de este extracto se observa un ligero aumento de la eclosion cuando se aplican conjuntamente los dos compuestos (extracto y quitosano). La combinacion con quitosano de los extractos vegetales Artemisa (AJ) , pero sobretodo Tagetes (TAC) produjo una reduccion drastica de la eclosion de los huevos de M. javanica. En el caso de Tagetes (TAC) la combinacion de dicho compuesto diluido 1/100 con concentraciones moderadas y altas de quitosano (50-100 pg/ml) inhibio completamente la eclosion de dicho nematodo. En resumen, los ensayos mostraron lo siguiente: - El quitosano en su aplicacion en lfquido aumento de manera significativa la mortalidad de nematodos de la especie Caenorhabditis elegans a concentraciones superiores a 10 pg/ml. - El extracto Tagetes (TAC) en su aplicacion en lfquido sobre poblaciones de Caenorhabditis elegans aumento la mortalidad de las larvas de esta especie de manera directamente proporcional a la concentracion del extracto. - Se observo sinergismo entre el extracto Tagetes (TAC) altamente diluido (1/100) y el quitosano hasta una concentracion de 50 pg/ml. - El quitosano aplicado de manera independiente (75-100 pg/ml) presenta cierta actividad nematicida sobre nematodos fitopatogenos de la especie Meloidogyne incognita. - En combinacion con Artemisa (AJ) el quitosano redujo la supervivencia respecto al control especialmente en el rango de concentraciones entre y 5-10 pg/ml de quitosano. - La combinacion del producto Gliricidia (GS) especialmente a la dilucion 1/100, con el quitosano, produjo un elevado efecto sinergico dependiente de la concentracion de quitosano entre los dos compuestos. - El extracto Tagetes (TAC) en combinacion con el quitosano presento un efecto sinergico sobre la supervivencia de M. incognita, se produjeron a 75 y 100 pg/ml, de entre un 40 y un 50% de mortalidad sobre nematodos, respectivamente. - Se determino un efecto sinergico de Artemisa (AJ) y quitosano observandose una reduccion en la eclosion del 18% en los huevos de M. javanica tratados con Artemisa (AJ) 1/100 y 100 pg/ml de quitosano. - El extracto Gliricidia (GS) y quitosano actuan de manera sinergica observandose valores de reduccion de la eclosion de huevos de M. javanica del 10% a concentraciones altas de quitosano. - El extracto Tagetes (TAC) y quitosano suprimen (reduccion del 100%) la eclosion de huevos de M. javanica en presencia de bajas (50 pg/ml) concentraciones de quitosano. Ejemplo 5: Efecto de la combinacion del quitosano con los extractos Artemisa (AJ) , Gliricidia (GS) y Tagetes (TAC) , sobre los nematodos fitopatogenos en cultivos de tomate. Para comprobar el efecto de las combinaciones de la presente invencion en cultivos de tomate se diseno un experimento en dos bloques con distribucion aleatoria, en el que se utilizaron 10 plantas por tratamiento en maceteros de 12 litros, utilizando arena de sflice inerte como sustrato. Los tratamientos ensayados fueron los siguientes: - control - nematodos (RKN) : inoculacion con J2 de M. javanica, - Extracto de tagetes (TAC) + quitosano (T8) : dilucion 1/100 TAC + 100 gg/ml quitosano, - Extracto de artemisa (AJ) + T8 dilucion 1/100 (AJ) + 100 gg/ml quitosano, - Oxamilo - Nemagold - T8: 100 gg/ml quitosano. Se realizaron tres aplicaciones de los extractos en combinacion con quitosano. Las plantas se regaron segun sus necesidades y se realizo fertilizacion con NPK (10-52-20). Una vez alcanzada la madurez del cultivo (4 meses) , se procedio al desmontaje del experimento y procesado de las plantas para la evaluacion del efecto de las formulaciones experimentales sobre el desarrollo del tomate, así como sobre las poblaciones del nematodo. Se separaron la parte aerea y radicular de las plantas y se midieron los siguientes parametros: peso fresco aereo, longitud maxima aerea, peso fresco radicular y longitud maxima radicular. Una vez procesada la parte aerea se retiraron los tomates presentes en las plantas con el fin de obtener una cuantificacion del efecto de los tratamientos sobre la produccion. Adicionalmente, se procedio al enjuague y lavado de las rafces con el fin de obtener dicha estructura de la planta lo mas limpia posible y así poder cuantificar su peso y longitud. Del 5 mismo modo, se procedio a la evaluacion de la severidad de la infeccion causada por los nematodos agalladores (M. javanica) siguiendo el mdice de agallamiento propuesto por Bridge y Page en 1980. Con el fin de evitar el desprendimiento de las masas de huevos de la rafz, estas se lavaron en un recipiente con agua evitando el contacto directo de un amplio caudal de agua que pudiera propiciar la perdida de dichas masas. La severidad de la infeccion causada por los nematodos agalladores en rafces de tomate se estimo a partir de la cuantificacion de huevos provenientes de masas de huevos. Con el fin de evaluar la evolucion de la infeccion causada por nematodos agalladores se procedio a la cuantificacion y recuento de huevos de nematodos de todas las rafces de cada uno de los tratamientos experimentales. Para dicha cuantificacion se fragmentaron las rafces en secciones, estas se dispusieron en hipoclorito sodico (1%) durante 5 min, transcurrido este tiempo los fragmentos de rafz, así como la suspension de huevos se pasaron por tamices de diferente tamano de malla (100, 25 y 10 micras) para retirar restos de rafz y del sustrato de crecimiento vegetal. Las muestras se recogieron de los tamices con 100 ml aproximadamente de agua destilada. Para cuantificar el numero de huevos por rafz y para cada uno de los tratamientos se agitaron las muestras para conseguir su homogenizacion. A continuacion, se tomaron submuestras de cada una de las suspensiones de huevos provenientes de rafces independientes. Se contaron 3 alfcuotas de cada una de las muestras con el fin de obtener un numero de mediciones suficiente que permitiera obtener valores de cuantificacion robustos y que permitiera disminuir la variabilidad intra- e intermuestral. Tras la realizacion y evaluacion del efecto de los extractos experimentales sobre plantas de tomate se observo que ninguno de los extractos presentaba efectos perjudiciales para el desarrollo de las plantas, indicando la idoneidad de su uso en condiciones de invernadero. Se observo como todas las plantas inoculadas con nematodos (Control+Nematodos (RKN) ; extracto de artemisa (AJ) +T8+RKN; extracto de tagetes (TAC) +T8+RKN; Nemagold+RKN; Oxamyl+RKN y T8+RKN) presentaban mayor porte que las plantas sin infectar con nematodos (FIG.16). Se observo en los resultados como las plantas tratadas con quitosano unicamente para el control de nematodos, fueron las que alcanzaron una taya superior (> 2, 5 metros). Cuando evaluamos otro parametro del desarrollo como fue el peso de la parte aerea se observo que las plantas tratadas con oxamyl y quitosano (T8) , presentaron un peso mayor que las plantas control (sin nematodos; FIG.17). Estos resultados confirmaron que la aplicacion de ambos compuestos propicia un mayor desarrollo de la parte aerea. Observamos igualmente que ninguno de los extractos afecto al desarrollo de la rafz. Cabe destacar que las plantas tratadas con Nemagold son las que presentaron una longitud mayor, siendo dicha longitud, mayor que las del control (sin nematodos) (FIG. 18). Adicionalmente, cabe senalar que teniendo en cuenta el peso fresco radicular, se destaca el oxamilo como el compuesto que ha propiciado una mayor cantidad de rafz por planta (FIG. 19). Este hecho serfa debido a la mayor efectividad que muestra este compuesto para controlar nematodos y por tanto disminuir la afeccion de la misma por los nematodos. Todos los extractos presentaron mayores longitudes de rafz que el control, esto indicarfa una buena efectividad contra los nematodos. Evaluacion del efecto de los tratamientos experimentales sobre la evolucion de nematodos agalladores en plantas de tomate en condiciones de invernadero. Tras realizar una evaluacion de las rafces de tomate infectadas con nematodos y tratadas con las formulaciones experimentales, observamos como las plantas tratadas con el nematicida químico oxamyl presenta una menor infeccion por los nematodos. Esta probada la alta efectividad de este compuesto para el control de nematodos, pero no es aconsejable su uso debido a su elevada toxicidad en mamfferos. A continuacion, cabe destacar el efecto de la combinacion del extracto artemisa (AJ) y el quitosano, se observa un índice de agallamiento un punto inferior que el control (FIG.20) , indicando una efectividad alta para el control de nematodos. A continuacion, destaca el efecto que tiene la combinacion del extracto de tagetes (TAC) y quitosano, obteniendo una reduccion en la afeccion por nematodos de 0.4 puntos respecto a las plantas infectadas por nematodos y sin tratar con ningun extracto experimental (Control+RKN). Tras la cuantificacion de nematodos en las rafces de tomate post aplicacion de los diferentes productos experimentales se observo como el tratamiento que presento mayor efectividad fue el oxamyl. Se observo como este compuesto redujo en mas del 50% la presencia de huevos de nematodos en las rafces de dicho tratamiento. Obteniendo valores de cuantificacion de huevos de 127, 879±8, 957 huevos en las plantas tratadas con oxamyl respecto al control (inoculado solo con nematodos y sin aplicacion de ningun tratamiento) que alcanzo valores de 244, 932±17, 500 huevos por planta. Cabe destacar el efecto de los tratamientos artemisa (AJ) +T8 y tagetes (TAC) +T8 los cuales propiciaron una ligera reduccion del numero de huevos de nematodos por planta, alcanzando valores de 223, 284±60, 699 y 240, 938±11, 138 huevos por rafz. Estos resultados indicaron el efecto que presentan estos compuestos para el control de nematodos en las dosis aplicadas. Evaluacion de la evolucion en la produccion de tomates en plantas infectadas con nematodos agalladores y tratadas con las formulaciones experimentales. Tras la cuantificacion de la produccion de tomates en las plantas tratadas con los diferentes productos experimentales se observo una mayor produccion total de tomates en las plantas tratadas con los extractos experimentales artemisa (AJ) +T8, tagetes (TAC) +T8 y T8 (FIG. 21). Alcanzando valores de obtencion de tomates notablemente superiores al control (sin infectar por nematodos). Estos resultados indicaron una elevada compatibilidad de dichos extractos experimentales para el aumento de la produccion y rendimiento de los cultivos. Adicionalmente, se observo que las plantas tratadas con artemisa (AJ) +T8 y tagetes (TAC) +T8 presentaron un mayor peso total de tomates que el resto de tratamientos (FIG. 22) , este hecho propiciarfa el uso de estas formulaciones experimentales para mejorar y optimizar la fructificacion en el cultivo de tomate. A su vez se observo en un estudio temporal como se produjo un inicio mayoritario en la produccion de tomates a partir del tercer mes de duracion del cultivo para todos los tratamientos ensayados. Se obtuvo una produccion mas temprana, aunque no muy abundante en los tratamientos Control, artemisa (AJ) +T8 y tagetes (TAC) +T8 (FIG. 23). Cabe destacar que, aunque la produccion de tomate se inicio 4 semanas mas tarde, se obtuvo un rendimiento en la produccion de tomates muy significativo en el tratamiento solo con T8 (quitosano) alcanzando valores de produccion en cuanto al numero de tomates superiores al control, indicando que este compuesto puede actuar como inductor tardfo de la fructificacion. En cuanto a la evolucion en peso de los tomates recolectados cabe destacar que los extractos tagetes (TAC) +T8 así como artemisa (AJ) +T8, presentaron mayor peso de tomates desde el principio del experimento alcanzando valores incluso superiores a los del control. Estos resultados indicaron que estas combinaciones fueron efectivas no solo para el manejo y control de nematodos, sino que tambien para el aumento del rendimiento y productividad del cultivo de tomate (FIG.24). El experimento de invernadero presento una evolucion satisfactoria desde el momento del trasplante hasta la completa madurez del cultivo, con las siguientes conclusiones: Los extractos vegetales experimentales en combinacion con el quitosano no presentaron ninguna toxicidad en plantas de tomate adultas. Todas las plantas infectadas con nematodos fitopatogenos y tratadas con las diferentes combinaciones experimentales presentaron un aumento en el porte de las mismas viendose traducido en un aumento en parametros con el peso fresco aereo y la longitud maxima radicular. Las plantas infectadas con nematodos agalladores y tratadas con el producto de Atlantica Agrfcola Nemagold presentaron rafces de mayor longitud respecto al control. Tras aplicar los criterios determinados por el Indice de agallamiento de Bridge and Page se determino que el oxamilo fue el compuesto con mayor actividad nematicida de todos los evaluados. El extracto de Aartemisa (AJ) +T8 fue la formulacion experimental con mejores resultados mostrando valores de afeccion por nematodos, segun mencionado indice, 1 punto menores 10 que el control. Las plantas tratadas con el nematicida oxamilo presentaron menor numero de huevos de nematodos en sus rafces que el resto de formulaciones experimentales. Los extractos de artemisa (AJ) y de tagetes (TAC) en combinacion con el quitosano (T8) favorecieron una reduccion de la proliferacion de nematodos fitopatogenos en la rafz 15 disminuyendo el numero de huevos presentes en la misma respecto al control. Las formulaciones experimentales tagetes (TAC) +T8, artemisa (AJ) +T8 y T8 favorecieron la fructificacion de tomates aumentando el numero de frutos recolectados a lo largo del experimento (4 meses). Las formulaciones de extracto de agetes (TAC) y extracto de artemisa (AJ) en combinacion 20 con el quitosano (T8) favorecieron el desarrollo de tomates alcanzando valores de peso superiores al control. Los extractos de artemisa (AJ) +T8 y de tagetes (TAC) +T8 pese a la infeccion con nematodos obtienen una produccion de frutos similar a la observada en el control.

Publicaciones:
ES2616141 (09/06/2017) - A1 Solicitud de patente con informe sobre el estado de la técnica
ES2616141 (29/05/2018) - B1 Patente de invención

Eventos:
En fecha 09/12/2016 se realizó Registro Instancia de Solicitud
En fecha 09/12/2016 se realizó IET1_Petición Realización IET
En fecha 12/12/2016 se realizó Admisión a Trámite
En fecha 12/12/2016 se realizó Aceptación Tramitación CAP
En fecha 12/12/2016 se realizó 1001P_Comunicación Admisión a Trámite
En fecha 28/12/2016 se realizó Suspenso en Examen Formal y Técnico
En fecha 03/01/2017 se realizó Publicación Suspenso Examen Formal
En fecha 28/02/2017 se realizó 3585X_Registro Solicitud Prórroga de Plazos
En fecha 01/03/2017 se realizó Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 01/03/2017 se realizó 1585X_Notificación Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 07/03/2017 se realizó Publicación Concesión Prórroga de Plazos (BOPI)
En fecha 11/04/2017 se realizó 3007 registro contestación al suspenso Examen Formal
En fecha 04/05/2017 se realizó Continuación del Procedimiento
En fecha 10/05/2017 se realizó Publicación Continuación del Procedimiento e Inicio IET
En fecha 31/05/2017 se realizó Realizado IET
En fecha 02/06/2017 se realizó Informe Estado de la Tecnica
En fecha 02/06/2017 se realizó 1109P_Comunicación Traslado del IET
En fecha 09/06/2017 se realizó Publicación Solicitud con IET
En fecha 09/06/2017 se realizó Publicación Folleto Solicitud con IET (A1)
En fecha 18/07/2017 se realizó 3585X_Registro Solicitud Prórroga de Plazos
En fecha 18/07/2017 se realizó Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 18/07/2017 se realizó 1585X_Notificación Concesión Prórroga de Plazos
En fecha 24/07/2017 se realizó Publicación Concesión Prórroga de Plazos (BOPI)
En fecha 28/11/2017 se realizó Reanudación Procedimiento General de Concesión
En fecha 04/12/2017 se realizó Publicación Reanudación Procedimiento General de Concesión
En fecha 26/02/2018 se realizó Publicación Traslado Observaciones del IET
En fecha 22/05/2018 se realizó Sin Modificación de Reivindicaciones
En fecha 22/05/2018 se realizó Concesión
En fecha 22/05/2018 se realizó 1203P_Notificación Concesión por Procedimiento General de Concesión
En fecha 22/05/2018 se realizó Entrega título
En fecha 29/05/2018 se realizó Publicación concesión Patente PGC
En fecha 29/05/2018 se realizó Publicación Folleto Concesión


Información sobre el registro de patente nacional por COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO con el número P201631565

El registro de patente nacional por COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO con el número P201631565 fue solicitada el 09/12/2016. Se trata de un registro en España por lo que este registro no ofrece protección en el resto de países. El registro COMPOSICIONES SINÉRGICAS DE QUITOSANO con el número P201631565 fue solicitada por UNIVERSITAT D'ALACANT / UNIVERSIDAD DE ALICANTE mediante los servicios del agente Ignacio Temiño Ceniceros.

Otras invenciones solicitadas por UNIVERSITAT D'ALACANT / UNIVERSIDAD DE ALICANTE

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Otras invenciones solicitadas a través del representante IGNACIO TEMIÑO CENICEROS

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Patentes en España

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